中国特发性无精子症和少精子症患者雄激素受体基因CAG重复多态性研究

目的分析中国特发性无精子症和少精子症患者雄激素受体(AR)基因(CAG)n微卫星多态性并探讨该多态性与精子生成障碍发生的关系。方法应用PCR和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析技术对52例少精子症患者和31例无精子症患者的外周血标本进行CAG重复数测定,分析该微卫星多态性和精子生成障碍发生的关系。结果少精子症患者组和无精子症患者组CAG重复数均数分别为22.19和22.13,CAG重复数≥28的百分率分别为1.9%和3.2%,比例逐渐升高。结论AR基因(CAG)n微卫星的CAG重复数在中国男性不育患者中呈现多态性,与精子生成障碍发生的关系有待进一步研究。

无精子症和严重少精子症患者Y染色体微缺失和基因缺失研究

目的研究中国特发性无精子症和少精子症患者Y染色体无精子症因子(AZF)区缺失和其中RBMY1A1、DAZ基因缺失。方法选取AZFa、b和c区6个序列标签位点(STS)对56例少精子症和33例无精子症患者进行外周血Y染色体微缺失分析,对缺失样本进行RBMY1A1和DAZ基因缺失分析。结果共确认6例患者发生Y染色体微缺失和基因缺失、占7%(6/89);其中5例AZFc/DAZ基因缺失,1例AZFb+c/RBMY1A1和DAZ基因缺失。结论AZF部分区域缺失的患者同时伴有与精子生成具有重要作用的基因缺失,并可能由此导致精子生成障碍。

散发性夜发额叶癫痫遗传学病因分析

目的研究中国夜发性额叶癫痫(nocturnal frontal lobe epilepsy,NFLE)散发患者遗传学病因,探讨烟碱乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)相关基因在NFLE发病机制中的作用。方法经临床资料、家族史及辅助检查综合诊断,收集77例中国非家族性NFLE患者,提取基因组DNA,聚合酶链反应扩增nAChR相关基因CHRNA4、CHRNB2及CHRNA2部分区域,确认是否存在突变。如存在突变,则进一步分析突变对蛋白质疏水性和二级结构造成的影响。结果发现1例6岁患儿存在1种CHRNA4的新型杂合错义突变,导致nAChR-α4亚单位第3、4跨膜区间胞内环405位的丝氨酸突变为苯丙氨酸(S405F)。在200例中国人群健康对照筛查中未见同样突变。突变对蛋白质疏水性及二级结构均有一定影响。结论中国人群散发NFLE病例中存在CHRNA4基因的S405F突变,可能是NFLE新型遗传学病因。

细胞外信号激酶蛋白5在卵泡刺激素介导的卵泡颗粒细胞甾体激素生成中的作用

目的研究细胞外信号激酶蛋白5(ERK5)在卵巢颗粒细胞甾体激素生成中的作用。方法采用Western blot检测在卵泡刺激素(FSH)刺激原代颗粒细胞甾体激素生成过程中ERK5的表达变化和激活情况,荧光共聚焦技术分析ERK5的亚细胞定位,腺病毒技术观察活化型ERK5和显性负性ERK5对颗粒细胞甾体激素生成的影响。结果 Western blot检测结果表明,FSH处理颗粒细胞后ERK5的表达随处理时间延长而下调,而ERK5活性形式的表达随处理时间延长而逐渐上升。荧光共聚焦技术分析结果显示,FSH的处理并没有明显影响ERK5在颗粒细胞中的定位。腺病毒技术观察结果发现,在细胞中联合感染活化型MEK5重组腺病毒和野生型ERK5重组腺病毒能促进FSH引起的细胞内StAR的表达升高和孕酮分泌,而显性负性ERK5重组腺病毒感染细胞则出现相反的效应。结论 ERK5可能促进了FSH介导的颗粒细胞甾体激素生成。

植物类雌激素杨梅素对结肠癌细胞系RKO生长的影响

目的检测一种植物类雌激素杨梅素对人结肠癌细胞系RKO生长的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测杨梅素对RKO细胞系生长的影响;流式细胞仪技术检测杨梅素对细胞周期的影响;半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)确定杨梅素对抑癌基因p16INK4a表达的影响。结果MTT法显示杨梅素处理组对结肠癌细胞系生长有明显抑制作用;流式细胞仪分析结果显示,经杨梅素处理后RKO细胞周期明显阻滞在G0/G1期;RT-PCR结果显示杨梅素恢复了RKO细胞系p16INK4a的转录。结论杨梅素对RKO细胞系生长有明显的抑制作用,杨梅素可能通过上调抑癌基因p16INK4a的表达使RKO细胞周期阻滞于G0/G1期。

MicroRNA-21在大鼠胚胎植入过程中的差异表达与调节

目的初步研究microRNA-21(miR-21)在大鼠胚胎植入过程中的作用。方法利用Northern印迹和原位杂交分析了miR-21在大鼠胚胎植入前期和植入期的表达差异,检测miR-21在假孕、人工诱导蜕膜化和延迟着床激活大鼠子宫中的表达模式,分析了17β-雌二醇和孕酮对于大鼠子宫miR-21表达的影响。结果 miR-21在植入前期和植入期的大鼠子宫中存在差异表达,在大鼠妊娠第5天miR-21的表达量开始增加,其主要分布在植入位点内腔基质细胞,在第5.5天子宫miR-21的表达量达到最高。在假孕的D4～D7大鼠子宫中miR-21表达无差异,在延迟着床激活模型中大鼠子宫miR-21的表达量明显增加,miR-21在诱导蜕膜化的大鼠子宫中表达也显著增加,17β-雌二醇和孕酮可以抑制大鼠子宫miR-21的表达。这些结果提示在植入期miR-21的表达增加主要是由胚泡引起的,并且其参与了蜕膜化过程。结论在大鼠妊娠早期,miR-21的表达增加可能有利于胚胎植入的发生。

巨细胞病毒原发感染与非原发感染的鉴别诊断方法

目的建立一种快速、简便和实用的测定巨细胞病毒IgG抗体亲和指数的方法,作为有效的诊断工具,用于区分孕妇巨细胞病毒近期原发与非原发感染(继发、再感染及持续感染)。方法用标准的间接ELISA技术测定巨细胞病毒IgG抗体亲和指数(CMV-IgGAI),以35mmol/L浓度的二乙胺(温和蛋白变性剂)作为洗脱液。结果通过比较4种温和蛋白变性剂对检测方法各个环节的影响,确定了检测方法的最佳工艺流程;对127份血清标本进行了检测,其中84例为既往感染标本、17例继发感染标本、15例可疑原发感染和11例原发感染标本,以CMV-IgGAI<40.0%作为诊断CMV原发感染的临界值,其方法的灵敏度为72.7%,特异性为98.8%,方法的可用度为73.5%。结论用35.0mmol/L浓度的二乙胺洗脱1次,10min的方法适用于CMV-IgGAI的测定,目前认为该测定联合CMV-IgM检测是区分原发与非原发CMV感染的最佳血清学方法之一。

测定巨细胞病毒特异性抗体亲和指数的诊断价值

目的以快速、简便的人巨细胞病毒特异性抗体亲和指数(CMV-IgG AI)检测方法作为有效的诊断工具,用于区分孕妇CMV原发感染与非原发感染。方法以标准的间接ELISA方法,8.0 mol/L尿素作为温和蛋白变性剂,用标准曲线方法定量测定标本中的CMV-IgG含量。结果共检测218例标本,其中187例为CMV既往感染标本,31例为继发或再感染、可疑原发感染和原发感染标本。以抗体亲和指数<35.0%作为阳性判断标准,此时方法的灵敏度为75.0%,特异度为91.4%,可用度为67.2%。既往感染、继发或再感染、可疑原发感染、原发感染4组的平均AI值分别是(61.42±25.69)%,(70.38±21.88)%,(66.73±23.62)%,(29.78±25.93)%,原发感染组与其它3组非原发感染比较,差异有统计学意义(P<0.01))。结论以8.0 mol/L尿素作为温和蛋白变性剂,用标准曲线方法定量测定标本中CMV-IgG含量适用于检测巨细胞病毒IgG抗体亲和指数(CMV-IgG AI),认为CMV-IgM联合CMV-IgG AI检测是区分原发与非原发感染的血清学方法之一。

巴马地区长寿老年人心血管疾病的危险因素调查

广西壮族自治区巴马地区是世界第五长寿之乡。这里的生活环境相对封闭，长寿老年人特殊的生活环境和遗传背景，为人类长寿遗传和老年人相关疾病的研究提供了重要的资源。既往的调查结果显示，巴马长寿者总体健康状况良好，高血压、冠心病的发病率低。随着人们的生活水平和生活方式的变化，我国心血管疾病发病率和病死率逐年增加。为了解长寿老年人心血管疾病相关危险因素，我们于2005年10月至2007年6月对世居巴马地区的长寿老年人进行了调查，现将结果报道如下。