长、短链探针以链延伸反应提高基因传感器检测MRSA灵敏度的实验研究

目的 利用链延伸反应的原理延长引物链以提高石英谐振式基因传感器表面的质量负载 ,从而提高传感器检测 MRSA的灵敏度。方法 以不对称 PCR的反应产物做为长链探针 ,人工合成的寡核苷酸片段为短链探针 ,在基因传感器阵列表面分别固定上金黄色葡萄球菌 mec A及 fem A的长链及短链探针共 4种探针片段 ,与相应的靶序列杂交后 ,加入 Klenow酶 ,37℃进行链延伸反应 1h。结果 长、短链探针均有效地固定在了传感器表面。mec A、fem A短链探针在链延伸反应前的检测灵敏度为 0 .5 nm ol/L,但经链延伸反应后检测灵敏度提高到了0 .0 5 nmol/L;而长链探针却无法与相应的基因组靶序列发生杂交。结论 短链探针链延伸反应有效地提高了石英谐振式基因传感器的灵敏度 ,但该法不适用于长链探针。

压电基因传感器检测系统的建立

目的：构建压电基因传感器阵列检测系统。方法：首先利用精细微加工法制作单个传感器，在此基础上先后构建了粘胶式以及夹具式2×5型传感器阵列。并自行开发研制自激式振荡电路、PESA V2.0版频率记录分析软件。将它们与计算机联用以构建传感器阵列检测系统。结果：成功地制造出了在气、液相中稳定振荡的单个传感器，构建的粘接式及夹具式传感器阵列各有其优缺点；自激式振荡电路有非常强的振荡能力，在液相中起振非常容易，其频率稳定度也可达实用要求。PESA V2.0版频率记录分析软件具有自行设置各初始参数，实时记录频率变化、自动绘制频率变化趋势图及分析结果等多项功能。结论：成功地构建了传感器阵列检测系统，搭建起一个基因检测的技术平台，为临床上病原性微生物的检测以及多种疾病的早期诊断提供一种新方法。