Ig/TCR基因重排在儿童急性T淋巴细胞白血病中的表达模式特点

目的:探讨免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因重排在儿童急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中的表达模式特点及其与临床生物学特征的相关性。方法:回顾性纳入首都医科大学附属北京儿童医院(我院)2005年1月1日至2008年12月31日收治的初治T-ALL患儿,分析其初诊时骨髓单个核细胞的Ig/TCR基因重排情况,根据重排情况分为阳性组和阴性组,比较不同组别的临床生物学特征。结果:①52例儿童T-ALL中男37例(71.2%),入院时中位年龄8.0(1.8~16.0)岁,初诊时WBC中位数为140.5(2.7~667.1)×10^9·L^-1,中危38例(73.1%)、高危14例(26.9%)。中位随访时间136.3(1.2~171.7)个月,长期完全缓解38例(73.1%)、复发10例(19.2%),其他原因死亡4例(7.7%)。②TCRB、TCRG、TCRD和IgH克隆性基因重排的发生率分别为85%、85%、38%和21%,94%的患儿检出至少1种基因重排,88%的患儿检出至少2种基因重排。TCRB、TCRD、TCRG和IgH重排分别以完全性Vβ-(Dβ)-Jβ、Vδ-Jδ、VγⅠ-Jγ1.3/2.3和DH-JH不完全重排为主。各种重排的胚系片段使用和连接区序列极具多样性。③10例复发患儿中有6例检测了复发时的Ig/TCR基因重排模式,4例与初诊时完全一致,2例发生改变。④SIL-TAL1融合基因阳性率在11例IgH重排阳性患儿中0%(0/14),在41例IgH重排阴性患儿中为34.1%(14/41),P=0.025。⑤TCRB基因重排阳性组高危比例(20.5%,9/44)低于阴性组(62.5%,5/8),P=0.025。TCRB或TCRG基因重排阳性组第33d缓解率(89.4%,42/44)高于阴性组(10.6%,5/8),P=0.022,第78dMRD水平≥10^-3的比例(10.8%,4/37)低于阴性组(50.0%,3/6),P=0.045。结论:儿童T-ALL初诊时Ig/TCR克隆性基因重排的胚系片段使用和连接区序列极具多样性,有助于进一步性MRD检测标志的筛选。

应用全外显子组测序发现儿童罕见综合征耳聋

目的探讨全外显子组测序方法对诊断儿童罕见综合征耳聋的意义。方法采用全外显子组测序技术对34例诊断为感音神经性听力损失患儿小家系进行分子病因学的检测和分析。结果19例患儿明确了分子病因,包括罕见的综合征耳聋4例,致病基因分别是HARS2、USH2A、GATA3和MITF;非综合征耳聋15例,包括GJB2基因突变8例,SLC26A4基因突变5例,MYO15A基因突变2例。HARS2基因的c.435_437del(p.K147del)和c.1403G>C(p.G468A)突变、USH2A基因的c.11389+1del突变、GATA3基因的c.1327delA(p.M443Wfs∗33)突变、MITF基因的c.627C>A(p.C209X)突变和MYO15A基因的c.8033_8057delinsG(p.N2678_D2686delinsS)突变均为首次报道。结论全外显子组测序技术有助于明确耳聋的致聋基因和突变,发现临床表型不明显的罕见综合征耳聋,并提示进一步完善相关系统或器官结构和功能的检查,对于临床诊断的准确性具有重要意义。

1~5岁儿童接种肺炎球菌结合疫苗和婴儿期常规免疫协同实施的思考

在肺炎球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccines,PCV)使用前,肺炎球菌性疾病(pneumococcal disease,PD)是全球<5岁儿童的常见感染疾病,也是致其死亡的重要原因。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)将PD列为需极高度优先使用疫苗预防的疾病。目前,PCV在我国内地还属于非免疫规划疫苗,接种对象包括所有≤5岁儿童,不同年龄段的推荐接种程序不同。为尽早获得PCV免疫的间接和直接保护效应,WHO主张引入婴儿期PCV常规免疫时,协同实施1~5岁儿童接种。但我国1~5岁儿童的PCV接种率较低,应提高相关认识,在坚持婴儿期常规接种的同时,促进1~5岁儿童接种,加强PD的预防。

2017-2020年我国儿童急性下呼吸道人腺病毒感染流行病学特征分析

目的 了解我国儿童急性下呼吸道人腺病毒(human adenovirus,HAdV)感染的流行病学特征及优势基因型别。方法 收集2017年6月-2020年4月我国南北方6家医院的急性下呼吸道感染(acute lower respiratory tract infection,ALRTI)住院儿童的呼吸道样本,使用多重呼吸道病毒检测试剂对常见呼吸道病毒进行检测。对HAdV阳性样本进行基因分型,并收集患儿的临床信息进行临床特征及流行病学分析。结果 本研究共纳入2 793例ALRTI患儿,其中143例HAdV阳性,检出率为5.12%。南北方检出率分别为6.37%(91/1 429)和3.81%(52/1 364),差异有统计学意义(χ^(2)=9.384,P=0.002),北方3~<6岁年龄组检出率最高,为5.94%;南方1~<3岁年龄组检出率最高,为9.37%。南方2019年春季和北方2019年夏季HAdV检出率最高,分别为10.43%(12/115)和13.70%(10/73)。92例HAdV阳性样本被成功分型,以B种的3型(35例)和7型(33例)居多;北方以B种的3型(19例)、7型(8例)和E种的4型(7例)多见,南方流行的优势型别为B种的3型(16例)和7型(25例)。患儿以肺炎为主要诊断(121例),其中重症肺炎15例,HAdV-7型感染10例。46.15%的患儿合并其他病毒感染,其中呼吸道合胞病毒(18例)为最常见的混合感染病毒。结论 HAdV是2017-2020年我国儿童ALRTI的重要病毒病原之一,感染常年存在;南北方流行的HAdV均以B种为主;HAdV感染重症肺炎以HAdV-7型为主。

2016-2021年我国儿童病毒性心肌炎流行特征及疾病负担分析

目的分析我国2016-2021年儿童病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)的流行特征及疾病负担,为我国儿童VMC的诊疗及防控提供基础参考数据。方法通过福棠儿童医学发展中心收集我国2016-2021年23个省份(直辖市)27家儿童医院或妇幼保健院中的VMC住院患儿病历首页信息,对我国儿童VMC流行病学、死亡情况及疾病负担进行描述性统计分析。结果本研究共纳入7647599例住院患儿,其中VMC患儿1646例。2016-2021年VMC住院患儿人数年度分布分别为173例、227例、313例、301例、295例和337例,住院占比分别为14.9/10万人、17.9/10万人、23.0/10万人、20.5/10万人、26.5/10万人和26.4/10万人;VMC患儿的住院占比总体呈逐年升高趋势(P<0.001)。不同年龄组患儿的住院占比呈现随发病年龄增大而升高的趋势(P<0.001),12-≤18岁年龄组患儿的住院占比最高。西北地区的住院患儿人数(625例,38.46%)及住院占比(64.9/10万人)最高,华东地区次之。本研究中共有68例死亡患儿,VMC住院患儿病死率为4.13%,不同性别、年龄组、季节、年份的VMC住院患儿病死率无明显统计学差异。所有VMC患儿住院时长中位数为10天(IQR 6,21),住院费用中位数为11842.30元(IQR 6969.22,19714.78)。其中,死亡患儿住院时长中位数仅1天(IQR 1,3),而住院费用中位数可达8874.03元(IQR 5277.94,56151.59),VMC患儿死亡发生迅速,造成严重的疾病负担。结论VMC患儿住院占比呈逐年升高趋势,12-≤18岁年龄组患儿住院占比最高;VMC住院患儿总体病死率可达4.13%,且死亡发生迅速。

NBAS基因的生物学功能和相关疾病的研究进展

神经母细胞瘤扩增序列(NBAS)是一个在神经母细胞瘤系发现的高度保守的基因,定位于人类2号染色体p24.3,编码Synaxin⁃18复合体的一个组成部分,其功能主要是参与高尔基体至内质网的逆向转运和无义介导的mRNA降解。NBAS基因在30余种组织中广泛表达,提示其可能在人体内行使重要的功能。2010年和2015年,NBAS先后被鉴定为SOPH综合征和发热相关急性肝衰竭的致病基因。近期发现,NBAS基因突变也会导致免疫系统受累,引发免疫缺陷。本文就NBAS基因的主要生物学功能、基因突变的致病性及致病机制进行综述。

快速眼动睡眠相关阻塞性睡眠呼吸暂停儿童的临床特点及预后分析

目的:分析快速眼动睡眠相关阻塞性睡眠呼吸暂停(REM-OSA)儿童的临床特点及预后情况。方法:回顾性分析2017年12月至2021年4月就诊于首都医科大学附属北京儿童医院,经多导睡眠监测(PSG)诊断为中重度OSA,进行腺样体扁桃体切除术,且在术后6个月完成复诊的2~14岁儿童62例的临床资料。其中男45例(72.6%),女17例(27.4%),年龄2.0~12.3(5.9±2.4)岁。所有儿童在基线时均完成临床资料收集、PSG、OSA-18生活质量问卷和儿童睡眠问卷-睡眠呼吸障碍分量表,术后6个月复查PSG和OSA-18生活质量问卷。根据基线PSG中快速眼动睡眠期阻塞性呼吸暂停低通气指数(OAHI)与非快速眼动睡眠期OAHI比值是否≥2,将患儿分为REM-OSA组(33例)和非REM-OSA组(29例)。对比2组患儿基线PSG参数及量表得分、术后6个月治愈率及OSA-18生活质量问卷结果,使用SPSS 23.0进行统计学分析。结果:2组患儿在年龄、性别、体质量指数(BMI)、颈围/身高比、是否超重或肥胖、病史时间、扁桃体和腺样体大小上差异无统计学意义(P值均>0.05)。REM-OSA组的氧减指数、SpO_(2)<90%占总睡眠时间的比例高于非REM-OSA组(Z值分别为-2.723、-3.414,P值分别为0.006、0.001),而最低SpO_(2)低于非REM-OSA组(Z=-3.957,P<0.001)。REM-OSA组阻塞型呼吸暂停占总呼吸事件的比例(与解剖因素相关)高于非REM-OSA组(t=2.840,P=0.006),而中枢型呼吸暂停占总呼吸事件的比例和觉醒指数(均与功能因素相关)低于非REM-OSA组(t=-2.597、P=0.012,Z=-2.956、P=0.003),其余PSG指标两组间差异无统计学意义(P值均>0.05)。在不同基线OAHI情况下,2组患儿术后6个月OSA治愈率的变化趋势有交互效应(χ^(2)=4.282,P=0.039)。结论:解剖因素和功能因素在REM-OSA与非REM-OSA患儿病因中所占的权重不同,2组患儿术后OSA治愈率在不同基线OAHI的情况下变化趋势相反。

2016—2020年我国儿童疱疹性咽峡炎住院病例流行特征及疾病负担分析

目的分析我国2016—2020年儿童疱疹性咽峡炎(herpangina, HA)的流行特征及疾病负担, 为我国儿童HA的诊疗及防控提供基础参考数据。方法通过福棠儿童医学发展研究中心收集2016—2020年我国23个省份的27家儿童医院或妇幼保健院中HA住院患儿的病历首页信息, 对我国儿童HA进行流行病学、重症情况以及疾病负担等进行描述性统计分析。结果 2016—2020年全国27家儿童医院或妇幼保健院共报告HA住院病例24 099例;其中, 男女比为1.46∶1, 年龄≤6岁的住院患儿为23 432例(97.23%)。除2020年外, 每年HA发病都集中在4~9月份, 6~7月份为发病高峰期;华东地区统计住院患儿最多, 为8 520例(35.72%)。在研究期间, 全国HA患儿的住院占比是0.42%(24 099/5 790 910);东北地区的住院占比最高, 为0.69%(1 720/249 244)。本研究中一共有1 510例(6.27%)患儿表现为重症, 男女比为1.35∶1;其中, 1 326例(87.81%)患儿年龄≤3岁, 且年龄在28天-≤1岁的患儿重症率最高(7.47%, 784/10 494)。HA住院患儿医疗费用的中位数为3 570.41元(IQR:2 698.03, 4 747.30), 住院时长的中位数为5天(IQR:4, 6)。结论我国儿童HA发病集中在夏季, 好发于年龄≤6岁的儿童;同时, 我国HA住院患儿人数多, 所产生的花费较高, 造成了一定的疾病负担。

一例马凡综合征家系患者的临床表现及遗传学分析

目的:通过对1例超声心动图表现为主动脉夹层、二尖瓣前叶脱垂并有主动脉夹层家族史的马凡综合征患者进行基因检测,明确其可能的致病变异基因,为临床诊断及遗传咨询提供理论依据。方法:对先证者行全外显子测序,利用生物信息学方法分析遗传性主动脉瘤相关基因,依据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)指南鉴定候选致病突变;收集患者家系成员共计11人样本,利用Sanger测序对患者及家系成员的候选致病位点进行检测。结果:高通量测序结果提示患者携带原纤维蛋白1基因(FBN1)(NM_000138.5)c.7412delC杂合变异,位于60号外显子,Sanger测序结果表明该变异在家系内与疾病共分离。该位点为移码突变;依据ACMG指南,该变异为致病性变异[致病变异分类非常强(PVS1)+中等证据2(PM2)+辅助证据1(PP1)]。结论:该马凡综合征家系的致病原因为FBN1基因的c.7412delC突变,本研究为该家系的分子诊断、分子分型及后续遗传咨询及治疗选择提供了理论依据,丰富了中国马凡综合征患者FBN1基因的变异谱。

TRPV4基因变异引起先天性骨病遗传学分析

目的对4例不同严重程度的先天性骨病患儿进行基因诊断以明确其遗传学病因。总结临床特点并进行基因型-表型分析。方法收集4例患儿的临床资料,采集患儿及父母外周血并提取DNA,患儿行全外显子组测序,根据ACMG遗传变异分类标准与指南判断变异位点致病性,对患儿及父母进行Sanger测序验证。结果4例患儿均携带TRPV4基因杂合变异,其中2个错义变异遗传自患病父母,1个缺失插入变异和1个错义变异为新生变异,分别为c.2077 G>A(p.Val 693 Met),c.1199 G>A(p.Arg 400 Gln),c.1657 delinsACTA(p.Tyr 553 delinsThrAsn),和c.259 G>A(p.Glu 87 Lys),以上位点国内外未见报道。1-3号患儿有不同程度的身材矮小,4例患儿均有先天性脊柱侧弯及其他骨骼系统异常。分别诊断为轻型变形性骨发育不良、3型常染色体显性短躯干、变形性骨发育不良合并类扭伤型侏儒及经典型变形性骨发育不良。携带相同变异的患儿父亲/母亲有轻度的骨骼畸形。结论TRPV4基因不同位点变异引起的先天性骨病表型互有重叠但严重程度差异较大,可根据分子诊断结果进行鉴别诊断及临床干预。

联合检测E2F3a和CASP8AP2表达水平在儿童急性淋巴细胞白血病预后中的意义

目的探讨联合检测E2F3a和CASP8AP2的表达水平在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）预后判断中的意义。方法选取2008年3月至2010年7月首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心收治的初诊ALL患儿141例，其中男97例，女44例；确诊时年龄1.2～15.5岁，中位数5.2岁。采用实时荧光定量PCR（qPCR）方法检测141例ALL患儿的E2F3a和CASP8AP2的基因表达水平。利用受试者工作特征（ROC）曲线确定E2F3a和CASP8AP2表达水平的最佳分界点，将患儿分为高表达组和低表达组，比较其预后差异。Cox回归方法分析E2F3a和CASP8AP2的联合表达水平的预后意义。结果E2F3a和CASP8AP2双低表达组儿童ALL的5年无复发生存（RFS）率、无病生存（EFS）率和总生存（OS）率分别为（58.9±10.0）%、（56.0±9.9）%和（72.0±9.0）%，均明显低于双高表达组[（94.9±2.5）%、（93.7±2.7）%和（96.2±2.2）%]，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。E2F3a和CASP8AP2 2个基因均低表达的患儿与其他患儿相比，其预后很差；2个基因均低表达与MLL重排、诱导治疗结束时微小残留病水平是儿童ALL的独立预后因素。结论初诊E2F3a和CASP8AP2低表达的ALL患儿预后差，联合分析E2F3a与CASP8AP2 2个基因的表达水平能更准确地判断预后、预测复发。

某三级医院临床医务人员与基础科研人员合作实践

科学研究是医学发展的重要推动力, 医院临床医务人员与基础科研人员开展良好合作有利于优势互补, 推动医院科研发展和诊疗水平的提升, 助力医院高质量发展。2017年3月以来, 某三级甲等儿童医院开展临床医务人员与基础科研人员合作实践, 通过组建临床-基础科研融合团队、实施共同主任制度、建立联合党支部、加强与高校及科研院所合作、推动合作研发和成果转化以及完善科研绩效考核管理体系等, 全面推动临床与基础科研的深入合作。2017—2022年, 医院建立了跨单位临床与基础研究联合实验室5个, 获批国家自然科学基金重大项目2项, 临床与基础研究科室联合发表SCI论文122篇, 共同开展科研项目71项, 实践取得良好成效, 为同等规模医院开展临床医务人员与基础科研人员合作提供参考。

重视呼吸道感染病原学检测方法的合理应用和结果解读

病原学检测在呼吸道感染的诊疗中具有重要作用,但不同的病原学检测方法各有优缺点。临床医生需要根据患者的临床表现、相关流行病学等信息提示和疑似的病原体种类选择合适的检测方法。不同病原学实验室检测方法结果的临床意义存在差异,临床医师也需要结合疾病的季节性、患者的年龄、临床表现和病程等方面信息综合分析检测结果的临床意义。危重和疑难呼吸道感染疾病的病因复杂,单一的检测结果往往不足以协助临床做出反映疾病病原体的准确判断。临床医生需了解每种病原学检测方法的原理、适用的样本类型及其优缺点,合理选择病原学检查方法,并结合临床综合分析,对呼吸道感染的病原体做出精准判断。

自噬与NLRP3炎症小体的相互作用

自噬是一种普遍存在的细胞内稳态机制,通过将细胞质成分运送到溶酶体进行降解,以抵抗病原体感染并促进氨基酸循环。NLRP3炎症小体是一种多蛋白复合物,在多种内源和外源性刺激下被激活,介导促炎细胞因子的分泌,参与炎症的发生。自噬功能失调可导致NLRP3炎症小体的过度激活,引起各种炎症性疾病以及癌症的发生。自噬作为NLRP3炎症小体的一种重要调节方式,可以通过去除NLRP3炎症小体的激活信号、包裹和降解其成分来调控炎症小体。此外,自噬在调控IL-1β的分泌中也起着重要作用。同样,NLRP3炎症小体也调控自噬过程,以平衡宿主防御所需的适当炎症反应以及预防过度、有害炎症的发生。因此,阐明这两个生物学过程之间的相互作用,能够加深对相关疾病发病机制的认识,为疾病治疗及药物研发提供新的思路和理论基础。

结核分枝杆菌蛋白Rv0309通过蛋白STUB1抑制巨噬细胞自噬对耻垢分枝杆菌胞内存活的影响

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)蛋白Rv0309促进耻垢分枝杆菌(Ms)在巨噬细胞胞内存活的分子调节机制。方法以Ms为研究结核分枝杆菌的模型,构建带有对照组pMV261-3*flag空载质粒和实验组pMV261-Rv0309-3*flag质粒的重组Ms并感染RAW264.7细胞。通过计数菌落形成单位(CFU),探索蛋白Rv0309对Ms胞内存活的影响。通过质谱法筛选蛋白Rv0309与宿主相互作用的蛋白,采用免疫共沉淀法(Co-IP)验证宿主蛋白STUB1可与蛋白Rv0309相互作用。敲减RAW264.7细胞STUB1基因后感染Ms,计数CFU,探索STUB1基因敲减后,蛋白Rv0309对Ms胞内存活的影响。敲减RAW264.7细胞STUB1基因后感染Ms,收样后进行Western blot实验,探索STUB1基因敲减后,蛋白Rv0309对巨噬细胞自噬功能的影响。使用GraphPad Prism 8软件进行统计分析,本实验选择t检验进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果Western blot显示蛋白Rv0309表达于耻垢分枝杆菌体内并分泌到胞外。感染THP-1巨噬细胞实验在24 h时实验组Ms-Rv0309的CFU高于对照组Ms-pMV261,差异有统计学意义(P<0.05)。感染RAW264.7巨噬细胞实验结果趋势与感染THP-1巨噬细胞相同。免疫共沉淀(Co-IP)结果显示免疫沉淀(IP):Flag和IP:HA结果中出现对应的Flag和HA条带。敲减STUB1的实验组(siRNA-STUB1组)CFU水平显著高于未敲减STUB1对照组(NC组)CFU;与对照组Ms-pMV261相比,Ms-Rv0309组CFU均显著高于Ms-pMV261组。实验组Ms-Rv0309的LC3Ⅱ条带在对应时间灰度均浅于对照组Ms-pMV261,8 h时结果最显著(LC3Ⅱ/β-actin:0.76±0.05 vs 0.47±0.07),差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-STUB1组LC3Ⅱ条带在对应时间灰度均浅于NC组;对比Ms-pMV261和Ms-Rv0309菌株感染的CFU结果发现,与Ms-pMV261组相比,在对应时间LC3Ⅱ条带灰度Ms-Rv0309组更浅。结论MTB蛋白Rv0309能够成功表达于耻垢分枝杆菌并分泌到胞外,可抑制巨噬细胞的自噬过程。蛋白Rv0309与宿主蛋白STUB1相互作用,抑制巨噬细胞自噬促进Ms胞内存活。

KMT2A基因新突变导致Wiedemann-Steiner综合征1例并文献复习

目的报道1例Wiedemann-Steiner综合征(WDSTS)患儿的临床特点,并予以基因检测,干预治疗,以提高对该病的认识。方法收集1例WDSTS患儿的临床资料,予以人重组生长激素(rhGH)联合促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)治疗,对先证者及其父母进行全外显子测序,并系统复习相关文献。结果患儿女性,5岁时因身材矮小就诊。身高100cm(-2.4 SD),反应较迟钝,头发浓密,后发际低,浓眉,眼距增宽,鼻梁宽,指趾粗短,项背部和双侧前臂、双下肢多毛;生长激素激发试验峰值为26.6 ng/ml。患儿10.4岁因乳房增大数日再次就诊时,身高120 cm(-3.58 SD),双侧乳房B2,骨龄11.4岁,rhGH联合GnRHa治疗2.5年,之后单用rhGH治疗1.1年后停药。14.9岁时身高150 cm,骨龄14岁,近遗传靶身高(153cm)。基因检测结果显示,患儿KMT2A基因第27外显子变异,突变位点为c.10051delA(P.Thr3351Leufs*17),父母均未检测到此位点突变。检索文献,包括本文在内的71例WDSTS患儿,其临床主要特征为智力低下(70/71)、特殊面容(70/71)、身材矮小(50/71)、多毛症(39/71)。结论临床上身材矮小伴有特殊面容,多毛症,智力低下者应考虑WDSTS,KMT2A c.10051delA(p.Thr3351Leufs*17)为新报道的变异,GH联合GnRHa可有效改善WDSTS矮小合并青春发育提前患儿的成年身高,为首次报道。