兔病毒性出血症疫苗免疫剂量与抗体消长规律的研究

兔病毒性出血症（RHD）俗称兔瘟，是由兔出血症病毒（RHDV）引起的兔急性、败血性、高度接触性的传染病，常出现暴发性流行，发病率和死亡率极高。RHD目前尚无有效的治疗药物，主要通过接种疫苗进行预防。本文通过检测不同目龄兔的母源抗体、接种不同剂量的疫苗进行抗体消长规律研究，为了解抗体效价与保护率之间的关系，制定合理的免疫程序提供理论依据和详实的技术资料。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白CD_4^+ T细胞表位优势区的鉴定

采用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)临床分离株的M基因(525 bp),通过设计4对引物,把M蛋白分成4段K1(78-112)、K2(98-131)、K3(118-153)、K4(139-174),分别扩增相应基因M1、K1、K2、K3和K4,连接pET-32a(+)表达载体,经鉴定后转化Escherichia coliBL21,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot检测结果显示,分别在相对分子质量30.8×103和24.4×103位置出现目的条带,重组蛋白均可与阳性血清发生特异反应。将蛋白M1免疫BALB/c小鼠,于第三次免2周后从小鼠脾脏分离淋巴细胞,分别用K1、K2、K3、K4蛋白进行体外刺激。流式细胞仪检测分泌IFN-γ细胞因子的T细胞的频率,K1蛋白刺激组显著高于其他组和对照组(P≤0.01)。结论:M1蛋白K1(78-112)段为T细胞表位优势区。

不同稀酸制备革兰氏阳性增强基质(GEM)颗粒的比较

本研究旨在比较不同稀酸制备革兰氏阳性增强基质(GEM)颗粒的效果。首先将3种不同的稀酸[硫酸(H2SO4)、盐酸(HCl)、三氯乙酸(TCA)]煮沸,制备GEM颗粒,分别比较得率(细菌计数)、蛋白去除率(SDSPAGE和SDS解离蛋白定量分析)以及GEM颗粒与锚钩蛋白(PA)的亲和活性等,最后进行4℃以及冷冻干燥后4℃下GEM的保存期研究。结果显示,0.025 mol/L的H2SO4制备GEM颗粒得率为89.8%,蛋白去除效果和锚定活性均较好。0.050 mol/L HCl与0.100 mol/L HCl制备的GEM颗粒蛋白质去除效率无显著差异,0.050 mol/L HCl制备GEM的得率(99.7%)高于0.100 mol/L HCl(86.5%),但0.050 mol/L HCl制备的GEM颗粒与PA的锚定活性不及0.100 mol/L HCl制备的GEM颗粒。不同浓度TCA制备的GEM颗粒得率、锚定活性均较好,但蛋白质去除效果较差。GEM颗粒4℃保存18个月,其活性不受影响,且冷冻干燥对GEM颗粒活性无影响。0.025 mol/L的H2SO4和0.100 mol/L的HCl可制备高质量的GEM。

TNF-α对人脐静脉内皮细胞ICAM-1和VCAM-1表达的影响

TNF-α是一种由活化的单核巨噬细胞产生的促炎症细胞因子，可引起血管内皮细胞功能障碍，继而产生多种细胞因子，如ICAM-1、VCAM-1等，从而引起血管炎症反应。

氯化锦葵色素-3-半乳糖苷对TNF-α诱导内皮细胞炎症的抑制作用

目的:研究氯化锦葵色素-3-半乳糖苷对细胞肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor-α,TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(human vascular umbilical endothelial cells,HUVEC)所产生炎症的抑制作用。方法:设立分组,空白组(二甲基亚砜)、10μg/L TNF-α刺激组、浓度为1、10、50、100μmol/L氯化锦葵色素-3-半乳糖苷+10μg/L TNF-α刺激组,通过酶联免疫吸附剂测定方法检测细胞上清中可溶性细胞间黏附因子(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)蛋白含量的变化;用实时荧光定量聚合酶链式反应检测细胞中ICAM-1 mRNA表达量变化;Western blotting检测ICAM-1及核因子κB抑制蛋白(IκBα)蛋白含量的变化;通过免疫荧光方法测定核转录因子κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)核异位的变化。结果:氯化锦葵色素-3-半乳糖苷呈浓度依赖性的抑制TNF-α诱导HUVEC相应蛋白表达,同时结果显示抑制作用与NF-κB信号通路有关。结论:氯化锦葵色素-3-半乳糖苷抑制TNF-α诱导HUVEC的炎症反应。一般心血管疾病产生的原因中包括因促炎症因子引起的内皮功能障碍及产生的炎症,氯化锦葵色素-3-半乳糖苷的抗炎症作用为防治心血管疾病提供了一定的理论基础。

兔出血症病毒在小鼠体内分布及免疫试验

应用纯化兔出血症病毒(RHDV)接种小鼠3 d后剖杀,分离组织,通过电镜观察、血凝试验(HA)、RT-PCR,进行体内分布检测;同时将小鼠接种3次后10 d,分离脾淋巴细胞进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测。电镜观察未见到病毒粒子;HA检测结果为肝脏的HA价最高,肺脏最低;RT-PCR未检测到目的基因;WST检测结果表明,免疫组刺激指数高于对照组;免疫组的IFN-γ和IL-2检测指数高对照组;IL-4检测结果低于对照组。RHDV接种小鼠分离的肝脏具有血凝性,能产生良好的细胞免疫反应。

含不同个数基序乳酸乳球菌肽聚糖锚钩蛋白结合活性比较

【目的】比较两种含不同个数基序乳酸乳球菌肽聚糖锚钩蛋白(protein anchor,PA)的结合活性。【方法】首先应用PCR技术分别扩增得到含有2个或3个自溶素基序(Lysin Motif,Lys M)基因片段的PA2与PA3;然后应用p ET-32a(+)质粒构建原核表达载体,将其转化大肠杆菌BL-21(DE3),进行诱导表达,获得目的蛋白;最后将经复性后的PA2、PA3融合蛋白与GEM(Gram-positive Enhancer Matrix,GEM)颗粒结合,经Western blot、透射电镜与SDS-PAGE进行结合鉴定与结合活性比较分析。【结果】融合蛋白PA2、PA3复性后都能与GEM结合,PA3与GEM颗粒的结合活性明显好于PA2。【结论】含有3个Lys Ms的PA对GEM的结合活性明显优于含有2个Lys Ms的PA。本研究可为进一步完善乳球菌外壳-蛋白锚钩展示系统提供理论基础。

氯化锦葵色素-3-O-葡萄糖苷对TNF-α诱导内皮细胞炎症的抑制作用

目的研究氯化锦葵色素-3-O-葡萄糖苷(Mv-3-glc-Cl)对细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)所产生炎症的抑制作用。方法实验分为,空白组(DMSO)、10 g/L T NF-α刺激组、浓度为1、10、50、100 mol/L MV-3-gle-Cl+10 g/L TNF-α刺激组,通过ELISA方法检测细胞上清中可溶性单核细胞趋化蛋白(MCP-1)蛋白含量的变化;用实时荧光定量PCR检测细胞中MCP-1 mRNA表达量变化;Western blot检测IκBα蛋白含量的变化;通过免疫荧光方法测定核转录因子κB的核异位变化。结果 Mv-3-glc-Cl呈浓度依赖性的抑制细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MCP-1蛋白表达,其抑制作用可能与NF-κB信号通路有关。结论 Mv-3-glc-Cl对TNF-α诱导HUVEC的炎症反应起到抑制作用。