油菜蜂花粉蛋白水解度测定方法比较

采用Alcalase2.4LFG水解油菜蜂花粉蛋白,比较pHstat法、OPA法和TNBS法测定蜂花粉蛋白水解度的差异。水解118min后,pHstat法、OPA法和TNBS法测得的水解度分别为24.7%﹑13.4%﹑6.6%。由于OPA试剂和甘氨酸﹑半胱氨酸﹑赖氨酸反应生成的化合物在340nm波长处的吸光度较低,致使OPA法测得的水解度低。TNBS试剂和ε-NH2的作用不稳定,也可能是由于TNBS试剂产生的发光物使测定结果降低。在水解度较低的情况下,α-NH2平均解离度的变化可以忽略,pHstat法测得的水解度比较准确。

气相色谱-质谱法测定蜂王浆中的植物甾醇组成

为探明蜂王浆中的植物甾醇组成,蜂王浆样品经冻干、萃取得到王浆脂类物质,再经过皂化、衍生后使用HP-5MS柱进行分离,采用GC-MS对蜂王浆中甾醇类物质进行鉴定,并用GC-FID内标法进行定量分析。结果表明:蜂王浆中除含有少量胆固醇外,还含有25-羟基-24-甲基胆甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇、Δ5-燕麦甾醇、Δ7-燕麦甾醇等植物甾醇;蜂王浆中总甾醇含量在51mg/100g鲜王浆以上。其中,25-羟基-24-甲基胆甾醇、菜油甾醇、β-谷甾醇和Δ5-燕麦甾醇含量较高,分别占总甾醇含量的36.79%、6.30%、19.75%和27.99%。

薄层层析-生物自显影法筛选油菜蜂花粉中活性成分

采用薄层层析-生物自显影法筛选油菜蜂花粉中清除DPPH自由基的活性成分和抑菌活性成分。结果显示:油菜蜂花粉中清除DPPH自由基的黄酮类活性成分主要以苷的形式存在,酸解后生成了包括槲皮素和山奈酚在内的多种抗氧化成分;在Rf值0.29和0.86处存在抑菌活性成分,不同显色方法确认,抑菌活性成分的种类可能包括酚类、鞣质、黄酮类或皂苷类。

油菜蜂花粉ACE抑制活性水解物的制备及分离

采用4种蛋白酶水解油菜蜂花粉蛋白制备ACE抑制活性物质,高效液相色谱法测定油菜蜂花粉蛋白水解物对ACE的抑制率。结果表明:油菜蜂花粉蛋白酶水解物具有ACE抑制活性,水解物对ACE的抑制活性差异显著(P<0.05),其中碱性蛋白酶>中性蛋白酶>木瓜蛋白酶>酸性蛋白酶,碱性蛋白酶水解物的IC50为0.35mg/mL。4种蛋白酶水解物经BioP-2凝胶分离后,ACE抑制活性较强的组分主要集中在保留时间70～120min,在此区间碱性蛋白酶水解物分离组分对ACE的抑制率达到90%以上,分子质量在376.4～1355D之间。