兰花斑点病毒及其检疫重要性

兰花斑点病毒是一种主要由加州短须螨传播的弹状或杆状的兰花病毒,会导致兰花产生褪绿斑或坏死斑症状。其分布包括亚洲、欧洲、大洋洲、美洲和非洲,能够侵染50种以上的兰花。它广泛的分布和寄主范围对世界兰花产业有巨大的危害性,而国内尚缺乏对兰花斑点病毒的系统研究。本文主要从传统生物学和分子生物学等方面对兰花斑点病毒进行简要评述,并探讨了它的检疫重要性。

柱前衍生-气相色谱-质谱联用法同时测定茯苓中的可溶性糖与三萜酸

[目的]通过建立柱前衍生-气相色谱-质谱(GC-MS)法实现茯苓(Poria cocos)各成分的快速高效分离检测,为茯苓有效成分的分析提供新方法并为茯苓原料品质判断提供参考.[方法]采用超声辅助提取法,以反油酸为内标物,甲氧胺(MOX)和N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺[含1%(质量分数)三甲基氯硅烷](MSTFA+1%TMCS)为肟化-硅烷化衍生试剂,采用GC-MS同时检测茯苓中的果糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、茯苓酸、茯苓新酸A和茯苓新酸B.[结果]优化后的衍生条件为:200μL茯苓的甲醇提取液氮气吹干后,加入50μL MOX,于40℃反应2 h,然后加入250μL(MSTFA+1%TMCS),于40℃下反应30 min.衍生后的目标化合物在40 min内完成分离分析,线性关系良好,相关系数均在0.9935以上,该方法的定量限为0.008~1.000μg/mL,检测限为0.003~0.300μg/mL.茯苓样品加标回收率为82.0%~122.4%,相对标准偏差为1.05%~4.43%.[结论]本方法样品用量少,结果稳定且灵敏度高,可用于检测茯苓样品中可溶性糖和微量的三萜酸类化合物,同时也为检测其他样品中的三萜酸类化合物提供更多的选择.

二温式多重RT-PCR同时检测两种主要兰花病毒的研究

根据建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)两种主要兰花病毒的保守序列设计特异性引物,建立了二温式多重RT-PCR同时检测两种病毒的检测方法。用该方法对感染两种病毒的植株总RNA模板进行扩增,结果同时得到2条大小与实验设计相符的769bp(Cy MV)、1000bp(ORSV)的特异性扩增带。用该方法对随机抽取的39个蝴蝶兰样品进行检测,结果11个样品检测出Cy MV,阳性率28.2%;24个样品检测出ORSV,阳性率61.5%;6个样品同时检测出两种病毒。

齿兰环斑病毒的鉴定及其抗血清的制备与应用

根据病毒生物学特性、粒体形态和血清学性质等初步确定从在厦门地区种植的表现为褪绿、褐色坏死斑症状的卡特兰(Cattleya)病株上分离的一个病毒分离物为齿兰环斑病毒(Odontoglossumringspotvirus,ORSV)。通过摩擦接种6科27种(或品种)指示植物,结果其中4科8种(或品种)表现症状,与烟草花叶病毒不同;理化性质试验表明稀释限点为5×10-5,致死温度为92℃～94℃,体外存活期超过3个月。提纯病毒为长约300nm,宽约18nm杆状粒体。SDS-PAGE电泳分析表明其外壳蛋白分子量约为17kDa。该分离物与ORSV抗血清具有强阳性反应、而与TMV抗血清反应微弱,认为该病毒为ORSV分离物。用纯化病毒免疫家兔,成功地制备出特异性抗血清,并通过Dot-ELISA法对厦门地区种植的兰花病株进行了检测研究。

分子检测韭葱黄条病毒的研究

韭葱黄条病毒(Leek yellow stripe virus,LY SV)为马铃薯Y病毒组(Potyviridae)的典型成员, 是危害葱属作物的主要病毒之一。该病毒最早由 Bos等在1978年鉴定并命名,目前在全世界范围内均有广泛分布。LYSV在电镜下呈11-12 nm ×820 nm长的线状颗粒,为正义单链RNA病毒, 基因组全长10 142 bp,5'端具有病毒基因组结合蛋白VPg,3'端具有Poly(A),基因组含一个开放阅读框(ORF),翻译先产生一个具有蛋白酶功能的多聚蛋白,再自身酶解成包括外壳蛋白在内的十个多肽。

竹叶兰的无菌播种快繁技术研究

以竹叶兰种子为外植体进行无菌播种,成功诱导原球茎并再生植株,建立其快繁体系。试验结果表明:(1)1/2 MS+香蕉泥30.0 g/L为最佳种子萌发与原球茎诱导培养基;(2)1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1mg/L+香蕉泥30.0 g/L为最佳芽增殖培养基,且芽生长健壮;(3)1/2 MS+IBA 0.5 mg/L为最适生根培养基。

建兰花叶病毒外壳蛋白基因和3＇UTR序列测定与分析

采用单链构象多态性分析从建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)的8个分离物筛选得到5个存在遗传变异的分离物,并测定了外壳蛋白(coat protein,CP)基因和3′非编码区(3′UTR)序列,经序列分析表明5个分离物与其他分离物间的CP核苷酸和氨基酸序列相似性分别为87.1%～99.9%和91.1%～99.6%,属于亚组A成员。CP基因不同片段受到正选择压力的作用不一样,C端受到负选择压力的作用不易发生变异,而N端受到正选择压力的作用容易发生变异。通过RNAsharpes软件分析3′UTR序列发现各分离物均形成带有Potexvirus属保守核苷酸序列"AC(C/T)TAA"的三叶草茎环结构,这种结构的功能可能与病毒RNA复制有关。

老虎须的组织培养与植株再生

以老虎须茎段为试验材料,采用不同激素组合对其进行愈伤组织诱导和分化、芽增殖与生根研究。结果表明:老虎须茎段愈伤组织诱导和分化的最适培养基分别为MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L和MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L;芽增殖的最适培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L;生根的最适培养基为1/2MS+IBA0.5mg/L。

兰花抗病毒基因工程研究进展(综述)

兰花病毒病严重影响兰花产业的发展,研究和探索防治兰花病毒病的新技术、新途径已成为众多研究者普遍关注的焦点。本文综述目前抗兰花病毒研究中应用的各种抗病毒基因工程策略,包括病毒来源基因中的外壳蛋白基因和运动蛋白基因介导的抗性策略,RNA介导的抗病毒策略,植物自身的抗病毒基因介导的抗性策略,利用多基因介导的抗性策略,以及抗体基因介导的抗性策略等。最后对兰花抗病毒基因工程的发展及应用进行了展望。

猫尾射的组织培养

以猫尾射无菌播种苗(去除根部)为外殖体,对其愈伤组织诱导和分化及其不定芽增殖进行研究。结果表明,外殖体在MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基上,愈伤组织诱导和分化的效果较好,愈伤诱导率为82.0%,分化率为74.5%;经不定芽增殖培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L培养,不定芽增殖倍数为8.2,平均株高为4.7cm。组培苗在MS+IBA0.5mg/L培养基上生根率达90%。生根苗移栽成活率达84%。

鸡冠花的组织培养及试管苗开花诱导

以鸡冠花顶芽为外植体,采用不同激素组合对试管鸡冠花的芽诱导以及花诱导进行试验研究。结果表明:培养基MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L诱导的芽数量最多,而且芽生长表现较好,为最适芽诱导培养基;改良MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L+PP333 0.5 mg/L诱导的花大且都集中在主茎上,花型紧凑美观,为最适的试管苗开花培养基。在组培的基础上采用多效唑(PP333)调控花芽的形成,将为目前市场上试管苗开花的商品化研究提供数据资料。

水田七的组织培养和植株再生

用水田七成熟种子为材料进行无菌播种,得到无菌苗再用幼叶、叶柄为材料进行组织培养和植株再生。经试验得出各阶段适宜的培养基分别为:(1)诱导愈伤组织:MS+2.0 mg/L TDZ;(2)诱导芽分化:MS+1.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA;(3)生根培养:1/2MS+0.5 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA。

鸡冠花的离体开花(简报)

以鸡冠花顶芽为外植体,采用不同生长调节剂组合对试管鸡冠花芽及花进行诱导。结果表明:MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.1 mg/L为最佳的芽诱导培养基;改良MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.01mg/L+PP333 0.5 mg/L为诱导试管苗开花的最佳培养基;在培养基中加入多效唑(PP333)有利于开花。

皱叶山苏的组织培养和植株再生

1植物名称皱叶山苏（Asplenium antiquum Makino cv．‘Victoria’）。 2材料类别孢子。 3培养条件孢子萌发及原叶体形成的培养基：（1）1／2MS。丛芽分化及增殖培养基：（2）1／2MS；（3）1／2MS＋6-BA0．5mg．L^-1（单位下同）＋NAA0．1；（4）1／2MS＋6-BA1．0＋NAA0．1；（5）1／2MS＋6-BA2．0＋NAA0．1。

韭葱黄条病毒厦门分离物外壳蛋白基因序列分析及其分组

韭葱黄条病毒（Leek yellow stripe virus，LYSV）是马铃薯Y病毒属（Potyvirus）成员之一，主要侵染韭葱和大蒜两种经济作物，通常与洋葱黄矮病毒（Onion yellow dwarf virus，OYDV）等病毒混合侵染，引起黄化扭曲等症状，严重影响作物的产量和品质。