叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌

目的 应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌,构建病原菌分子进化树。方法 以冷链食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌5种病原菌作为研究对象,应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术作为冷链食品中病原菌检测初筛手段,应用微生物培养法以及生化鉴定仪器法进行方法比对与结果验证,运用高通量测序以及分子进化树构建作为冷链食品中所分离病原菌的种属地位确证方法。结果 叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术成功扩增了冷链食品中生活状态病原菌的特征性核酸片段,排除了死亡细菌以及阴性对照菌的干扰,病原菌检出限可达到1×10^(3)CFU/mL,一次反应可检测42份试样,可以在18 h内完成检测工作。在冷链食品中病原菌抽样检测调查中,随机采集的751份冷链食品,共检出62株病原菌,病原菌总体检出率为8.3%(62/751)。通过后续的16S rRNA测序以及葡萄球菌属、弧菌属以及李斯特菌属分子进化树的构建,成功溯源了金黄色葡萄球菌的污染来源并完成病原菌种属定位。结论 本方法特异性好、灵敏度高、检测通量高,为冷链食品及相关食品中病原菌的精确检测与溯源分析提供新的思路与方法。

冷链食品行业发展现状及建议

文章阐述了我国冷链食品产业概况,分析了冷链食品质量安全主要问题,提出了完善冷链食品法律法规和标准体系、加大行政监管和服务力度、建设现代化的冷链物流体系和构建冷链食品信息预警系统四项对策措施,对加强冷链食品物流体系建设,健全相关法规标准,强化冷链食品监管,提高冷链食品质量安全具有重要意义。

液相色谱串联质谱法测定热加工食品中杂环胺

建立固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定热加工食品中14 HAAs种含量的方法。样品经过5%盐酸-甲醇酸化后均质,涡旋,超声提取,经混合型弱阳离子交换PCX固相萃取小柱富集、净化,5%氨水/甲醇溶液洗脱,采用BEH C18色谱柱,以3%甲酸和乙腈为流动相进行梯度洗脱分离,电喷雾离子正源模式(ESI+),采用多反应监测(MRM)扫描,以内标法定量分析,结果表明,14种HAAs在1.25μg/kg^25μg/kg范围内线性关系良好,相关系数r>0.99;在12 min内实现分离,加标回收率在51.1%~118.5%之间,相对标准差(RSD%)在0.9%~9.6%之间;检出限(LOD)在0.08μg/kg^1.1μg/kg之间。该方法简便快捷,易于实现大规模在线分析。

餐饮食品中6病原菌叠氮丙啶-定量聚合酶链反应检测方法开发与检验数据分析

目的建立叠氮丙啶-定量聚合酶链反应法(propidiummonoazide-quantitativepolymerasechain reaction,PMA-qPCR)快速检测餐饮食品中6病原菌的方法。方法开发6种病原菌前增菌通用型培养基,采用热裂解方法提取样品DNA,采用PMA技术鉴别活菌与死菌,运用分子生物学技术检测样品中目标菌的特异性基因片段,建立病原菌的PMA-qPCR检测方法,开展餐饮食品样品病原菌筛查检测。结果本方法特异性良好,灵敏度较高, 1533份餐饮食品样品中检出病原菌71株,检出率为4.63%(71/1533)。结论本研究运用PMA-qPCR开展病原菌活菌检测技术研究,所建立研究方法可广泛应用于餐饮食品及相关食品中病原菌的快速筛查检测,具有较好的应用前景和现实意义。

食品中反式脂肪酸的来源、健康风险和管控措施研究

文中就目前文献中TFAs的来源、对人类的健康危害及世界主要发达国家和我国食品中反式脂肪酸的管控措施进行综述,以期为我国高品质油脂及其加工食品研究开发提供参考依据。

冷链食品中铜绿假单胞菌的检测方法研究及进化树构建

铜绿假单胞菌是条件致病菌,对于患者具有较大的感染风险与危害,因此建立冷链食品中铜绿假单胞菌的检测方法并完成其溯源分子进化树构建工作,对于保障食品安全至关重要。以冷链食品中的铜绿假单胞菌为研究对象,应用实时荧光PCR检测技术建立快速检测方法。通过冷链食品抽样调查检测出铜绿假单胞菌后,将样品中检测出的铜绿假单胞菌菌株进行测序分析并建立铜绿假单胞菌生物进化树完成溯源分析。结果利用该方法成功从随机采集的271份冷链食品中检出10株病原菌,病原菌总体检出率为3.69%(10/271),并通过分子进化树的构建成功溯源铜绿假单胞菌的污染来源并完成菌种种属定位。研究成果可以为冷链食品中铜绿假单胞菌等相关病原菌的检测溯源分析提供思路与方法。

冷链食品中诺如病毒的检测方法研究以及污染状况分析

文章以冷链食品中的诺如病毒为研究对象,建立冷链食品中诺如病毒的高效提取方法。该方法设计特异性引物探针,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检验冷链食品中诺如病毒,文章应用所构建的方法开展了冷链食品中诺如病毒污染状况的抽样调查。结果表明,应用RT-PCR成功扩增了诺如病毒特征性核酸,在后续使用该方法进行的冷链食品中病毒的抽样检测调查中发现诺如病毒总体检出率为7.0%(27/383),病毒分型发现检出的27株诺如病毒中有25份为诺如病毒GII型,2份为诺如病毒GI型。

微波消解-电感耦合等离子体质谱法同时测定婴幼儿配方奶粉中9种元素

文章建立微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法对婴幼儿配方奶粉中总碘、钾、钙、钠、镁、铜、锰、铁、锌9种元素含量进行同时检测。采用水-硝酸-过氧化氢系统微波消解奶粉样品,加入10 mL 25%四甲基氢氧化铵(TMAH)提取,ICP-MS定量检测。结果表明奶粉中9种元素在线性范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.999,加标回收率为85.7%~107.0%,相对标准偏差为0.06%~4.69%。并利用此方法对市售7种婴配奶粉中9种元素进行同时检测,与国家标准方法进行比较,相对误差均小于10%,且对结果进行统计分析,分析得9种元素的P值均大于0.05,检测结果无统计学差异,表明本方法可适用于婴幼儿奶粉中多元素含量的同时测定。此方法简单快速,且准确度高、检出限低、灵敏度高、精密度高,适用于婴幼儿配方奶粉中总碘、钾、钙、钠、镁、铜、锰、铁、锌9种元素含量的同时检测。

高效液相色谱法检测食品中8种直接染料和6种合成色素

建立了食品中8种直接染料和6种合成色素的高效液相色谱检测方法。采用WondaCract ODS-2色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,以乙腈-0.02 mol/L NH 4Ac溶液为流动相,梯度洗脱,二极管阵列检测器检测。结果表明,8种直接染料和6种合成色素在0.035~41 mg/L范围内具有很好的线性关系,相关系数r在0.999以上。方法的检出限为0.026~1.1 mg/kg,加标回收率为93.5%~99.6%,相对标准偏差为1.3%~3.9%。样品在室温下放置48 h稳定性良好。该方法简便、灵敏度高、准确性高,可用于食品中8种直接染料和6种合成色素的日常检测。

2017~2019年福建省预包装食品中致病菌污染状况调查与分析

目的了解福建省市售预包装食品中致病菌的污染状况。方法根据相关抽检细则收集2017~2019年福建省市售预包装食品8088份食品样品,分析检测金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、克罗诺杆菌5种致病菌,并将不合格样品及一部分合格样品进行实时荧光PCR法测试。结果不合格样品共14份,检出率为0.17%(14/8088),其中速冻食品1.80%(9/487);豆制品检出率为0.61%(1/163);肉制品的检出率为0.34%(2/589);婴幼儿配方乳粉第一段0.31%(1/325);调味品检出率0.19%(1/516);实时荧光PCR法检测所有不合格样品均为阳性。结论福建省预包装食品致病菌污染率较低,总体状况良好,速冻食品为主要被污染物,应加强监管;婴幼儿配方乳粉中仍有致病菌检出,仍要严防。由于样品量大,检出率低,建议检验实验室先采用实时荧光PCR法筛选,阳性样品再采用传统微生物法确认,节省人力物力。

食品接触材料中3种致病菌的多重荧光PCR检测

建立并优化食品接触材料中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和副溶血性弧菌3种致病菌的多重实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,评价此方法的特异性和灵敏度,并模拟阳性样品进行检测。结果显示,该方法特异性良好,检测灵敏度均能达到10~3 CFU/mL,为食品接触材料的微生物检测提供技术保障。

餐饮及相关食品中病原菌活菌多重实时荧光PCR检测方法的研究与开发

为了应对餐饮等食品中病原菌快速检测的需求、研究建立病原菌筛查方法,选取痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、沙门氏菌(Salmonella)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、大肠埃希氏菌O157∶H7(Escherichia coli O157∶H7)、单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)等9种病原菌开展多重实时荧光PCR方法研究工作。为了节约预增菌时间与提升检测效率,研发了适用于多种病原菌预增菌的通用型培养基,采取高温裂解法提取菌液核酸,利用PMA染料灭活死亡细菌DNA,筛选出活菌DNA,采用多重实时荧光PCR技术检测目标菌,该方法可在16 h内完成检测,对于目标病原菌的检测低限可达103 CFU·mL^-1。

预包装食品标签标注常见问题研究

食品标签是食品质量的重要组成部分,是生产经营者向消费者介绍食品,展示食品质量并接受社会监督最为直接的途径,也是消费者购买食品时实现知情权、选择权的保障。文中对各类预包装食品标签多年检验工作进行总结,阐述预包装食品标签标注应了解和熟悉的标签检验背景材料、常见的标签标注问题及其原因,进而提出提高标签标注质量的建议,助推生产经营者提高标签标注质量和社会监督水平。

餐饮食品中金黄色葡萄球菌的实时荧光PCR检测方法

文中研发一种快速检测餐饮食品中金黄色葡萄球菌的方法。研究方法采用煮沸裂解法提取样品DNA,运用实时荧光PCR法检测样品中的金黄色葡萄球菌特异性基因片段。文中比较了不同的DNA制备方法的优劣,根据金黄色葡萄球菌基因组中的保守序列设计特异性引物,建立了快速检测餐饮食品中金黄色葡萄球菌的方法,并对阳性培养液及餐饮食品中的金黄色葡萄球菌进行检测。结果表明,采用文中方法与引物可在7份餐饮食品中扩增出金黄色葡萄球菌特异性的基因片段。实时PCR检测可检出浓度低至1.0×10^(-5)μg/μL的金黄色葡萄球菌DNA,检测时间少于24h。文中方法可以广泛应用于餐饮食品等食品中金黄色葡萄球菌的高通量快速筛查检测,具有高效、快速、灵敏、准确等优点。

餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的实时荧光PCR检测方法研究

文章研究开发了一种可在18 h内完成餐饮食品中蜡样芽孢杆菌检验的方法。本研究采用胰酪胨大豆多黏菌素肉汤培养基培养蜡样芽孢杆菌,通过热裂解法提取菌液DNA,运用实时荧光PCR法检测样液中的蜡样芽孢杆菌基因成分,建立了完整系统的餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的检测方法,方法的检出限达0.01 ng/μL的蜡样芽孢杆菌DNA,整个检测过程在18 h内完成。文章将方法应用于市场售卖餐饮食品中蜡样芽孢杆菌的筛查检测,结果表明,在抽样检验的315份餐饮食品中有25份样品(25/315,检出率为7.93%)中检测出蜡样芽孢杆菌特异性基因成分。该方法具有检测时间短、效率高,一次PCR反应可同时检测90份样本,方法适合于餐饮食品等食品中蜡样芽孢杆菌的高通量筛查检测。

食品接触材料表面细菌生物被膜形成能力的研究进展

食品接触材料的安全性是食品安全领域的重要问题,材料表面的粗糙度、电荷、亲水性能都可影响食源性致病菌的粘附,而细菌粘附往往是生物被膜形成的第1个阶段。文章主要从玻璃、不锈钢、纸质材料等常用食品接触材料表面细菌生物被膜形成能力方面进行了综述,为进一步预防控制食源性疾病提供理论依据。

2013～2018年福建省食品接触材料中微生物污染状况调查

文章对福建省食品接触材料中微生物污染情况连续5年的抽样检测数据进行统计分析,数据显示:2013~2018年间抽样检验的1331份食品接触材料的整体合格率约为95.5%,不合格项目集中于大肠菌群与霉菌等,致病菌均未检出。通过数据可以看出,福建省食品接触材料卫生状况整体情况较好,但也存在一定的问题。文章建议执法部门加强对检出率较高、污染较为严重的食品接触材料,如餐具等加强监督检查力度,加大抽检频次,发现问题及时处理。文章为读者全面了解福建省内食品接触材料的卫生质量情况和今后开展食品接触材料的卫生监督工作提供了数据依据。

两种基于重组酶介导扩增技术的沙门氏菌检测方法比较

该研究旨在利用重组酶介导扩增技术建立并比较两种食品中沙门氏菌快速检测方法。根据沙门氏菌菌毛蛋白fimY基因设计引物和探针,分别采用荧光法和侧向流试纸条法对扩增产物进行检测,构建重组酶介导等温核酸扩增方法,验证两种方法的特异性、灵敏度及对人工污染样品的检测效果。该研究构建的两种方法均在39℃下恒温运行,检测时间30~40 min,方法特异性良好,与大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等常见的其他食源性致病菌无交叉反应,侧向流试纸条法灵敏度可达到1 pg/μL,荧光法灵敏度为10 pg/μL,对人工污染样品的检测结果与传统分离培养法检测结果一致。因此该研究建立了两种快速、特异、灵敏的方法用于检测沙门氏菌,为食品中沙门氏菌污染的快速筛查提供一定的参考价值和数据支撑。

冷冻水产品中副溶血性弧菌的实时荧光PCR检测方法研究

文章研发了一种可在16 h内完成冷冻水产品中副溶血性弧菌快速检测的方法。方法在首先完成样品的预增菌工作后,采用高温热裂解法与核酸亲和膜吸附法提取冷冻水产品等样品中的检材总DNA,设计副溶血性弧菌专一引物探针,运用实时荧光定量PCR技术扩增试样中副溶血性弧菌基因组保守基因片段,同时开展与国家标准方法的比对工作证实方法的可靠性,建立了特异性好、高检测通量的PCR检测方法。为验证所建立方法的适用性与稳定性,本研究从市场中随机抽取共331份冷冻水产品样品开展副溶血性弧菌的筛查检测,结果表明采用该方法在上述抽样调查的冷冻水产品中3份样品的副溶血性弧菌特异性的基因片段被扩增检验出,试样的目标菌检出率约为0.9%(3/331),该研究PCR方法的DNA检出限可达到0.01 ng/μL。

茶叶中的微生物多样性及有害微生物污染的检测

微生物与茶叶的质量安全息息相关,微生物的应用贯穿茶叶生产的全过程,然而作为食品安全的重要指标之一,茶叶中有害微生物的污染也不容小觑。文章对茶叶中微生物多样性、有害微生物的污染、相关检测标准进行综述与分析,探讨构建茶叶有害微生物检测标准的必要性。