猪瘟流行毒株E2基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

用RT PCR方法扩增了陕西省近期猪瘟流行野毒株E2基因 ,并将其克隆到 pMD 18 T载体 ;经转化、筛选、鉴定后 ,测定了核苷酸序列 ,根据C株、Brescia株和Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行 gp5 5氨基酸序列推导 ,并进行同源性比较。结果表明 ,该猪瘟流行毒株的E2核苷酸序列与C株、Brescia株和Alfort株的E2核苷酸序列同源性分别为 81.9%、83.4 %和83.5 % ;相应地 ,gp5 5氨基酸同源性分别为 94 .8%、95 .6 %和 95 .3%。将此E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体 pFastBacHTb后获得了重组质粒 pFBHT E2 ,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中 ,发生转座作用 ;经抗性及蓝白斑筛选得到了含E2基因的重组DNA ,将其命名为rBacmid E2。此研究为进一步在昆虫细胞中表达E2基因、开发研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础。

SARS控制策略仿真研究:SARS控制策略及基本参数

给出了SARS的优化控制方案、“扩大疑似病例的处理范围”和“限制人口自由流动”两种控制措施对SARS控制的作用和影响、SARS的扩散趋势是否被抑制住的一般判断标准、控制措施的延迟时间、控制盲区等内容,并指出在SARS发病早期,同时采取“扩大疑似病例的处理范围”和“限制人口自由流动”两种措施可以有效地控制住SARS病,在后期为了减轻对经济的影响,可适当放宽对人口自由流动的限制。这些不仅对SARS的控制具有重要意义,而且对其他疫病也具有广泛的借鉴作用。

SARS控制策略仿真研究:防控措施效果比较

通过对SARS的流行病学分析,建立了SARS流行病学动态反馈仿真模型,并研究了该模型的仿真实现技术。通过仿真分析得出在SARS发病早期必须同时采用“扩大疑似病例的处理范围”和“限制人口自由流动”两种措施,才能有效抑制SARS的扩散;当病人的平均自由散毒时间低于10天以下时,此时控制的重点应放在加强扩大疑似病人的隔离范围上,这样才能有效降低SARS的扩散速度并减轻经济影响;另外,还给出了两种控制措施对SARS控制效果的影响及SARS的扩散趋势是否被抑制住的判断标准等,这些结论不仅对SARS防控方案的优化非常重要,而且所建立的模型及其仿真实现技术对禽流感等其他疫病的流行病学及防控策略研究都具有广泛的普适性意义。

动物疫病预警体系建设初探

随着世界各个领域灾害性事件的不断发生以及信息技术、计算机技术和生物技术的发展,预警的概念在气象、灾害等若干领域产生并推广应用.在动物卫生领域,FAO、OIE等国际组织及发达国家越来越重视动物疫病的早期预警,通过建立完善的预警体系,可以尽早地发现疫情和消灭疫情,将损失降低到最小.我国还未开始系统的预警体系建设,预警的理念还未在我国动物卫生领域加以普及.为此,本文着重介绍预警的一些相关概念、基本组成及其建设原则,以期对我国的动物疫病预警体系的建设有所帮助.

浅谈国际动物卫生信息检索及挖掘技术

随着全球经济一体化进程的加速．我国已越来越多地融入世界经济。然而畜产品国际贸易和人员交往的日益频繁．极大的扩展了有害生物物种的传播范围．降低了有害生物跨越空间障碍的难度．使与之相关的生物安全风险逐渐增大．最突出的表现是近年来H5N1型高致病性禽流感、口蹄疫、牛海绵状脑病等重大动物疫病在全世界范围内迅速蔓延．导致传入我国的风险不断加大．并对我国畜牧业及国民经济的健康发展以及社会公共卫生造成巨大影响和严重损失。因此，完善国际重大动物疫情信息的动态监测机制．密切关注疫情的发生、发展及流行态势，及时、系统、全面掌握国际重大动物卫生信息，以及国外相关政策法规、技术标准和研究动态等方面的文献资料．并结合不同时期的重点防范对象及其流行规律．开展动物卫生信息检索、挖掘与情报分析工作，及时提出我国的应对措施建议，成为当前我国开展防范外来重大动物疫病传入工作的前提和基础。

应用PCR检测山羊痘病毒

初步建立了用于诊断山羊皮肤组织中山羊痘病毒的PCR方法。试验设计了 2对引物 ,用以分别检测山羊痘病毒的特异性基因和α 微管蛋白基因。克隆到的DNA扩增产物的序列与GenBank中收录的序列同源性达到 98%。试验表明 ,用PCR方法可快速检测样品中的山羊痘病毒。

羊痘病毒P32蛋白基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

应用PCR方法扩增羊痘病毒特异性蛋白P32蛋白的基因 ,将其克隆至pMD18_T载体 ,测定核酸序列后将P32基因克隆至Bac_to_Bac○R杆状病毒表达系统中转移载体pFastBac1和pFastBacHTa ,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中 ,获得两种携带P32基因的重组转染质粒 :Bacmid_Bac1_P32 ,Bacmid_BacHT_P32 ,经PCR试验鉴定 ,获得的这两种重组转染质粒是携带P32基因的杆状病毒表达载体 。

一步法多重RT-PCR禽流感病毒分型诊断法的建立与应用

根据禽流感病毒(AIV)的M基因序列设计合成了1对AIVM基因的通用诊断引物AMDI／AMD2,针对H5N1、H9N2两种亚型的HA基因分型设计合成了2对分型诊断引物H15D1／H5D2,H9D1／H9D2。采用一步法多重RT-PcR技术建立了一种禽流感病毒快速分型诊断方法,并对其特异性和灵敏度进行验证。结果表明,该诊断方法速度快,一般只需要28～30 h即可鉴定出结果,比病毒分离鉴定(5～7 d)至少缩短4～6 d;特异性强,试验组53株AIV全部扩增出与预期同样长度的目的条带,与病毒分离及血清学鉴定方法的检测结果完全一致。对照组中新城疫病毒(NDV)、减蛋综合征病毒(EDS76V)、传染性支气管炎病毒(IBV)均未扩增出特异性基因条带,;灵敏度高,试验组将AIV接种SPF鸡胚,培养后的鸡胚尿囊液(AAF)进行10-2稀释后,仍可以检测到其中的AIV。

猪瘟病毒E_2(gp55)基因在昆虫细胞中的表达

将除去 3’端跨膜区的猪瘟病毒E2 基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb ,获得重组质粒pFBHT_E2 ,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac ,发生转座作用 ,经抗性及蓝白斑筛选得到含E2 基因的重组载体质粒rBacmid_E2 ,以脂质体介导的方法将此重组载体质粒转染sf9昆虫细胞 ,获得重组病毒 ,命名为rvBac_E2 。经SDS_PAGE和Western_blot及ELISA等方法检测 ,结果表明 ,此E2 基因在昆虫细胞中正确表达 ,表达的蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应。

伪狂犬病病毒Min-A株糖蛋白gE基因真核表达质粒的构建

根据已发表的伪狂犬病病毒 (PRV)Rice株的 gE基因序列设计了 1对引物 ,用PCR法特异性地扩增出了PRVMin A株的 gE基因 ,并克隆到 pUC19中 ,再与杆状病毒转座质粒pFastBac1连接得到 pFastBac gE ,pFastBac gE转化穿梭载体Bacmid ,得到了重组rBacmid

伪狂犬病病毒Min-A株糖蛋白gE基因真核表达质粒的构建

根据已发表的PRV -Rice株的gE基因序列设计了一对引物 ,以PRV -MinA株的DNA为模板 ,用PCR法特异性地扩增出了PRVMin-A株的 gE基因 ,并克隆到 pUC19中 ,再与杆状病毒转座质粒 pFastBac1连接得到pFastBac -gE ,pFastBac-gE转化穿梭载体Bacmid,得到了重组rBacmid-gE表达载体。