关于国产化生物安全四级实验室设计与建造的研究

介绍了国内外生物安全四级实验室的现状,并以哈尔滨兽医研究所国产化生物安全四级模式实验室为例,介绍实验室设计与建造方面的进展,为国家生物安全实验室体系建设规划的落实起到指导和借鉴作用。

基于非洲猪瘟病毒E199L蛋白间接ELISA方法的建立

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)间接ELISA抗体的检测方法,本研究从ASFV Pig/HLJ/2018株基因组中经PCR扩增E199L基因序列,将其克隆至p ET-32a(+)原核表达载体进行表达并纯化,表达的蛋白经SDS-PAGE和western blot鉴定后,用纯化的重组E199L蛋白(rE199L)作为包被抗原,利用矩阵法优化各反应条件,建立了检测ASFV E199L蛋白抗体的间接ELISA方法,并检测了该方法的特异性、敏感性和重复性。利用该方法及进口商品化试剂盒对196份猪临床血清样品进行检测,计算二者的符合率。SDS-PAGE及western blot结果显示,正确表达并纯化了rE199L,且rE199L具有良好的反应原性。间接ELISA方法反应条件的优化结果为:rE199L最佳包被浓度为4μg/mL;最佳血清稀释度1:100,37℃作用45 min;5%脱脂乳37℃封闭60 min;兔抗猪HRP-IgG最佳稀释度为1:10000,37℃孵育60 min。建立的该方法除了对ASFV阳性猪血清检测结果为阳性外,对PRRSV、PEDV、CSFV、PCV、PPV和PRV阳性猪血清均为阴性结果;敏感性试验结果显示,该方法可检测阳性血清的最大倍数为1:1600;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。196份临床猪血清样品的检测结果显示,该间接ELISA方法的阳性检出率为89.3%(175/196),阴性样品检出率为10.7%(21/196);商品化试剂盒的阳性检出率为90.8%(178/196),阴性样品检出率为9.2%(18/196)。二者的符合率为98.3%。建立的该方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以满足临床检测和实验评价的需求,为ASFV抗体检测提供更多的方法选择。

CRISPR技术在病毒学研究中的应用

近年来,CRISPR/Cas系统凭借其操作简单、靶向精准、效率高等优点,在生物学领域的应用潜力备受关注。通过总结CRISPR技术在抗病毒药物潜在靶点筛选、疫苗开发、病毒核酸快速检测、病毒性疾病临床治疗等领域的应用,阐明了CRISPR/Cas系统目前面临的挑战及相应的解决措施。作为一种基因编辑技术,CRISPR/Cas系统可以快捷地筛选出多种病毒的潜在药物靶点;可以改造病毒基因组,为研发基因缺失活疫苗做储备;可以快速准确诊断病毒性疾病,也可以为乙肝、艾滋病等病毒性疾病的治疗提供新方向。CRISPR/Cas系统仍存在致癌风险、脱靶效应以及递送系统的安全准确性不足等问题。随着CRISPR技术的不断完善,该技术必将会给病毒性疾病的检测诊断与预防控制带来重大变革。