HOX11＋急性T淋巴细胞白血病RUNX2基因启动子区域CpG岛甲基化及其表达的研究

本研究检测RUNX2基因在HOX11+急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株和T-ALL患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子区CpG岛甲基化的关系。以3株急性T淋巴细胞白血病细胞株sil-ALL、DND41和RPMI及38例T-ALL患者、29例治疗后完全缓解T-ALL患者骨髓和8例正常人骨髓为样本,采用RT-PCR检测RUNX2 mRNA表达水平,采用重硫酸盐测序法、甲基化DNA免疫沉淀技术和启动子寡核苷酸微阵列芯片分析基因启动子区CpG岛甲基化状态和基因功能。结果表明,高表达HOX11的T-ALL患者样本中会出现RUNX2基因启动子区域的甲基化。RUNX2基因启动子区域在HOX11+T-ALL的甲基化比率为78.9%,明显高于HOX11-ALL(36.8%),两组差异有统计学意义(P<0.01)。RUNX2在HOX11+的细胞株中的表达明显低于HOX11-的细胞株,RUNX2在HOX11+的T-ALL患者中的表达水平(0.581±0.257)明显低于HOX11-的T-ALL患者(0.835±0.317),并且RUNX2 mRNA的相对表达程度与HOX11 mRNA的相对表达程度成负相关(rs=-0.378,P<0.01)。RUNX2基因在T-ALL中的表达水平与其甲基化呈负相关(rs=-0.419,P<0.01)。结论:HOX11能负调控RUNX2的表达,RUNX2基因启动子甲基化是导致其在T-ALL中表达下调或基因沉默的原因,这种HOX11对RUNX2基因的抑制作用有可能就是临床上HOX11高表达T-ALL患者具有更好的无事件生存率和更长的总生存率的原因。RUNX2基因的表达和甲基化水平对判断T-ALL患者的疗效有一定意义,并有望成为一个诊断T-ALL的分子标志。

HOX11＋急性T淋巴细胞白血病中MEIS1基因启动子区甲基化状态及其表达水平

目的检测骨髓嗜病毒整合位点1（MEIS1）基因在同源异形盒11（HOX11）＋急性T淋巴细胞白血病（T—ALL）细胞株和T—ALL患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平，探讨其表达水平与其启动子甲基化的关系。方法收集2009年1月至2011年12月北京大学人民医院北京大学血液病研究所38例T—ALL患者治疗前及其中29例治疗后完全缓解的T—ALL患者和8名健康供者的骨髓样本，及3株T—ALL细胞株（si1—ALL、DND41和RPMI）；采用反转录（RT）PCR检测MEIS1、HOX11mRNA表达水平，采用重硫酸盐测序法、甲基化DNA免疫沉淀技术和启动子寡核苷酸微阵列芯片分析MEIS1基因启动子区CpG岛甲基化状态和基因功能。结果根据HOX11表达的高低，将38例T—ALL患者分为HOX11高表达（HOX11＋）组（n=14）和HOX11低表达（HOX11-）组（n=24）。HOX11＋组患者骨髓中出现MEIS1基因启动子区域的甲基化。HOX11＋组患者MEIS1基因启动子区域甲基化比率明显高于HOX11一组患者（76．8％比29．5％，P〈0．01）。MEIS1mRNA在治疗后完全缓解患者和健康供者骨髓中的水平低于患者治疗前骨髓中的水平（均P〈0．05）；MEISImRNA在HOX11＋T—ALL细胞株（si1—ALL、DNIM1）中的表达明显低于HOX11-T—ALL细胞株（RPMI）（0．392±0．226、0．378±0．317比1．059±0．533，均P〈0．05），在HOX11＋组患者中的表达明显低于HOX11-组患者（0．462±0．281比0．916±0．437，P〈0．01）；且MEIS1mRNA的相对表达程度与HOX11mRNA的相对表达程度呈负相关（rs=-0．416，P〈0．01）。MEIS1基因在T．ALL中的表达水平与其甲基化呈负相关（rs=-0．383，P〈0．01）。结论MEIS1基因启动子甲基化是导致其在T．ALL中表达下调或基因沉默的原因，HOX11可能负调控MEIS1基因的表达。