青蒿素及其衍生物抗肿瘤作用研究进展

青蒿素及其衍生物是治疗疟疾的首选药。近年来大量体内外研究显示青蒿素及其衍生物具有良好的抗肿瘤活性,其中,一些结构新颖的衍生物抗肿瘤活性大大增强,甚至优于常用的化疗药物。其抗肿瘤机制主要包括氧化损伤反应、抑制肿瘤细胞增殖以及抗新生血管生成等。青蒿素类药物毒副作用小、成本较低,对多药耐药细胞有效,对放、化疗具有增效作用,预示其极可能成为具有临床应用价值的抗癌新药。

度他雄胺对大鼠附睾Claudin1和β-catenin表达的影响

目的：通过度他雄胺对大鼠附睾上皮连接关键蛋白Claudin1和β-catenin表达影响的研究,探讨度他雄胺抑制生育的可能分子机制,为男性不育治疗和男性避孕提供附睾靶点。方法：16只SD雄性大鼠（3月龄,250~300 g）,设度他雄胺40 mg/kg实验组和阴性对照组,每组8只,灌胃给药,1次/d,连续2周。给药结束后计算机辅助精子分析雄鼠精子活力及形态,计算交配雌鼠受孕率,ELISA法测定大鼠血清睾酮（T）和双氢睾酮（DHT）浓度,透射电镜分析附睾细胞紧密连接变化,RT-PCR分析实验组和对照组附睾上皮连接蛋白Claudin1和β-catenin基因表达变化;免疫组化和免疫印迹分析其蛋白表达变化。结果：度他雄胺可以显著抑制大鼠血清DHT浓度、精子活力和生育力,超微结构显示实验组附睾上皮细胞紧密连接出现空隙,附睾腔液体积增多。RT-PCR、免疫组化和免疫印迹显示度他雄胺可以显著下调Claudin1和β-catenin的表达。结论：度他雄胺可以显著抑制雄性大鼠生育,这可能与其降低大鼠血清DHT水平,进而抑制附睾上皮连接关键基因Claudin1和β-catenin表达和破坏附睾上皮紧密连接有关。

非梗阻性无精子症和隐匿精子症与睾丸体积、血FSH和AZF基因微缺失的相关性分析

目的:探讨非梗阻性无精子症和隐匿精子症与睾丸体积、血FSH和AZF基因微缺失的相关性。方法:161例男性不育患者分为非梗阻性无精子症(A组,n=86)、隐匿精子症(B组,n=49)、严重少精子症(C组,n=13)和其它患者(D组,n=13,包括死精子症4例,梗阻性无精子症3例,正常精子1例,其他少弱精子症5例),进行睾丸体积、血FSH水平和AZF基因微缺失检测,AZF基因微缺失检测位点包括AZFa(sY84、sY86)、AZFb(sY127、sY134)、AZFcd(sY254、sY255、sY157、sY145和sY152)。结果:4组睾丸体积<12 ml的比例分别为73.26%(63/86)、34.69%(17/49)、7.69%(1/13)、30.77%(4/13);4组FSH水平升高1倍以上的比例分别为67.44%(58/86)、32.65%(16/49)、15.38%(2/13)和0.00%(0/13),组间均有极显著统计学差异(P<0.001);4组AZF基因微缺失率分别为15.12%(13/86)、18.37%(9/49)、0.00%(0/13)和0.00%(0/13),组间均无统计学差异(P>0.05),其中A组AZFa基因缺失1例,AZF(b+c+d)缺失5例,AZF(c+d)基因缺失7例,B组9例均为AZFc和(或)AZFd基因缺失,C组和D组均未见AZF基因缺失。结论:随着生精功能障碍程度的加重,血FSH水平升高和睾丸体积缩小趋势明显,而与AZF缺失几率无高度相关性;但在非梗阻性无精子症和隐匿精子症组中AZF基因缺失几率仍然偏高,AZFa和AZFb缺失大多出现在非梗阻性无精子症组中,而隐匿精子症组以AZFc和AZFd缺失为主。

无精子症和严重少／弱精子症ICSI子代与其他精子ICSI／IVF子代出生缺陷的比较研究

目的：观察无精子症和严重少／弱精子症患者借助卵胞质内单精子注射（ICSI）技术出生的子代与其他精子ICSI／体外受精（IVF）子代的出生缺陷情况。方法：将接受ICSI／IVF治疗的237对夫妇生育的300例子代按ICSI／IVF当日精液情况和受精方式分为附睾／睾丸精子ICSI组（A组，患者92例，子代118例）、严重少／弱精子ICSI组（B组，患者84例，子代106例）、非严重少／弱／畸形精子ICSI组（c组，患者35例，子代42例）、正常精子IVF组（D组，患者26例，子代34例）。对召回现场随访的子代进行出生缺陷病史询问、超声检查和无精子症因子（AZF）基因检测。结果：受访子代平均年龄为33．1±20．3（4-84）个月，新生儿出生缺陷率为1．7％（5／300），总出生缺陷率为4．7％（14／300），4组的出生缺陷率分别为5．1％（6／118）、3．8％（4／106）、2．4％（1／42）和8．8％（3／34），组间无统计学差异（P〉0．05）。112个家庭AZF基因检测显示B组有3对父子存在同样位点的AZF基因微缺失。结论：无精子症和严重少／弱精子症等严重男性不育症患者ICSI子代的出生缺陷发生率与其他较好精子或正常精子IVF子代相比无明显增加，AZF基因检测没有新增缺失位点和新增缺失病例。

遗传及相关因素与稽留流产关系的研究进展

稽留流产是妇产科一种常见病,导致稽留流产的病因包括遗传和环境等因素,但确切机制尚不明确。众多研究表明,稽留流产病因复杂,与p53、MDM2或HDM2及ER等相关基因多态性及Fas/FasL系统、Fas相关死亡结构域蛋白、Livin、survivin、bax、caspase、HIF及AAH等基因表达异常有关;另外环境因素包括化学物质、物理因素(如放射线、噪音及高温等)以及不良生活习惯(如吸烟、饮酒、吸毒、过多使用电脑、手机、生活不规律及职业紧张等)均可引起稽留流产。因此从遗传和环境两方面来进一步研究其发生发展机理,可以更好地给临床实践提供指导。

新型青蒿素衍生物SM1052抗人子宫内膜癌RL95-2肿瘤活性研究

目的:研究一种新型青蒿素二聚体衍生物SM1052的体外、动物体内抗肿瘤活性及其作用机制。方法:采用体外培养的人子宫内膜癌(RL95-2)细胞株,以CCK-8法测定SM1052对RL95-2细胞增殖的影响;体内实验采用人子宫内膜癌细胞裸鼠移植瘤模型观察SM1052对RL95-2的生长抑制作用;流式细胞检定法(FCM)测定细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测SM1052对RL95-2细胞早期凋亡率的影响;Western blotting测定Bcl-2,Bax蛋白表达变化。结果:SM1052能显著抑制RL95-2细胞增殖,50μmol·L-1细胞存活率为(13.83±0.43)%;SM1052(10 mg·kg-1)对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显抑制作用;SM1052(50μmol·L-1)能诱导细胞引发G2/M期阻滞;能诱导细胞发生凋亡,且以早期凋亡为主;能显著上调Bax、下调Bcl-2蛋白的表达。结论:SM1052在体外、动物体内具有较高的抗人子宫内膜癌(RL95-2)的活性,其作用机制可能通过诱导细胞周期阻滞和调节凋亡蛋白Bcl-2,Bax表达水平相关。

长三角地区重度少弱精子症与卵泡刺激素受体基因单核苷酸多态性相关性研究

目的:研究卵泡刺激素受体(FSHR)基因Thr307Ala(rs6165)和Asn680Ser(rs6166)单核苷酸多态性(SNP)基因型分布情况及其与中国长三角地区重度少弱精子症的关联性。方法:外周血提纯DNA,PCR扩增后直接测序分析200名已育男性(已生育组)和150名重度少弱精子症不育男性(不育组)FSHR基因Thr307Ala和Asn680Ser位点的SNP,并用χ2检验进行相关性分析。结果:FSHR基因Thr307Ala和Asn680Ser多态性位点的基因型分布在已生育组和不育组间无统计学差异(P>0.05)。Thr-Asn/Ala-Asn和Thr-Ser/Thr-Ser双倍型在已育男性与重度少弱精子症患者间分布差异有统计学意义(P<0.05),组间FSHR的单倍型Thr-Asn和Ala-Asn之间亦有统计学差异(P<0.05)。结论:FSHR基因Thr307Ala和Asn680Ser的2个多态性位点特定的单倍型和双倍型与男性不育有一定的相关性。

正常人前列腺外周带和移行带成纤维细胞差异性基因表达与蛋白分泌的研究

目的:寻找正常人前列腺外周带和移行带细胞在基因表达水平及相关信号通路蛋白表达水平的差异。试图从机理上探求两者在不同前列腺疾病中所占比例不同的原因。方法:用Trizol一步法从外周带(PZ)和移行带(TZ)成纤维细胞中抽提总RNA。通过定量RT-PCR技术测定CXCL1、CXCL2、CXCL3、IGFBP2、IGFBP3、IL-8、TAGLN、MEST的基因表达水平。此外,从PZ、TZ成纤维细胞条件培养基中收集、浓缩分泌的蛋白,通过Western blotting技术比较分析分泌蛋白的水平。结果:一些分泌蛋白的基因表达水平在PZ与TZ成纤维细胞存在显著差别,其中CXCL1、CXCL2、CXCL3与IL-8的mRNA在TZ成纤维细胞中的表达水平明显高于其在PZ成纤维细胞中的表达水平。而IGFBP2、IGFBP3与TAGLN的mRNA在PZ成纤维细胞中的表达水平明显高于其在TZ成纤维细胞中的表达水平。IGFBP3与TAGLN在PZ成纤维细胞中的蛋白分泌水平明显高于其在TZ成纤维细胞中的蛋白分泌水平。结论:PZ与TZ成纤维细胞中基因表达及蛋白分泌水平的差异可能参与导致前列腺癌与前列腺增生(BPH)发病率在前列腺不同区带的显著区别。

避孕药的药物动力学分析方法研究进展

药物动力学是现代药物研究的重要内容之一,而避孕药作为育龄女性常用药物也需要关注其体内血药浓度范围。因避孕药体内含量低,内源性干扰大,需选用适宜的检测方法才能进行测定。本文以国内、外近年来的研究结果为依据,分别介绍了高效液相色谱法、气质联用法、免疫分析法、同位素示踪法等分析方法在避孕药药物动力学研究中的应用,并概括了各种方法的优缺点和应用范围,为后续避孕药药物动力学的研究提供参考。

HPV58型E1重组蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备

目的：原核表达重组人类乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）58型E1蛋白，并制备兔抗HPV58型El蛋白多克隆抗体。方法：分别构建含编码E1蛋白分子中1～326aafEl却的cDNA片段的表达质粒pET－28b－E1－N，以及含编码E1蛋白分子中319～644aa（E1．c）cDNA片段的表达质粒pET－28b－E1-C原核表达载体，分别转化感受态BL21（DE3）细胞，经诱导表达后，利用镍柱亲和层析方法，分离纯化目的蛋白E1-N和E1-C作为免疫原免疫新西兰大白兔，制备抗El多克隆抗体，Western blotting检测抗体的特异性。结果：制备获得高纯度的El－N和E1－C蛋白，以及高滴度的兔抗E1多克隆抗体，Western blotting结果示，制备的多克隆抗体具有较好的抗原特异性。结论：成功获得兔抗HPV58型E1蛋白多克隆抗体，为E1蛋白分子中线性B细胞表位的鉴定提供了物质基础。

间隙连接蛋白Cx31.1相互作用蛋白的初步鉴定

目的:筛选间隙连接蛋白31.1(Cx31.1)的相互作用蛋白,进一步阐释Cx31.1在生殖健康方面可能的作用机制。方法:采用免疫共沉淀技术富集稳定表达Cx31.1-EGFP融合蛋白细胞中的Cx31.1结合蛋白,以稳定表达EGFP标签蛋白的细胞作为对照组。得到的蛋白复合物直接酶解后进行高效液相色谱-串级质谱(HPLC-MS/MS)分析,通过相应的肽段序列标签在Swiss Prot数据库中搜索蛋白质。结果:通过数据库搜索首次鉴定了5个与生殖相关的且与Cx31.1可能发生相互作用的蛋白,分别是HSPB1、HSPA2、HSPA5、BYP2和XAGE1A。其中HSPB1、HSPA2和HSPA5属于热休克蛋白家族,BYP2和XAGE1A蛋白在睾丸组织中特异表达。结论:Cx31.1可能与生殖相关蛋白具有相互作用。