临床实验室基于功效函数图评价Westgard西格玛规则中统计质量控制程序性能

目的 使用功效函数图对Westgard西格玛规则中统计质量控制程序性能特征进行分析。方法 根据功效函数图绘制原理,开发了临床检验定量测定室内质量控制程序设计软件,使用功效函数图对Westgard西格玛规则中推荐的质量控制程序进行模拟,结合不同西格玛质量水平对Westgard西格玛推荐的质量控制程序进行性能分析。结果 Westgard西格玛规则推荐的质量控制程序,是能满足误差检出概率和假失控概率要求的前提下相对简单的规则。结论 临床检验定量测定室内质量控制程序设计软件验证了Westgard西格玛规则中推荐质量控制程序的性能,Westgard西格玛规则图直观便捷,临床实验室可以用来推荐室内质量控制的质量控制程序。

计量溯源性和临床检验参考系统

精确诊断和治疗离不开准确可比的实验室检测结果。随着自动化、室间质量评价和实验室认可的发展,检测结果越来越趋向于全球化。无论使用何种分析系统,同一个样本的检测结果应在空间和时间上具有可比性,为临床提供准确可靠的信息。计量溯源能使检测结果溯源到高级别的参考系统,是保证终端实验室检测结果准确可比、实现标准化的重要途径。该文就计量溯源性和参考系统相关内容进行概述,并介绍了2020版ISO 17511的6种校准等级及其与2003版的区别。

22个内分泌检验项目允许总误差、允许不精密度和允许偏移的设定

目的设定22个内分泌检验项目允许总误差(TEa)、允许不精密度[用变异系数(CV)表示]和允许偏移(Bias),以推荐相关项目的性能规范。方法收集2020—2022年国家卫生健康委临床检验中心内分泌项目室间质量评价(EQA)和室内质量控制(IQC)数据。根据意大利米兰会议最新确定的性能规范设定模式,基于生物学变异(BV)和当前技术水平模式导出性能规范。对于有BV数据的检验项目,将EQA数据的“百分差值”、IQC数据的当月在控“CV”与基于BV导出的3个水平评价标准进行比较,计算所有批号质控品的百分差值通过率和CV通过率,以通过率达到80%为该水平质控品的性能规范满足该项目推荐性能规范要求。对于无BV数据或基于BV导出的3个水平性能规范均无法作为推荐标准的检验项目,基于当前技术水平导出推荐TEa和CV,再导出允许Bias。结果22个内分泌检验项目推荐的TEa/允许CV分别为:游离三碘甲状腺原氨酸18.9%/6.5%,总三碘甲状腺原氨酸17.4%/7.1%,游离甲状腺素25.0%/6.2%,总甲状腺素20.0%/7%,促甲状腺激素24.6%/8.9%,皮质醇26.3%/8.2%,雌二醇26.0%/7.5%,卵泡刺激素21.2%/6.2%,黄体生成素25.0%/6.8%,孕酮26.2%/9.3%,催乳素18.7%/7.4%,睾酮16.5%/6.3%,C-肽20.8%/8.3%,叶酸29.5%/8.9%,胰岛素25.0%/6.4%,甲状腺球蛋白28.2%/8.0%,甲状旁腺激素30.0%/11.8%,醛固酮21.4%/9.2%,硫酸脱氢表雄酮25.0%/7.5%,维生素B1225.0%/7.5%,生长激素25.0%/7.0%,促肾上腺皮质激素27.4%/9.1%。结论设定的22个内分泌检验项目的TEa、允许CV和允许Bias可推荐作为符合中国临床实验室当前技术水平的性能规范。

全国861家临床实验室特殊蛋白检验项目参考区间现状调查及结果分析

目的统计并分析全国861家临床实验室特殊蛋白检验项目参考区间来源及上、下限现状。方法2018年10月全国各省级临床检验中心同步向所有参加特殊蛋白室间质量评价的实验室下发参考区间信息调查表,特殊蛋白包括免疫球蛋白(Ig)A、IgE、IgG、IgM、补体(C)3、C4、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗链球菌溶血素O(ASO)、转铁蛋白(TRF)和前清蛋白(PA)共11项,实验室自愿参加此次调查活动并按照规定格式以网络方式上报参考区间相关信息,调查包括参考区间上限、下限、来源、是否验证、分组规则等,并与已颁布参考区间行业标准中的特殊蛋白检验项目参考区间行业标准进行比较。结果此次共有861家实验室回报了参考区间。特殊蛋白参考区间的来源主要为仪器或试剂说明书(75.2%~79.9%),39.6%~47.4%的实验室对参考区间进行了验证;参与此次调查实验室中仅有0.3%~2.5%的临床实验室按照性别分组来制定参考区间。实验室参考区间上、下限与已发布的行业标准进行比较,除C4参考区间上限(54.9%)、CRP参考区间下限(93.7%)、PA参考区间下限(52.4%)和TRF参考区间下限(53.1%)外,其他项目不足50%的实验室使用参考区间上、下限与行业标准给出的参考区间一致。结论仅个别临床实验室使用特殊蛋白检验项目参考区间行业标准,且有相当一部分实验室未对参考区间进行验证,因此推广参考区间行业标准很有必要。

2019—2021年全国15项临床检验质量指标室间质量评价结果分析

目的通过分析2019—2021年全国15项临床检验质量指标室间质量评价结果,了解我国实验室质量水平,探索影响实验室误差的因素,并为15项临床检验质量指标建立初步质量规范提供参考。方法国家卫生健康委临床检验中心联合31个省(自治区、直辖市)和新疆生产建设兵团临床检验中心同步开展质量指标室间质量评价计划,并通过已开发的Clinet-EQA系统在线回报结果,收集2019—2021年实验室的基本信息和临床检验质量指标数据,统计分析全国参加实验室15项临床检验质量指标结果,同时用西格玛度量评价实验室质量水平。为探讨不同医院等级、信息化建设水平对质量指标结果的影响,按照分类要素(专业、医院等级、信息化建设水平)分别进行统计分析;其中9项指标(4项标本可接受性指标、3项检验报告指标和2项周转时间指标)分专业进行统计分析;13项指标(除外周转时间)按照不同医院等级分为5组,根据医院信息系统(HIS)和实验室信息系统(LIS)衡量参加实验室的信息建设水平,根据HIS和LIS的存在与否,将参加实验室分为4组进行统计分析。结果2019—2021年,全国共有7322家实验室连续参加质量指标室间质量评价计划。其中9项指标(4项标本可接受性指标、3项检验报告指标、血培养污染率和室间质评项目不合格率)所有年份的结果均达到3σ水平以上;危急值通报率和危急值通报及时率所有年份的结果均达到6σ水平;室内质量控制项目开展率和实验室间比对率相对较差,所有年份的结果均低于3σ水平;4项标本可接受性指标中位数近3年呈逐年下降,实验室差错率有所降低。按照分类要素统计分析结果显示,11项指标受医院等级和信息化水平的影响。结论15项临床检验质量指标中大部分指标结果尚可,但有些质量指标结果令人不满意,实验室应加强重点质量指标的监测,根据质量指标反馈的信息采取措施,持续改进。

宏基因组高通量测序技术的临床应用:现状、挑战与前景

传统微生物学检测方法难以满足临床复杂多变的病原体检测需求。近年来,新兴的宏基因组高通量测序(metagenomic next-generation sequencing, mNGS)技术被广泛应用于各种感染性疾病诊断、新发及突发传染病病因分析、耐药基因检测和宿主免疫应答分析等领域。mNGS检测流程十分复杂,检测过程中每一步骤引入的变异均会影响检测结果的准确性。检测方法缺乏标准化、人员认知和能力不足、仪器试剂成本高昂是mNGS临床推广面临的主要障碍,因此亟需对检测方法进行标准化、规范化,快速提升检测人员的认知和综合能力。未来,整合mNGS病原体信息、转录组信息和耐药基因信息以提高对感染性疾病患者的临床管理水平是mNGS检测的重要发展方向。

我国18个肿瘤标志物检验项目性能规范的制定

目的根据意大利米兰会议确定的性能规范设定模式,基于生物学变异(BV)和基于当前技术水平模式导出性能规范,为我国18个肿瘤标志物检验项目推荐允许总误差(TEa)、允许不精密度(CV)和允许偏倚(Bias)。方法通过Clinet⁃EQA软件收集参加国家卫生健康委临床检验中心2019—2021年肿瘤标志物室间质评(EQA)活动实验室的数据[包括EQA数据和室内质控(IQC)数据]。对于有BV数据的检验项目,将各项目EQA数据的“百分差值=(测量结果-靶值)/靶值×100%”、IQC数据的“当月在控CV”分别与基于BV导出的3种水平评价标准比较,计算各年份所有批号的百分差值通过率和CV通过率,当通过率达到80%,则该水平的性能规范满足作为该项目推荐性能规范的要求。对于无BV数据的检验项目或者基于BV导出的3种水平性能规范均无法作为推荐标准的检验项目,则基于当前技术水平来导出推荐性能规范:TEa当前=1/2×(P90-P10),“当月在控CV”的P80可作为该批号基于当前技术水平推导出的允许CV。利用公式Bias≤TEa-z×CV导出推荐允许Bias。结果18个检验项目推荐的TEa/CV如下:AFP(21%/7%),CEA(20.5%/6.8%),HCG(23.4%/7.8%),β⁃HCG(20.4%/6.8%),T⁃PSA和F⁃PSA(24.4%/7.5%),CA125(20.9%/6.5%),CA15⁃3(20.8%/7%),CA19⁃9(25%/7.8%),CA50和CA242(24%/8%),CA72⁃4(22.8%/7.6%),HE4和CYFRA21⁃1(21.9%/7.3%),NSE(20.9%/8.2%),SCCA(22.9%/7.7%),Ferritin(25%/7.1%),β2⁃MG(21.3%/7.1%)。结论为18个肿瘤标志物检验项目推荐了符合我国实验室当前检测水平的允许总误差、允许不精密度和允许偏倚。

无创产前检测临床应用的标准化

来自国家卫生健康委员会临床检验中心副主任兼临床分子与免疫室主任李金明教授给我们带来了“无创产前检测临床应用如何标准化”的讲座,他从标准化与质量保证的关键环节,分子检测科研与临床应用之间的异同,临床有效性与临床预期用途,分析前标本采集的重要性,性能验证与性能确认以及结果报告与解释六个方面给我们进行了详细阐述。从每一个详细的细节让我们了解了实验室质量管理的“灵魂”,以及遗传咨询的流程,作为分子遗传咨询师应该了解的内容及NIPT遗传咨询的关键点。

北京某医院感染性腹泻患者致泻性大肠埃希菌毒力和耐药特征分析

目的明确本院感染性腹泻患者致泻性大肠埃希菌毒力和耐药特征。方法采用VITEK MS微生物质谱检测系统初步鉴定,多重实时荧光PCR检测毒力基因,对本院感染性腹泻患者临床分离的致泻性大肠埃希菌(Diarrheagenic Escherichia coli,DEC)进行5种型别鉴定。微量肉汤稀释法和E-test法药敏试验检测DEC菌株的耐药表型特征。二代测序及生物信息学分析其耐药分子特征。采用Fisher确切概率法进行统计学分析。结果本院DEC检出率为11.9%,其中EAEC占比37.5%,非典型EPEC占比34.38%,ETEC占比25.0%,EIEC占比3.12%,未检出EHEC菌株。32株DEC对氨苄西林、四环素、甲氨苄啶/磺胺异恶唑耐药率最高,分别为53.12%、43.75%和37.5%。ESBLs(+)株占比18.75%,其多重耐药菌株检出率为83.83%,显著高于ESBLs(-)菌株,差异有统计学意义(P=0.042)。32株DEC共有25个ST型,优势基因型为ST10共4株(12.5%),ST28、ST31和ST3153各2株(各占比6.25%),其他21个型别各1株菌(各占比3.13%)。EAEC中检出1株携带bla_(NDM-1)的耐碳青霉烯类菌株。结论我院感染性腹泻患者的DEC以aggR、pic、astA、eae 4种毒力基因较为常见,以EAEC、EPEC为主要型别,基因型别呈高度多态性,检出多重耐药菌株。

基于我国WS/T促甲状腺激素受体抗体检测方法的性能验证

目的 基于我国卫生行业标准(WS/T)对迈瑞高敏磁微粒化学发光法(CLIA)检测TRAb进行性能验证。方法 参照最新WS/T文件,以Roche Cobase 601电化学发光法(ECLIA)作为已验证的检测方法,对迈瑞CLIA的精密度、基于患者血清的正确度、线性、检出限、参考区间进行验证,评价迈瑞与Roche的诊断符合率。结果 迈瑞CLIA检测TRAb的批内CV为1.56%~4.60%,实验室内CV为1.65%~5.19%;与Roche ECLIA的实验室相对差值为-3.6%;在0.02~44.00IU/L范围内线性拟合方程Y=1.040X+0.636,线性系数R2=0.990;24个检出限临界值数据22个(91.7%)≤0.3IU/L;20个健康体检者血清TRAb检测结果仅1个超出参考区间≤1.9IU/L;与Roche ECLIA的诊断总符合率90%,阳性符合率75%,阴性符合率100%,Kappa检验值0.7826(P<0.001)。结论 迈瑞高敏磁微粒CLIA的精密度、基于患者血清的正确度、线性范围、检出限均符合厂家声明,参考区间经验证可转移至我实验室使用,与Roche的诊断符合率较好,该方法性能能满足本医院临床检验需求。

免疫抑制剂检测策略的研究进展

免疫抑制剂是一类能够抑制移植排斥反应,维持器官移植术后患者健康的药物。由于治疗窗口窄、毒副反应大,个体差异大等特点,免疫抑制剂已成为重要治疗药物监测项目。然而临床上面临药物浓度结果与药效相关性不佳、侵入性操作风险等问题,限制其发展。随着相关研究发展,越来越多新检测策略出现,如游离药物浓度、干血斑、唾液检测等,进一步推动免疫抑制剂检测向着准确、便捷、低风险的方向发展。该文总结了免疫抑制剂各类检测策略的研究进展,为临床选择提供参考。

人白细胞介素-6重组蛋白的制备

目的利用大肠杆菌原核表达系统制备人白细胞介素-6(IL-6)重组蛋白,并对蛋白进行纯化,为后期制备IL-6标准物质和质控品提供候选物质基础。方法以现有IL-6原核表达质粒6His-IL-6-pET-28a(+)为模板,通过PCR扩增目的片段,并在其N端添加His标签。通过酶切连接的方式,将该段基因克隆至pRSFDuet载体,随后转化BL21感受肽获得表达菌株。利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导,得到IL-6重组蛋白,利用镍柱亲和层析技术对蛋白进行纯化,并比对两个表达菌株的蛋白表达量,选择高表达菌株进行后续实验。结果成功构建6His-IL-6-pRSFDuet原核表达质粒,根据蛋白表达比对情况选择6His-IL-6-pET-28a(+)质粒进行后续实验,确定最适IPTG诱导浓度(0.2 mmol/L)、诱导温度(20℃)、诱导时间(20 h)等条件,在BL21中高效表达重组IL-6蛋白,纯化后的蛋白不仅可通过临床检测,且稀释倍数与检测结果之间呈线性关系。结论成功获得低成本、高浓度、高纯度的IL-6重组蛋白,为后续IL-6标准物质和质控品的制备奠定了基础。

临床实验室室间质量评价不同计划的结果评价探讨与研究

在室间质量评价计划(能力验证)中,对各参评实验室回报结果的处理和评价是最为重要的环节之一,直接影响到室间质量评价计划的有效性,这也是室间质量评价组织者和参评单位最常出现争议的环节。室间质量评价计划(external quality assessment,EQA)的结果和反馈报告应及时有效,应包括(但不限于):定量、半定量和定性项目所有参评实验室结果的统计分析、总体和不同分组中离群值的判断与剔除、单样本和多样本以及单参数和多参数的结果和分布的评价、指定值的确定、标准差的确定、图形显示,以及在不同室间质量评价计划中多个样本和参数的整合信息等。室间质量评价计划结果的处理与评价方式一直在向着更加客观与合理的方向发展。

通过ISO 15189认可医学实验室检验前质量指标结果分析

目的通过分析我国获得ISO 15189认可医学实验室检验前质量指标结果,了解国内临床实验室检验前过程的质量水平。方法国家卫生健康委临床检验中心联合31个省级临床检验中心同步开展质量指标室间质量评价计划,并通过已开发的Clinet-EQA系统下发调查表,收集2016—2019年获得ISO 15189认可医学实验室的基本信息和检验前质量指标数据,并按照专业类别、信息化建设水平等进行统计分析。结果2016—2019年,除了血培养污染率和标本溶血率外,所有通过ISO 15189认可医学实验室的所有检验前质量指标都达到3σ的最低可接受标准。其标本类型错误率、标本采集量错误率、标本容器错误率、标本溶血率、抗凝标本凝集率以及血培养污染率在4σ以上水平的实验室分别为99.67%、99.51%、100%、97.11%、96.75%和38.74%,急诊标本和住院标本检验前周转时间中位数的分布分别为50 min内和10~100 min。结论我国通过ISO 15189认可实验室检验前质量表现较好,但实验室仍需关注血培养污染率、抗凝标本凝集率和标本溶血率。

我国心肌标志物检验项目性能规范的设定

目的制定我国心肌标志物———心肌肌钙蛋白I(cTnI)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌红蛋白(Myo)、同型半胱氨酸(Hcy)的性能规范,包括允许总误差(TEa)、允许不精密度(Ia)和允许偏倚(Ba)。方法根据米兰会议性能规范设定模式中的模式二(基于生物学变异)和模式三(基于当前技术水平)设定性能规范。结果基于生物学变异推荐cTnI的TEa、Ia和Ba分别为27.91%(适当)、10.54%(最低)、10.52%;基于生物学变异推荐cTnT的TEa和Ia分别为24.47%(最佳)、15.30%(适当);基于生物学变异推荐Myo的TEa、Ia和Ba分别为19.60%(适当)、10.43%(最低)、2.39%;基于当前技术水平推荐Hcy的TEa、Ia和Ba分别为20.00%、8.50%、5.98%。结论制定了符合我国临床实验室当前检测水平的心肌标志物性能规范。

血液筛查ELISA灰区设定的血站支出成本与效果的卫生经济学评估

目的 建立ELISA灰区策略的卫生经济学评估模型,分析ELISA灰区设定策略的成本-效果。方法 由筛查策略选择树、病原体感染子决策树和病原体检测子决策树3部分组成血清学灰区策略评估模型,从文献和资料中获得模型中的关键参数,通过计算比较设置ELISA灰区策略的成本-效果,并进行多因素敏感性分析。结果 实施ELISA灰区设定的策略后,可额外检测出血清学假阴性标本5.86例/10万人次,其中包括HBV标本为4.93例/10万人次,HCV标本为0.27例/10万人次,HIV标本为0例/10万人次,梅毒标本为0.66例/10万人次。但灰区策略设定后,血站为每10万人次检测中增加1例感染标本的血清学检出,需额外负担约100万元的费用。结论 通过本研究建立了一套血清学检测策略的成本-效果评价模型。虽然ELISA灰区设置策略可以筛查出少量的血清学阳性标本,但付出的成本远高于目前的可承受能力。

中国临床微生物实验室应对重大传染病疫情能力建设指导原则

近年来,重大传染病疫情在全球范围内时有发生,临床微生物实验室在重大传染病的诊断、治疗和防控工作中具有至关重要的作用。本指导原则结合当前新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情及中国临床微生物实验室现状,针对临床微生物实验室应对重大传染病疫情应具备的综合能力,从实验室建筑布局、实验室管理及生物安全、技术平台建设、人员能力建设、质量保证和临床研究能力提升等方面,提供了指导意见。以实现平战结合,在加强临床微生物实验室能力建设的基础上,满足重大传染疫情突发和常态化检验需求。

2013-2018年我国7座城市非维生素K拮抗剂口服抗凝药的临床应用现状及分析

目的探寻近年来国内非维生素K拮抗剂口服抗凝药(NOAC)使用情况,并根据结果提出建议.方法从我国7座城市80家医院抽取76292张含有NOAC的门诊处方进行统计分析,并与药品说明书、最新用药指南等循证医学证据进行对比.结果开具NOAC处方患者的平均年龄为69岁,男女比例为1:0.91.处方总量呈逐年上升趋势.上海、北京和广州的处方量占比最大.诊断为心房颤动、下肢深静脉血栓和肺栓塞的处方占比最大,高达32.23%的处方为适应证不适宜或无适应证用药.1.95%涉及利伐沙班的处方和9.22%涉及达比加群酯的处方用法不适宜,其中24张涉及达比加群酯的处方用法需将胶囊打开服用.高龄、肾功能损伤、肝功能损伤及出血诊断的处方比例较低,但多数未标明损伤程度.1张含利伐沙班的处方诊断为风湿性心脏病人工瓣膜置换术后.结论NOAC逐渐被越来越多的患者所接受.处方在药品适应证方面的不合理情况较多.特殊人群剂量调整和禁忌证方面的处方规范性有待加强.

临床实验室自身抗体检测性能验证与质量控制

自身抗体检测可用于临床自身免疫病的诊断、病情评估、治疗监测和预后判断,但临床是否能有效应用的前提条件是检测结果的准确和可靠。为保证实验室所使用的检测试剂/系统在实际使用条件(人员、仪器、标准操作程序、环境)下呈现出符合试剂盒说明书所宣称的检测性能,实现其确定的临床预期用途,必须在开展临床检测前选用参考品或真实临床样本,通过简化的重复性及方法学比较实验对检测系统整体的精密度和准确度等分析性能进行验证。通过性能验证过程,实验室不仅可建立和完善配套的检测系统,还可明确日常检测的关键质量控制点,形成标准操作程序并建立室内质控及其失控规则。在随后的日常临床实际检测过程中,再通过严格地遵循标准操作程序并监控验证时所建立的关键质量控制点,以及通过开展室内质量控制和参加室间质量评价发现可能存在的影响检测精密度和准确度的问题,通过分析问题的原因,采取纠正措施,持续改进,从而实现对患者样本的持续可靠检测。

用于低分子量肝素治疗监测的抗Xa因子活性的性能验证和校准方法探讨

目的探讨应用抗Xa因子活性监测低分子量肝素(LMWH)的性能验证方法、评价标准和以及监测普通肝素(UFH)和LMWH时,不同校准方法对抗Xa因子活性检测结果的影响。方法参考美国临床和实验室标准化协会文件、我国卫生行业标准和厂家说明书,对STA⁃R Evolution全自动凝血分析仪检测抗Xa因子活性的精密度、线性范围、正确度和检出限进行验证。分别使用UFH校准和混合校准方法后检测含UFH的样品;分别使用LMWH校准和混合校准方法后检测含LMWH的样品,进行Pearson相关性分析,计算偏差和可比性符合率,绘制Bland⁃Altman偏差图。结果精密度验证的批内和批间精密度变异系数分别为1.6%~4.3%和1.6%~6.1%;线性回归方程斜率为1.0245,相关系数r为0.9993,样品的绝对偏差为-0.04~-0.03 IU/mL,相对偏差为-3.7%~2.8%;正确度验证样品的偏倚绝对数为0.00 IU/mL,偏倚相对数为-4.4%~2.5%;检出限验证结果的偏差为-0.03~0.01 IU/mL;UFH校准与混合校准方法比较,临床标本检测结果的绝对偏差为-0.02~0.02 IU/mL,相对偏差为-5.2%~2.7%,可比性符合率为100%;LMWH校准与混合校准方法比较,临床标本检测结果的绝对偏差为-0.02~0.02 IU/mL,相对偏差为-5.7%~3.4%,可比性符合率为100%。结论STA⁃R Evolution全自动凝血分析仪抗Xa因子活性监测LMWH的性能验证结果符合厂家要求或本研究设定标准;UFH校准与混合校准、LMWH校准与混合校准方法用于肝素类药物治疗监测的抗Xa因子活性检测结果相关性良好。