2009—2023年中国16个省份急性呼吸道感染病例中人呼吸道合胞病毒的流行特征分析

目的了解2009—2023年我国16个省份急性呼吸道感染(ARI)病例中人呼吸道合胞病毒(HRSV)的流行特征。方法研究资料来源于2009—2023年我国16个省份ARI病例监测数据,共有28 278例ARI病例纳入研究。监测病例的临床标本进行了HRSV核酸筛查,并分析不同年龄组、不同地区和不同月份病例的HRSV检出率差异。结果 2009年1月至2023年9月,共纳入28 278例ARI病例。病例年龄范围为<1月龄~112岁,年龄M(Q1,Q3)为3岁(1岁,9岁)。28 278例ARI病例中有3 062例HRSV核酸阳性,总检出率为10.83%。2009—2019年HRSV检出率为9.33%,病毒主要以冬春季流行为主。在新型冠状病毒感染(COVID-19)流行期间,HRSV检出率在6.32%~18.67%之间波动;2022年底至2023年初未出现HRSV传统的冬季流行高峰,在2023年4—5月出现了HRSV反季节流行。87.95%(2 693/3 062)HRSV阳性病例为 5岁以下的儿童,不同年龄组中HRSV检出率的差异具有统计学意义(P<0.001),呈现出随着年龄增加HRSV检出率降低的趋势(P<0.001),其中以<6月龄组患儿的HRSV检出率最高(25.69%)。和2009—2019年相比,2020—2023年期间不同年龄组的HRSV检出率从高到低的排序发生变化,HRSV阳性病例的年龄M(Q1,Q3)从1岁(6月龄,3岁)增加至2岁(11月龄,3岁)。结论通过连续15年的HRSV监测分析发现,5岁以下的儿童,尤其是<6月龄婴幼儿是HRSV感染的主要高发人群。COVID-19流行期间,我国HRSV流行水平和流行模式发生了变化。

咖啡酸苯乙酯对朊病毒体外复制、扩增和纤维形成的抑制作用研究

目的探究咖啡酸苯乙酯(CAPE)对朊病毒(PrPSc)复制、扩增及纤维形成的影响及可能的机制。方法通过CCK8实验检测CAPE处理3、7 d后朊病毒感染细胞模型SMB-S15的细胞活力,得出CAPE对SMB-S15的最大安全浓度;选取安全范围内的浓度处理细胞,利用蛋白质免疫印迹方法分析CAPE处理前后细胞内PrPSc的含量变化。利用蛋白质错误折叠循环扩增(PMCA)技术和蛋白质免疫印迹方法检测CAPE处理前后扩增产物中PrP^(Sc)的含量变化。利用实时震动蛋白诱导扩增(RT-QuIC)技术检测CAPE处理前后朊蛋白纤维形成的变化情况。通过分子相互作用检测CAPE与小鼠重组全长朊蛋白的结合能力。结果 CCK8细胞活力实验结果显示:1 μmol/L CAPE处理细胞3、7 d时细胞存活率与对照组相比,差异无统计学意义(均P>0.05),当CAPE浓度超过1 μmol/L时,CAPE处理细胞3、7 d细胞存活率降低,与对照组之间差异均存在统计学意义(均P<0.05),因此1 μmol/L为CAPE处理SMB-S15细胞的最大安全浓度。蛋白质免疫印迹实验结果显示:CAPE处理3、7 d均可检测到SMB-S15细胞中PrPSc含量的降低(均P<0.05)。PMCA实验产物通过蛋白质免疫印迹方法检测结果显示:经CAPE处理后,适应株SMB-S15、139A、ME7的PMCA扩增产物中PrPSc含量(相对灰度值)降低,与对照组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。RT-QuIC实验结果显示:CAPE处理后139A、ME7、SMB-S15小鼠适应株和朊病毒感染细胞SMB-S15在反应中形成朊蛋白纤维(ThT峰值)均降低,且CAPE对不同种子朊蛋白纤维的抑制程度差异有统计学意义(均P<0.05),其中对ME7的抑制作用更明显。分子相互作用结果显示:CAPE与鼠源重组朊蛋白存在明显的分子结合,平衡解离常数KD为(2.92±0.41)×10^(-6) mol/L。结论 CAPE对PrPSc体外复制、扩增和纤维形成均具有抑制作用,可能与CAPE和朊蛋白特异性结合有关。

人呼吸道合胞病毒中和抗体检测方法的建立与初步应用

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素进行优化。验证该方法的重复性,并与传统PRNT验证其相关性。利用优化的PRNT方法检测BALB/c小鼠血清(融合蛋白肌肉注射免疫)对HRSV A和B亚型的中和抗体滴度。结果Palivizumab的表达量约为50 mg/L。PRNT的最佳工作条件为:培养细胞为HEp-2细胞,细胞培养时间为2 d,最佳固定通透方式为4%(V/V)多聚甲醛室温固定15 min后0.2%(V/V)Triton X-100通透15 min,去掉封闭步骤。优化后该方法的重复性验证总体变异系数均<15%,与传统PRNT呈现良好的线性关系,Spearman相关系数rs高达0.983。在检测小鼠血清对HRSV A亚型long株和B亚型9320株的中和抗体滴度时,融合蛋白联合AlOH和CpG佐剂诱导小鼠产生的中和抗体滴度最高。结论本研究建立的HRSV中和抗体检测方法快速、可重复、高通量,能够适用于A、B亚型HRSV的中和抗体检测。

人呼吸道合胞病毒检测方法的研究进展

各年龄段人群均可能感染HRSV,5岁以下儿童、老年人和免疫功能低下人群为主要高危人群。尽管年长的儿童和成年人感染后症状相对较轻,甚至无症状,但仍可能成为潜在的病毒传播者。因此,使用高效、精准、快速的检测方法及时发现传染源,迅速阻断传播,是遏制潜在疫情传播的重要手段。然而,HRSV感染的临床表现与其他呼吸道病毒引起的急性呼吸道感染难以区分,需要依据病原学检测结果进行鉴别。本文依据检测原理总结了4类HRSV常用检测方法:抗原检测、核酸检测、抗体检测和病毒分离,并对这四类方法的优缺点,原理和适用场景等进行分析与比较,对HRSV检测方法的研究进展进行了综述和展望。

2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染病例肠道病毒感染型别分析

目的了解2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染(ARIs)病例中肠道病毒(EV)的感染状况,分析EV在ARIs中的流行情况及型别组成。方法于2017年10月至2021年5月,采集河南省漯河市中心医院1828例ARIs患者的咽拭子样本,并收集相关临床流行病学资料。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)筛选EV阳性样本,随后对阳性样本采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增5′非翻译区(5′UTR),使用Enterovirus Genotyping Tool在线定型工具初步定型后采用RT-PCR法进行VP1区全长扩增,再次比对确定EV分型。结果1828例ARIs病例中,男性占56.7%(1036例);年龄M(Q1,Q3)为3(1,5)岁;5岁以下人群占71.6%(1309例)。1828例ARIs病例中,通过qPCR检测鉴定EV阳性样本共有71例,检出率为3.88%(71/1828);男、女性EV检出率分别为3.28%(34/1036)和4.67%(37/792),差异无统计学意义(χ^(2)=2.32,P=0.14)。2~<6岁、6月龄~<2岁、6~<10岁和<6月龄的EV检出率依次为6.29%(48/763)、3.00%(18/600)、2.52%(4/159)和1.67%(1/60)(χ^(2)=27.91,P<0.001)。2017年秋、冬季EV检出率为0.92%(3/326);2018—2020年各年EV检出率依次为1.18%(6/508)、2.47%(12/485)和8.31%(34/409),呈逐年上升趋势(χ_(趋势)^(2)=29.76,P<0.001),主要流行季节为夏、秋季;2021年春季检出率为4.00%(4/100)。共鉴定出12种型别:CVA2、CVA4、CVA5、CVA6、CVA10、CVB3、CVB5、E5、E11、E30、PV-1和EV-D68,其中CVA2、CVA10、CVA6和CVB3为优势型别。59例EV分型样本中,临床表现以上呼吸道感染为主(36/59,61.01%)。上呼吸道感染检出的优势型别为CVA10(10/36,27.78%)、CVA6(9/36,25.00%)和CVB3(8/36,22.22%);下呼吸道感染中检出的优势型别为CVA2(7/19,36.84%)。结论2017—2021年河南省漯河市ARIs病例中EV感染具有明确的季节性和年龄特征,上、下呼吸道感染所检出的优势型别有所不同。