2009—2023年中国16个省份急性呼吸道感染病例中人呼吸道合胞病毒的流行特征分析

目的了解2009—2023年我国16个省份急性呼吸道感染(ARI)病例中人呼吸道合胞病毒(HRSV)的流行特征。方法研究资料来源于2009—2023年我国16个省份ARI病例监测数据,共有28 278例ARI病例纳入研究。监测病例的临床标本进行了HRSV核酸筛查,并分析不同年龄组、不同地区和不同月份病例的HRSV检出率差异。结果 2009年1月至2023年9月,共纳入28 278例ARI病例。病例年龄范围为<1月龄~112岁,年龄M(Q1,Q3)为3岁(1岁,9岁)。28 278例ARI病例中有3 062例HRSV核酸阳性,总检出率为10.83%。2009—2019年HRSV检出率为9.33%,病毒主要以冬春季流行为主。在新型冠状病毒感染(COVID-19)流行期间,HRSV检出率在6.32%~18.67%之间波动;2022年底至2023年初未出现HRSV传统的冬季流行高峰,在2023年4—5月出现了HRSV反季节流行。87.95%(2 693/3 062)HRSV阳性病例为 5岁以下的儿童,不同年龄组中HRSV检出率的差异具有统计学意义(P<0.001),呈现出随着年龄增加HRSV检出率降低的趋势(P<0.001),其中以<6月龄组患儿的HRSV检出率最高(25.69%)。和2009—2019年相比,2020—2023年期间不同年龄组的HRSV检出率从高到低的排序发生变化,HRSV阳性病例的年龄M(Q1,Q3)从1岁(6月龄,3岁)增加至2岁(11月龄,3岁)。结论通过连续15年的HRSV监测分析发现,5岁以下的儿童,尤其是<6月龄婴幼儿是HRSV感染的主要高发人群。COVID-19流行期间,我国HRSV流行水平和流行模式发生了变化。

乙型流感病毒Yamagata系毒株的消失及其疫苗株更换的思考及讨论

乙型流感病毒B/Yamagata系毒株作为季节性流感病毒,已流行近半个世纪。期间,B/Yamagata系毒株与其他亚型或谱系流感病毒一样,经过不断变异和进化,形成多个流行分支。2014年,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)推荐B/Yamagata系3A分支B/Phuket/3073/2013为候选疫苗株,之后,3A分支病毒一直为B/Yamagata系的优势毒株。2020年3月以来,全球再未分离到B/Yamagata系毒株,B/Yamagata系毒株可能已在人间消失。近期,关于去除掉四价流感疫苗中B/Yamagata组分的建议越来越明确。本文回顾了乙型流感及其疫苗株的发展历史,客观分析了B/Yamagata系毒株消失的可能原因,综合描述了病毒学、流行病学、免疫学以及与疫苗免疫相关的社会科学、疫苗生产企业等多学科、多部门的观点,并对防止B/Yamagata系毒株重现提出建议,同时也建议疫苗监管部门和生产企业做好工作计划,为四价疫苗更换为三价疫苗做好充分准备。

我国罕见G9P[8]-A2基因型重配株轮状病毒全基因组分子特征分析

目的 了解我国1株G9P[8]基因型A组轮状病毒(RVA)JL18221140的全基因组分子特征。方法 对我国吉林省1例G9P[8]基因型RVA(JL18221140)原始粪便标本采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)一步法扩增11个基因节段,并通过DNAStar, MEGA 11.0等生物信息分析软件进行同源性及进化分析。结果 JL18221140的全基因组11个节段的基因型为G9-P[8]-I1-R1-C1-M1-A2-N1-T1-E1-H1,NSP1基因型呈现DS-1样特征。系统发育分析显示VP7和VP4分别聚集在谱系G9-Ⅵ和P[8]-Ⅲ中。结论 JL18221140为G9P[8]基因型中罕见的G9P[8]-A2重配株,该基因型可能是由中国流行的G9P[8]-A1和G2P[4]-A2毒株共感染过程中基因组间重配产生的。表明对RVA持续监测并对全基因组测序的重要性,有利于了解我国RVA毒株的遗传变异情况,为今后病毒的防控和疫苗的研发提供更有效的基础数据。

人呼吸道合胞病毒SH蛋白混合多肽免疫原性初步研究

本研究旨在探讨人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)小疏水蛋白(Small hydrophobic protein,SH)T细胞表位肽的免疫原性和保护效果。通过设计并合成覆盖SH蛋白序列全长的10条多肽,利用HRSV感染小鼠的脾淋巴细胞进行IFN-γ-酶联免疫斑点(Enzyme-linked immunospot assay, ELISpot)的检测,筛选出5条能显著刺激IFN-γ产生的SH蛋白T细胞表位多肽。将其与CpG和磷酸铝(AL)佐剂配制成混合多肽疫苗,两次皮下给药的方式免疫C57BL/6J小鼠,评价其免疫原性和保护效果。结果显示,与佐剂对照组相比,SH蛋白混合多肽疫苗可以诱导免疫后的小鼠产生抗原特异性IgG抗体和Th1偏向的T细胞免疫应答,降低HRSV感染后肺病毒载量,并减轻肺脏病理损伤。研究结果表明,SH蛋白混合多肽通过免疫小鼠可以引起良好的免疫原性,并保护小鼠抵抗HRSV的感染。为进一步研究基于SH蛋白的HRSV多肽疫苗提供了科学依据。

2019—2023年吉林省长春市儿童急性呼吸道感染住院病例中人偏肺病毒的基因型别和流行特征分析

目的了解吉林省长春市儿童急性呼吸道感染(ARI)住院病例中人偏肺病毒(HMPV)的基因型别和流行特征。方法采集2019年6月至2023年6月长春市儿童医院ARI住院病例的咽拭子标本,收集病例的流行病学和临床信息。采用荧光定量RT-PCR方法鉴定HMPV阳性病例,并对阳性病例的病毒核酸进行G基因扩增及亲缘关系分析。结果共纳入儿童ARI住院病例3311例,年龄范围为0~17岁,年龄M(Q_(1),Q_(3))为2(1,3)岁;男性患儿1811例(54.70%)。共检出HMPV阳性病例167例,检出率为5.04%,其中<5岁病例占92.81%(155/167)。2019年HMPV检出率为6.37%(30/471),2020年降至最低(2.31%,10/432),2021、2022年有所回升,检出率分别为4.70%(60/1277)和4.56%(21/461),2023年HMPV检出率升高至6.87%(46/670),不同年份间的检出率差异具有统计学意义(P<0.05)。不同年份HMPV的流行高峰也存在差异,表现为单峰或双峰流行。共获得79条HMPV的G基因序列,A亚型和B亚型分别占48.10%和51.90%,其中A亚型均为A2c重复插入变异株,B亚型以B2基因型为主。HMPV在不同年份中可表现为A、B亚型的单独流行或共流行,存在亚型更替模式。结论2019—2023年不同年份间长春市ARI儿童住院病例中HMPV检出率差异较大,且存在HMPV的A、B基因亚型更替模式。

血清学检测在识别新型冠状病毒感染和重复感染中的应用

新型冠状病毒已感染了全世界绝大多数人。新型冠状病毒感染的无症状比例较高,无症状者往往不就医,因而目前基于流感样病例的疾病监测和流行病学研究往往低估新型冠状病毒感染率。核酸检测和抗原检测用于识别近期的新型冠状病毒感染,且由于灵敏度的限制可能发生漏诊。血清学检测在流行病学研究中常用于识别新型冠状病毒感染和重复感染,但尚无公认的检测方法和判断标准。本文总结了目前真实世界研究中常用于判断新型冠状病毒感染和重复感染的方法,为未来有关研究设计和实施提供依据。

2019年青岛市3例有摩洛哥旅行史甲型肝炎病例感染甲型肝炎病毒株基因特征

目的分析2019年青岛市从3例有摩洛哥旅行史甲型肝炎(甲肝)病例中检测到的甲肝病毒(Hepatitis A virus,HAV)株基因特征和感染来源。方法对甲肝病例进行流行病学调查,采集急性期血清标本并提取HAV核酸,采用巢式RT-PCR扩增和/或拼接HAV VP1-2A区和近全基因组核苷酸序列并构建系统进化树,分析本研究HAV与GenBank中参考株的核苷酸和氨基酸同源性以确定基因型,分析主要中和抗原表位关键氨基酸位点突变和基因重组。结果3例甲肝病例在发病潜伏期内有摩洛哥旅行史和半生食贝类海产品史,并检测到HAV核酸。3株HAV均位于系统进化树的ⅠA基因亚型欧洲分支,且在VP1-2A区与ⅠA亚型参考株的核苷酸和氨基酸差异分别仅为0.29%-7.45%和0.00%-2.59%;病例1感染的HAV与2018年爱尔兰分离株18IRL89195近全基因组的核苷酸序列同源性最高(98.41%),仅在编码区的3D区第80位(V/L)和第372位(K/R)氨基酸不同。病例2和病例3感染的HAV近全基因组序列完全相同,与2016年法国污水分离株G22-029的核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为99.85%和100%。未发现3株HAV存在主要中和抗原表位关键氨基酸位点突变和基因重组。结论本研究HAV毒株属于ⅠA基因亚型,推测为境外感染且可能与半生食贝类海产品有关。

2017-2022年河南省漯河市急性呼吸道感染病例中鼻病毒感染状况及其分子分型研究

目的:了解河南省漯河市2017-2022年急性呼吸道感染(ARIs)病例中鼻病毒(RV)的感染状况及其分子型别组成。方法:于2017年10月至2022年6月,收集河南省漯河市中心医院2 270例ARIs病例的临床和流行病学资料,并采集病例咽拭子标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)筛选RV阳性标本,随后对阳性标本使用巢式逆转录聚合酶链式反应(nested RT-PCR)扩增VP1区全长,并使用MEGA软件结合国际病毒分类委员会推荐的169条RV参考株序列构建系统进化树以确定RV分型。结果:2 270例ARIs病例中,男性病例1 283例(56.52%);年龄 M( Q_(1), Q_(3))为3(1,6)岁,5岁以下人群占68.59%(1 557/2 270);137例病例(6.04%)检出RV,其中68例病例(49.64%)与其他病毒合并检出,与肠道病毒的合并检出最常见,占14.60%(20/137)。0~4岁、5~14岁、15~59岁和≥60岁年龄组中RV检出率分别为6.42%(100/1 557)、4.69%(21/448)、3.80%(6/158)和9.35%(10/107),差异无统计学意义( χ^(2)=5.310, P=0.150)。新型冠状病毒感染疫情前(2017-2019年)和期间(2020-2022年),RV总体检出率差异无统计学意义( χ^(2)=1.823, P=0.177)。共获得109条VP1序列,包含62个型别,其中RV-A、RV-B和RV-C三个种分别检出42、3和17个型别。 结论:RV为2017-2022年河南省漯河市ARIs病例中主要流行的病原体之一,存在多个RV型别共流行,无明显优势型别。

咖啡酸苯乙酯对朊病毒体外复制、扩增和纤维形成的抑制作用研究

目的探究咖啡酸苯乙酯(CAPE)对朊病毒(PrPSc)复制、扩增及纤维形成的影响及可能的机制。方法通过CCK8实验检测CAPE处理3、7 d后朊病毒感染细胞模型SMB-S15的细胞活力,得出CAPE对SMB-S15的最大安全浓度;选取安全范围内的浓度处理细胞,利用蛋白质免疫印迹方法分析CAPE处理前后细胞内PrPSc的含量变化。利用蛋白质错误折叠循环扩增(PMCA)技术和蛋白质免疫印迹方法检测CAPE处理前后扩增产物中PrP^(Sc)的含量变化。利用实时震动蛋白诱导扩增(RT-QuIC)技术检测CAPE处理前后朊蛋白纤维形成的变化情况。通过分子相互作用检测CAPE与小鼠重组全长朊蛋白的结合能力。结果 CCK8细胞活力实验结果显示:1 μmol/L CAPE处理细胞3、7 d时细胞存活率与对照组相比,差异无统计学意义(均P>0.05),当CAPE浓度超过1 μmol/L时,CAPE处理细胞3、7 d细胞存活率降低,与对照组之间差异均存在统计学意义(均P<0.05),因此1 μmol/L为CAPE处理SMB-S15细胞的最大安全浓度。蛋白质免疫印迹实验结果显示:CAPE处理3、7 d均可检测到SMB-S15细胞中PrPSc含量的降低(均P<0.05)。PMCA实验产物通过蛋白质免疫印迹方法检测结果显示:经CAPE处理后,适应株SMB-S15、139A、ME7的PMCA扩增产物中PrPSc含量(相对灰度值)降低,与对照组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。RT-QuIC实验结果显示:CAPE处理后139A、ME7、SMB-S15小鼠适应株和朊病毒感染细胞SMB-S15在反应中形成朊蛋白纤维(ThT峰值)均降低,且CAPE对不同种子朊蛋白纤维的抑制程度差异有统计学意义(均P<0.05),其中对ME7的抑制作用更明显。分子相互作用结果显示:CAPE与鼠源重组朊蛋白存在明显的分子结合,平衡解离常数KD为(2.92±0.41)×10^(-6) mol/L。结论 CAPE对PrPSc体外复制、扩增和纤维形成均具有抑制作用,可能与CAPE和朊蛋白特异性结合有关。

人呼吸道合胞病毒中和抗体检测方法的建立与初步应用

目的建立用于人呼吸道合胞病毒(HRSV)中和抗体滴度检测的噬斑减少中和实验(PRNT),并进行条件优化与初步应用。方法应用CHO表达系统制备帕利珠单克隆抗体(Palivizumab),同时对细胞种类、细胞培养时间、固定通透方法、封闭方法等影响因素进行优化。验证该方法的重复性,并与传统PRNT验证其相关性。利用优化的PRNT方法检测BALB/c小鼠血清(融合蛋白肌肉注射免疫)对HRSV A和B亚型的中和抗体滴度。结果Palivizumab的表达量约为50 mg/L。PRNT的最佳工作条件为:培养细胞为HEp-2细胞,细胞培养时间为2 d,最佳固定通透方式为4%(V/V)多聚甲醛室温固定15 min后0.2%(V/V)Triton X-100通透15 min,去掉封闭步骤。优化后该方法的重复性验证总体变异系数均<15%,与传统PRNT呈现良好的线性关系,Spearman相关系数rs高达0.983。在检测小鼠血清对HRSV A亚型long株和B亚型9320株的中和抗体滴度时,融合蛋白联合AlOH和CpG佐剂诱导小鼠产生的中和抗体滴度最高。结论本研究建立的HRSV中和抗体检测方法快速、可重复、高通量,能够适用于A、B亚型HRSV的中和抗体检测。

水痘带状疱疹病毒gE-Foldon融合蛋白的表达及免疫效果的分析

水痘带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是引起全球老年人带状疱疹(Herpes zoster,HZ)的主要病原体,VZV gE蛋白是诱导机体产生免疫应答的主要结构蛋白,基于gE蛋白设计的重组蛋白疫苗Shingrix已经在我国批准上市。多种研究表明聚体蛋白可以诱导更强的免疫应答,本研究应用中国仓鼠卵巢细胞CHO-S表达连接Foldon结构域的蛋白(gE-Foldon)、连接Fc片段的蛋白(gE-Fc)和gE蛋白。三种抗原(gE-Foldon、gE-Fc和gE)分别联合AlOH+CpG佐剂,比较在BALB/c小鼠中的免疫效果,同时,将商品化的Shingrix作为对照。SDS-PAGE和WB结果显示成功表达纯化三种抗原,非还原条件下可以观察到gE-Foldon以三聚体形式存在。与gE和gE-Fc抗原相比,gE-Foldon在小鼠中诱导产生的IgG抗体(40492)和中和抗体滴度(1190.5)最高(P<0.01),与Shingrix相当。此外gE-Foldon诱导小鼠产生的分泌IL-2、IL-4的淋巴细胞数量显著高于其他免疫组(P<0.0001,P<0.05)。综上所述,gE-Foldon蛋白联合AlOH+CpG佐剂可诱导较强的体液和细胞免疫应答,因此可以作为预防HZ的潜在候选疫苗。

人呼吸道合胞病毒检测方法的研究进展

各年龄段人群均可能感染HRSV,5岁以下儿童、老年人和免疫功能低下人群为主要高危人群。尽管年长的儿童和成年人感染后症状相对较轻,甚至无症状,但仍可能成为潜在的病毒传播者。因此,使用高效、精准、快速的检测方法及时发现传染源,迅速阻断传播,是遏制潜在疫情传播的重要手段。然而,HRSV感染的临床表现与其他呼吸道病毒引起的急性呼吸道感染难以区分,需要依据病原学检测结果进行鉴别。本文依据检测原理总结了4类HRSV常用检测方法:抗原检测、核酸检测、抗体检测和病毒分离,并对这四类方法的优缺点,原理和适用场景等进行分析与比较,对HRSV检测方法的研究进展进行了综述和展望。

融合表达新冠病毒S1与N蛋白的非复制型重组腺病毒的构建与鉴定

体外构建融合表达新型冠状病毒(SARS-CoV-2)S1抗原与N抗原的复制缺陷型重组腺病毒疫苗,为深入开展该疫苗免疫原性的研究提供基础。利用Overlap PCR和同源重组方法构建插入SARS-CoV-2的S1-N基因的重组腺病毒质粒pKAd5-S1-N,通过琼脂糖凝胶电泳、多酶切、测序等方法鉴定重组质粒正确性;重组质粒转染HEK293A细胞获得病毒毒种AdV5-S1-N并扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,有限稀释分析法测病毒滴度,Western blot方法验证AdV5-S1-N重组腺病毒S1-N融合蛋白表达情况;将AdV5-S1-N疫苗通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,第14d采集颌下静脉血,ELISA法检测血清针对S1和N蛋白抗原的特异性抗体滴度。成功获得滴度为9.45×10^(11)IU/mL的重组腺病毒AdV5-S1-N。Western blot结果发现:AdV5-S1-N感染细胞后,融合蛋白可正常表达,与抗S1蛋白及抗N蛋白抗体均有特异结合。ELISA结果显示免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对S1和N蛋白的特异性IgG抗体。应用复制缺陷型腺病毒载体成功获得融合表达SARS-CoV-2 Omicron突变株S1-N蛋白的高滴度重组腺病毒,该重组病毒能在小鼠诱导针对S1和N蛋白的特异性免疫应答,为后续深入研究和评价该候选疫苗奠定了基础。

2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染病例肠道病毒感染型别分析

目的了解2017—2021年河南省漯河市急性呼吸道感染(ARIs)病例中肠道病毒(EV)的感染状况,分析EV在ARIs中的流行情况及型别组成。方法于2017年10月至2021年5月,采集河南省漯河市中心医院1828例ARIs患者的咽拭子样本,并收集相关临床流行病学资料。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)筛选EV阳性样本,随后对阳性样本采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增5′非翻译区(5′UTR),使用Enterovirus Genotyping Tool在线定型工具初步定型后采用RT-PCR法进行VP1区全长扩增,再次比对确定EV分型。结果1828例ARIs病例中,男性占56.7%(1036例);年龄M(Q1,Q3)为3(1,5)岁;5岁以下人群占71.6%(1309例)。1828例ARIs病例中,通过qPCR检测鉴定EV阳性样本共有71例,检出率为3.88%(71/1828);男、女性EV检出率分别为3.28%(34/1036)和4.67%(37/792),差异无统计学意义(χ^(2)=2.32,P=0.14)。2~<6岁、6月龄~<2岁、6~<10岁和<6月龄的EV检出率依次为6.29%(48/763)、3.00%(18/600)、2.52%(4/159)和1.67%(1/60)(χ^(2)=27.91,P<0.001)。2017年秋、冬季EV检出率为0.92%(3/326);2018—2020年各年EV检出率依次为1.18%(6/508)、2.47%(12/485)和8.31%(34/409),呈逐年上升趋势(χ_(趋势)^(2)=29.76,P<0.001),主要流行季节为夏、秋季;2021年春季检出率为4.00%(4/100)。共鉴定出12种型别:CVA2、CVA4、CVA5、CVA6、CVA10、CVB3、CVB5、E5、E11、E30、PV-1和EV-D68,其中CVA2、CVA10、CVA6和CVB3为优势型别。59例EV分型样本中,临床表现以上呼吸道感染为主(36/59,61.01%)。上呼吸道感染检出的优势型别为CVA10(10/36,27.78%)、CVA6(9/36,25.00%)和CVB3(8/36,22.22%);下呼吸道感染中检出的优势型别为CVA2(7/19,36.84%)。结论2017—2021年河南省漯河市ARIs病例中EV感染具有明确的季节性和年龄特征,上、下呼吸道感染所检出的优势型别有所不同。

河南省漯河市急性呼吸道感染病例人博卡病毒检出情况及病毒基因特征分析

目的分析河南省漯河市急性呼吸道感染(ARI)病例中人博卡病毒(HBoV)的检出情况及病毒基因特征。方法使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)对2018年6月至2020年12月收集的1185例ARI病例咽拭子标本进行呼吸道多病毒检测。对HBoV核酸阳性的标本进行VP1基因巢式PCR扩增和序列测定,同时结合GenBank下载的中国地区HBoV1 VP1基因序列,进行病毒基因特征分析。结果在1185例ARI病例标本中,共有32例(2.70%)为HBoV阳性,其中17例(53.13%)同时检出≥2种病毒。96.88%(31/32)HBoV阳性病例为5岁以下的儿童,其中以12~23月龄患儿的检出率最高(5.52%),其次是6~11月龄(3.39%)。HBoV阳性病例主要集中在夏、秋、冬3个季节,但三者间差异无统计学意义(P>0.05)。HBoV的单一感染和混合感染均可引起上呼吸道或下呼吸道感染,但差异无统计学意义(P0.05)。本研究所获得的21条HBoV序列均属于HBoV1。Ib分支是2018-2020年河南省漯河市HBoV1主要优势流行株,与我国其他地区一致。VP1基因平均分子进化速率约为2.59×10^(-4)替换/位点每年,在影响病毒抗原的主要区域中存在着多个氨基酸变异。结论HBoV是河南省漯河市ARI病例中检出的重要病毒之一。5岁以下儿童,尤其是2岁以下的婴幼儿是HBoV感染的主要人群。包括河南漯河株在内我国流行HBoV1VP1基因序列相对保守,但有个别抗原相关位点发生了变异。