临床检验基于患者数据室内质量控制方法的研究与进展

室内质量控制是实验室工作的重要组成部分,传统的室内质量控制通过测定质控品来完成。另一种室内质量控制方法是利用实验室的患者数据,来对实验室误差进行监测,与利用质控品进行质控相比,基于患者数据的质量控制方法具有成本低、无基质效应、无互换性问题、可连续对分析性能进行监测等优点。早在20世纪60年代,基于患者数据的质控方法就已经被提出,但是由于当时计算机技术的限制,这些方法并未得到很好的应用,仅有少数相关的研究对其性能进行评估。21世纪随着信息技术的发展,这些质量控制方法的实现变得比以前容易许多,因此它们也越来越受到实验室人员的关注。该文介绍了一些目前比较常见的基于患者数据的室内质量控制方法,包括差值检查法、正态均值法、Bull算法、指数加权移动均值法、移动中位数法、离群值移动和与移动标准差法等,这些方法可以作为常规室内质控的补充,提高实验室的整体分析质量。

临床检验与健康促进

健康是人类最普遍最根本的需求,人民健康是民族昌盛和国家富强的重要标志。“活得好点、活得长点”是人的一直的愿望,也是我国目前的国家战略。随着经济社会的快速发展,我国传染病、意外伤害等健康威胁已大幅减小,慢性非传染性疾病(如心血管病、癌症、糖尿病及呼吸、神经、泌尿、骨骼等系统的慢性疾病)成为人口死亡或失能的主要原因。预防控制慢性疾病是卫生健康工作的重要任务,鉴别监测危险因素是慢性疾病预防控制的关键环节,临床检验是危险因素鉴别监测的主要手段。

液相色谱串联质谱测定血清24,25双羟基维生素D方法的建立

目的建立液相色谱串联质谱法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)同时测定血清24,25双羟基维生素D_2[24,25-dihydroxyvitamin D_2,24,25(OH)_2D_2]和24,25双羟维生素D_3[24,25-dihydroxyvitamin D_3,24,25(OH)_2D_3]的方法。方法首先采用乙腈和硫酸锌溶液沉淀血清蛋白,之后加入正己烷/乙酸乙酯震荡提取24,25(OH)_2D、离心后吸取上清液、氮气挥干,再用流动相重组。以稳定同位素标记的24,25(OH)_2D_3-d6作内标。质谱采用正离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式,24,25(OH)_2D_2和24,25(OH)_2D_3定量离子通道选择质荷比分别为429. 3→271. 3和417. 3→381. 3;内标24,25(OH)_2D_3-d6离子通道m/z为423. 3→387. 3。以标准品峰面积与同位素内标峰面积比制作标准曲线,建立LC-MS/MS快速测定24,25(OH)_2D_2和24,25(OH)_2D_3的方法。根据EP15-A2文件评价方法的精密度,并初步测定40例北京协和医院表观健康体检者[年龄(35±5)岁,男性18例,女性22例]血清24,25(OH)3D的含量及其与25OHD的比值。结果本实验条件下可同时快速检测血清24,25(OH)_2D_2和24,25(OH)_2D_3,分析时间仅为7. 5 min,特异性高,不受3-epi 24,25(OH)_2D_3以及1,25(OH)_2D的干扰。24,25(OH)_2D_2和24,25(OH)_2D_3与内标峰面积比与对应的浓度线性相关系数均>0. 999,24,25(OH)_2D_3重复性和实验室内不精密度分别为2. 46%～4. 81%和4. 33%～7. 21%,24,25(OH)_2D_2重复性和实验室内不精密度分别为4. 90%～6. 87%和5. 82%～9. 90%。24,25(OH)_2D_3和24,25(OH)_2D_2的加样回收率分别为91. 20%～96. 60%和92. 8%～105. 00%。24,25(OH)_2D_3和24,25(OH)_2D_2的定量限分别为0. 25和0. 5μg/L,检测限分别为0. 125和0. 25μg/L。初步分析北京协和医院40例体检人群血清,24,25(OH)_2D的平均值为(0. 81±0. 43)μg/L,25OHD/24,25(OH)_2D比值范围为8. 7～37. 2,平均值为18. 9±6. 7,性别间差异无统计学意义(P>0. 05)。结论本研究成功建立了LC-MS/MS快捷、准确测定血清24,25(OH)_2D的方法。

角蛋白18与剪切因子PSF相互作用介导PSF的膜易位并维持髓系白血病细胞的化疗敏感性

目的:鉴定多嘧啶结合蛋白相关的剪切因子(polypyrimidine tract-binding protein-associated splicing factor,PSF)在髓系白血病细胞内的伴侣蛋白,探讨PSF在敏感HL60细胞和耐药的HL60/DOX细胞中易位细胞膜的模式和机制。方法:通过脂质体瞬时转染PSF真核表达载体过表达PSF,进一步结合流式细胞术在转染后24 h、48 h、72 h检测PSF在细胞膜上的表达水平。构建链亲和素结合肽(streptavidin binding peptide,SBP)和PSF的融合表达载体,转染载体,过表达SBP-PSF融合蛋白。通过链亲和素磁珠共沉淀法和质谱分析,鉴定PSF在细胞内的伴侣蛋白。在慢病毒载体中插入角蛋白18(cytokeratin 18,K18)干扰序列,转染293T细胞制备病毒液。用慢病毒感染HL60和HL60/DOX细胞,获得稳定干扰K18的细胞株。结合流式细胞术检测干扰K18的HL60和HL60/DOX细胞中细胞膜上PSF的表达水平,由此证实CK18在HL60和HL60/DOX细胞中协同转运PSF易位细胞膜机制的异同。结果:瞬时过表达PSF后的24 h、48 h、72 h连续3 d检测细胞膜PSF表达水平,HL60敏感株细胞膜上PSF表达率分别为22.4%±3.5%、37.9%±6.0%、58.3%±8.8%;耐药株HL60/DOX细胞膜上PSF的表达率分别为4.7%±0.5%、3.9%±0.6%、2.9%±0.6%;各时间点下敏感株和耐药株的差异有统计学意义,P<0.01。免疫共沉淀和质谱证实K18为PSF在细胞内的伴侣蛋白。干扰K18的表达后,再次分析细胞膜PSF表达,发现PSF在敏感株细胞膜上的表达水平由原来的48.9%±5.4%降至6.2%±1.0%;在耐药株细胞膜上的表达水平由9.11%±1.2%降至2.21%±0.51%。结论:K18是PSF在细胞内的伴侣蛋白,在敏感细胞中,K18与PSF相互作用可帮助PSF向细胞膜转运;而在耐药株中,由于该功能障碍导致PSF在胞内发生积累从而介导耐药性。

无偿献血者中HIV阳性者的病毒载量分析

目的分析无偿献血者艾滋病病毒(HIV)阳性标本的病毒载量水平及无偿献血人群HIV的携带状态,为评估无偿献血人群HIV感染风险提供依据。方法收集2016—2018年国内25家血站HIV筛查反应性(R)的血浆标本683(人)份,根据HIV反应性类型分为ELISA双试剂反应性组(ELISA R-R)、核酸检测(NAT)反应性组(NAT R),ELISA单试剂反应性组(ELISA R-NR),使用电化学发光试剂法做HIV抗原抗体检测,使用核酸定量试剂做HIV RNA定量检测,核酸定量检测低于检测下限(80 IU/mL)的标本以WB法确认。结果本组无偿献血者筛查R标本中,1)HIV确认阳性率为27.1%(185/683),确认阳性样本ELISA R-R标本占89.2%(165/185),ELISA NR-NR+NAT-R占8.1%(15/185),ELISA R-NR占2.7%(5/185),3(种)组病毒载量(IU/mL)分别集中在10^(4.605±0.047)、10^(3.472±0.328)和10^(5.196±0.655)(P<0.05);HIV窗口期标本病毒载量(IU/mL)>10~5者占20.0%(4/20),其中2例来自ELISA R-NR组,2例来自NAT R组;30.0%(6/20)为10~4者,其中2例来自ELISA R-NR组,2例来自NAT R组;其余50.0%(10/20)为10~1—10~3者,其中1例来自ELISA R-NR组,剩余9例来自NAT R组。2)在HIV确认阳性者中发现3名疑似HIV精英控制者(ECs)。结论我国无偿献血者中HIV ELISA R-R感染者病毒载量较抗原抗体窗口期感染者高;HIV窗口期感染者中多为低载量病毒感染者。疑似HIV ECs的发现揭示我国无偿献血人群HIV感染状态日益复杂多样化,需要加强对血液筛查实验室检测质量的管理,探究更合理的HIV筛查策略。

京津冀血站实验室核酸混样检测模式无效结果分析

目的了解京津冀各地血站实验室所采用的核酸混样检测模式及其在各实验室血液核酸检测过程的差别和影响因素。方法根据京津冀血站实验室比对工作组对3地15个血站实验室调查整理的《2018年京津冀血液筛查实验室质量指标数据汇总分析》及《京津冀血站实验室2018年1—12月质量指标数据》,提取其中有关核酸混样检测模式的数据,统计分析不同核酸混样模式检测的无效结果,包括无效批次率、无效pool率。采用SPSS.20.0软件对数据做统计学分析。结果2018年京津冀3地血站实验室采用核酸混样检测模式的比例为93.33%(14/15),14家采用混样模式检测的核酸实验室的无效批次率0.25%(1/403)—1.94%(23/1185),无效pool率0.03%(2/5857)—0.67%(32/4750)(P<0.05)。14家实验室共应用6种(不同厂家)(R1—R6)试剂或试剂组合R2/R3/R4/R5/R2+R3/R4+R5,NAT混检无效批次率0.25(1/403)—1.92%(29/1508),无效pool率0.08%(36/43238)—0.5%(45/8938)(P<0.05)。2家选择同一试剂的不同实验室R2无效批次率1.86%(6/323)—1.94%(23/1185)(P>0.05),无效pool率0.21%(40/19530)—0.67%(32/4750)(P<0.05),5家选择同一试剂的不同实验室R3无效批次率0.27%(1/376)—0.89%(3/337)(P<0.05),无效pool率0.11%(5/4503)—0.35%(23/6522)(P>0.05);4家选择同一试剂的不同实验室R4无效批次率0.28%(1/352)—1.92%(6/312),无效pool率0.03%(2/5857)—0.19%(20/10816)(P<0.05)。结论京津冀各血站实验室核酸检测的无效结果与不同试剂的性能、混样检测模式,人员,样本等有一定的相关性。应持续监控检测结果的无效率,总结分析产生无效结果的原因,减少无效结果的产生,提高检测质量。

棕榈酰化蛋白质组学分析揭示前列腺癌细胞中雄激素促进代谢相关蛋白棕榈酰化修饰

目的:筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白,探索前列腺癌去雄激素治疗外其他潜在的治疗靶点。方法:以LNCaP细胞为研究对象,雄激素(Methyltrienolone,R1881,5 nmol/L)或DMSO(dimethyl sulfoxide)处理LNCaP细胞24 h,同时利用人工合成的炔基棕榈酸Alk-C16(100μmol/L)对细胞进行代谢标记,收集细胞,裂解,提取总蛋白,加入标记有叠氮化物的琼脂糖珠(1 mmol/L),室温反应1 h,利用叠氮化物与Alk-C16末端炔基发生点击化学反应形成的共价键将棕榈酰化修饰蛋白富集在琼脂糖珠上,进行蛋白质谱非标记定量分析(label-free quantitation,LFQ),比较R1881处理和非处理细胞蛋白棕榈酰化修饰变化情况,筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白。结果:实验共鉴定出907个潜在的棕榈酰化修饰蛋白(mascot score>2,P<0.05),其中有430个蛋白LFQ值至少有2次不为0。在这430个蛋白中有92个蛋白R1881处理与非处理样品LFQ比值大于1.5(P<0.05),说明雄激素能够显著促进该蛋白棕榈酰化修饰。利用Cytoscape软件对92个蛋白进行功能富集分类,发现已知功能蛋白可分为代谢相关、蛋白折叠相关和翻译起始相关3类,其中,代谢相关蛋白包括脂代谢(6个)、糖代谢(7个)和呼吸电子传递链(8个)3部分,另外还有少量氨基酸代谢(2个)和其他代谢相关蛋白(2个)。参与呼吸电子传递链的细胞色素b-c1复合体亚基2(cytochrome b-cl complex subunit2,UQCRC2)雄激素R1881处理和未处理样品LFQ比值最高(>3,P<0.05),说明该蛋白棕榈酰化修饰受雄激素诱导最为明显。LFQ比值最高为UQCRC2,其次为脂代谢相关的长链特异性酰基辅酶A脱氢酶(very long-chain specific acyl-CoA dehydrogenase,ACADVL)和糖代谢相关的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,PGD),但其LFQ比值均未超过3。结论:代谢尤其是呼吸电子传递链相关蛋白的棕榈酰化调控机制的研究可能将为前列腺癌的诊疗和靶向药的研发提供新的指导思路。

《新生儿遗传代谢病筛查质量指标共识》应用评价与优化建议

新生儿遗传代谢病筛查(简称新筛)实验室检测工作的质量管理水平至关重要。为实现同质化管理,提升疾病筛查质量,新筛实验室室间质量评价(简称质评)专家委员会参照国家卫生健康委员会(简称卫健委)临床检验中心(National Center of Clinical Laboratories,NCCL)质量管理的要求,于2014年着手制订,并在2017年发布了包含16项筛查质量指标(quality indicators,QIs)的专家共识(即《新生儿遗传代谢病筛查质量指标共识》),要求在全国范围内从事新筛工作的实验室定期向NCCL新筛实验室室间质评系统登记与上报新筛质量数据,相关工作开展已逾8年。现新筛实验室室间质评专家委员会特组织相关专家分析、评价16项QIs的应用情况,并提出优化建议,以提升全国范围内各新筛实验室质量管理水平,并为后续相关共识的制订与更新奠定基础。

先天性巨细胞病毒感染筛查与临床干预指南

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是最常见的先天性感染病原体之一,呈全球性分布,在全球活产婴儿中HCMV先天性感染率约为0.7%,是新生儿罹患先天性感音神经性耳聋、视力障碍、智力发育迟缓和病毒性肝炎、病毒件肺炎等疾病的常见原因,严重者可导致流产、死胎、早产和新生儿死亡[1-3]。近年来,先天性HCMV感染的流行病学、妊娠期管理、产前诊断以及新生儿治疗方面取得了显著进步,国内外相继发表了HCMV感染诊治的专家共识[3-7]。本指南以系统分析的循证医学证据为依据,就HCMV感染筛查、诊断、干预与治疗中的常见问题提出建议,供国内同行参考,证据分级采用加拿大专家组关于预防性医疗保健的分级标准。

化学发光法微阵列蛋白芯片临床应用专家共识

微阵列蛋白芯片是研究蛋白质与蛋白质相互作用和识别疾病相关自身抗原的平台,也可以高通量的形式检测抗原与抗体之间免疫结合反应。该方法是一种微型化的固相免疫检测方法,在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病及变态反应性疾病的筛查、辅助诊断和治疗监测中逐渐得到临床认可。该共识对以平面基质为载体,采用化学发光法检测的蛋白芯片的临床应用进行规范化和标准化。

我国早孕期血清学产前筛查室内质控现状:基于六西格玛管理体系的分析

目的评估我国早孕期血清学筛查质量控制(简称质控)水平。方法收集参与国家卫生健康委员会临床检验中心2022年早孕期血清学筛查室间质评计划的576家实验室上报的数据。血清学筛查指标包括游离人绒毛膜促性腺激素β亚基(human chorionic gonadotropinβsubunit,β-hCG)、总β-hCG和妊娠相关血浆蛋白A(pregnancy-associated plasma protein A,PAPP-A)。分析这些指标的变异系数、偏倚、质控规则和检验方法等信息。使用六西格玛管理体系评估实验室质量水平和质控规则合理性。使用Wilcoxon检验评估月份和检验方法对西格玛水平的影响。结果(1)共119家实验室检测总β-hCG,457家实验室检测游离β-hCG,565家实验室检测PAPP-A。仅检测1个指标的实验室有17家,检测2个指标的实验室有553家,检测3个指标的实验室有6家。(2)5月和9月同一指标的西格玛水平差异无统计学意义。游离β-hCG达到6σ的比例最高[71.9%(567/788)];总β-hCG虽然达到6σ比例最低[53.4%(103/193)],但小于3σ的比例也最低[3.1%(6/193)]。(3)早孕期血清学产前筛查主要涉及5种试剂,主要使用化学发光法和时间分辨荧光法(游离β-hCG只使用化学发光法)。使用时间分辨荧光法实验室总体西格玛水平高于使用化学发光法的实验室[总β-hCG和PAPP-A分别为9.56(7.01~13.22)与5.84(4.36~9.12),以及9.04(6.40~12.62)与5.71(4.22~8.15),W值分别为53114.00和75752.00,P值均<0.001]。质控规则符合Westgard西格玛规则所占比例为16.1%(31/193)~19.6%(166/846)。其中,质控规则过松的实验室所占比例为24.8%(210/846)~32.1%(62/193),质控规则过严者所占比例为51.8%(100/193)~55.6%(470/846)。结论我国产前筛查实验室的质控水平总体表现良好,但在质控规则设置上仍需改进。

1株甲周脓肿患者分离的雷金斯堡预研菌的鉴定及生物学特征分析

目的对1株甲周脓肿患者分离的少见病原体雷金斯堡预研菌进行菌种鉴定和生物学特性分析。方法菌株CXLZQ123于2023年6月2日分离自单县中心医院皮肤科门诊就诊的甲周脓肿患者,经过初步形态学鉴定、生化鉴定,后经质谱鉴定,16S rRNA测序和全基因组测序;应用MEGA 11.0对其与GenBank中相近种属进行种群间比对,并基于遗传距离构建系统发育树分析其遗传学进化情况。同时比较与类似菌株基因组平均核苷酸一致性。结果该菌株为革兰阴性杆菌,MicroScan WalkAway生化鉴定该菌为雷金斯堡预研菌(91.47%)或蜂房哈夫尼菌(8.53%)。梅里埃质谱鉴定为雷金斯堡预研菌。经16S rRNA基因序列分析该菌株与CIP 105435(序列号NR104934.1)相似性最高(相似度99.37%)。将该分离菌株雷金斯堡预研菌16S rRNA基因序列上传至美国国家生物技术信息中心(NCBI,GenBank序列号:OR230248.1)。基因组测序上传序列(NCBI,SRA序列号:SRR26510420)。该菌株与雷金斯堡预研菌W13和UU2206353平均核苷酸一致性分别为98.82%和99.04%。结论该致病菌通过形态学观察、生化鉴定、质谱鉴定、16S rRNA和全基因组测序鉴定为雷金斯堡预研菌。该菌比较少见,对大多数药物敏感。本研究可为雷金斯堡预研菌相关感染提供诊治经验。

染色体微阵列分析实验室技术要求专家共识

染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis,CMA),是以微阵列为技术基础的基因组拷贝数变异(copy number variations,CNVs)分析技术,主要包括基于比较基因组杂交的微阵列(array-based comparative genomic hybridization,aCGH)和基于单核苷酸多态性的微阵列(single nucleotide polymorphism array,SNP array)。CMA是一种高分辨率的全基因组染色体变异检测技术,近年来其在临床的应用逐步深入和广泛,国内外已出台相关指南与专家共识以推动其在临床的规范应用。为进一步规范染色体微阵列分析技术的临床应用,保证医疗质量与医疗安全,国家卫生健康委员会临床检验中心产前筛查与诊断室间质量评价专家委员会组织专家进行了充分讨论,拟在CMA实验室技术等方面作出规范和建议,以规范CMA技术在遗传病诊断领域中的应用。随着技术的更新与成熟,本共识将持续更新以满足临床需求。

产前荧光原位杂交技术专家共识

无创产前检测虽已广泛普及,但存在一定的局限性,而作为产前诊断"金标准"的染色体G显带核型分析耗时且费力。荧光原位杂交作为一种借助非放射性荧光信号对样本进行检测的技术,无需细胞培养,分析周期短,能够快速诊断13、18、21、X、Y等染色体的非整倍性异常,有助于解决以核型分析为主的产前诊断服务能力不足、诊断周期长等问题。为规范国内实验室产前荧光原位杂交各技术环节,加强实验室质量管理,卫健委临床检验中心产前筛查与诊断实验室室间质评专家委员会和新生儿遗传代谢病筛查实验室室间质评委员会特组织专家制订了本共识。

新生儿遗传代谢病筛查指标切值建立方法专家共识

目前新生儿遗传代谢病筛查主要是通过检测新生儿出生后数天内干血滤纸片中代谢物水平判断新生儿是否患有某种遗传代谢病。这些代谢物指标(包括代谢物之间的比值)是否异常是以对应的切值(cutoff)为标准。切值是指某代谢物在健康人群中的上限及下限值。低于或高于切值判断为阳性。故遗传代谢病筛查指标切值建立尤其重要,切值设置偏高,易导致假阴性,设置偏低,易导致过多假阳性[1-2]。

新生儿遗传代谢病筛查随访专家共识

随访是新生儿遗传代谢病筛查中非常重要的一环,直接影响患儿的检出、确诊和疗效,影响新生儿疾病筛查的工作质量。鉴于我国各地新生儿遗传代谢病筛查有关机构和人员存在着随访不足、认识不尽相同,要求不一致,迫切需要规范有关事宜,国家卫健委临床检验中心新生儿遗传代谢病筛查室间质量评价专家委员会组织专家经过多次讨论,制定出新生儿遗传代谢病筛查随访专家共识,指导随访工作开展,提高随访工作质量。

早产儿低体重儿及患病儿遗传代谢病筛查共识

新生儿疾病筛查(newborn screening,NBS)是在新生儿早期(生后数天)对遗传代谢缺陷、先天性内分泌异常及某些严重危害身体健康的疾病进行筛查的总称。其目的是在新生儿期筛查并明确诊断以上疾病,使这些患儿能够得到及时治疗,防止或减轻其体格和智力发育障碍,降低死亡率。早产儿(胎龄<37周)、低体重儿(出生时体重<2500 g)和出生后即患病新生儿,由于其自身、出生前后环境及护理治疗的复杂性。

产前筛查质量评价指标专家共识

产前筛查技术包括血清学产前筛查和孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查.产前筛查流程复杂,参与的机构和人员较多,迫切需要规范流程,评价流程中各个环节的工作质量,对不同地区进行同质化管理.鉴于此,国家卫生和健康委员会临床检验中心全国产前筛查与诊断实验室室间质量评价专家组参照国家卫健委临检中心室间质量评价的管理要求与同类专家共识,历时半年,前后经过6轮讨论和修订,制定了18个产筛质量指标,用以督促各筛查实验室加强质量管理,以提供同质化的产筛服务.