北京某医院体检人群亚健康状况及其影响因素相关性研究

目的了解北京某医院体检人群亚健康状况及其影响因素。方法以在北京医院体检人群为对象开展问卷调查,内容包括基线调查问卷和亚健康评定量表(Sub-Health Measurement Scale,SHMS V1.0)。结果本研究最终纳入91例,总体亚健康发生率为69.23%,青年组和中年组心理亚健康发生率均明显高于老年组。青年组总体亚健康发生率明显高于老年组,差异有统计学意义(P<0.05)。对总体亚健康影响因素分析可知,各种相关因素中,记忆力减退、与亲属亲密程度较低、非外向性格、镍和铅的含量高均与亚健康发生具有相关性,健康组与亚健康组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究人群总体亚健康检出率偏高,应重视青、中年人群的心理亚健康问题,针对亚健康发生相关的因素进行干预,有助于提高居民健康水平。

京津地区养老机构《老年人营养不良风险评估》应用效果评价研究

背景营养筛查与评估是开展规范化营养支持的基础,WS/T 552-2017《老年人营养不良风险评估》发布前后,尚缺乏关于此标准中评估工具信效度研究的有关报告。目的评价《老年人营养不良风险评估》在京津地区有代表性的养老机构应用的信效度。方法2019年5—6月,采用方便抽样对北京、天津7家养老机构中入住的444名老年人进行问卷调查。采用临界比、条目-总分相关系数、探索性因子分析、Cronbach'sα系数和折半信度系数评价《老年人营养不良风险评估》的信效度。结果共发放问卷474份,回收有效问卷444份,有效回收率为93.7%。《老年人营养不良风险评估》各条目临界比为-1.992~13.272,条目-总分相关系数为-0.051~0.566;探索性因子分析共提取8个公因子,累积解释变异量为62.069%,4个条目因子载荷<0.40而未达标准;《老年人营养不良风险评估》的Cronbach'sα系数为0.323,折半信度为0.531,8个公因子的Cronbach'sα系数为-0.542~0.649,折半信度为-0.424~0.637。结论《老年人营养不良风险评估》在养老机构中应用时部分条目的鉴别度和同质性不高,结构效度和内部一致性不是非常理想,在进行养老机构老年人营养状况筛查与评价时,需要对条目进一步斟酌,才能更有效地评价养老机构老年人的营养状况。

MTH1蛋白与结肠癌进展和预后的相关性研究

目的探讨MutT同源蛋白1(MutT homolog protein 1,MTH1)的表达对结肠癌(colorectal cancer,CRC)进展和预后的影响。方法笔者首先使用免疫组织化学方法检测了87例结肠癌组织和配对的癌旁正常组织中MTH1蛋白的表达,应用χ^2检验分析MTH1蛋白表达量与结肠癌临床病理特征之间的相关性,应用COX比例回归风险模型分析MTH1蛋白表达对结肠癌根治术后患者的总体生存预后判断价值。笔者使用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测了6株结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620、LoVo、COLO320、T84及人胚胎肠黏膜细胞CCC-HIE-2中MTH1基因mRNA和蛋白的表达水平,应用独立t检验比较了肿瘤细胞和正常肠黏膜上皮细胞中MTH1基因mRNA和蛋白相对表达量的均值,并且应用Spearman等级相关系数检测MTH1基因mRNA和蛋白表达的相关性。笔者使用本实验室构建成功的siRNA干扰MTH1基因mRNA表达的HCT116和LoVo细胞株,利用CCK-8和Transwell实验检测MTH1蛋白低表达对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果在87例结肠癌组织中,MTH1蛋白高表达患者手术治疗后总的生存率显著低于MTH1低表达患者(P=0.005)。COX多因素分析表明MTH1蛋白高表达是结肠癌预后不良的独立预测因素(HR=2.256,95%CI:1.008~5.049,P=0.048)。结肠癌细胞株中MTH1基因mRNA和蛋白表达量显著高于正常的肠黏膜细胞,而且mRNA与蛋白的表达呈正相关。siMTH1干扰MTH1基因mRNA表达量的下降与HCT116和LoVo细胞增殖、迁移、侵袭能力的下降显著相关(P<0.05)。结论MTH1蛋白表达影响了结肠癌的进展和预后。

脑衰老及其干预新策略

随着年龄的增长,脑器官逐渐展示出衰老的一些细胞和分子特征,导致脑功能逐渐下降,神经退行性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病发生的易感性升高。目前研究表明,应用一些干预新策略可以延缓脑衰老。该文主要了解和探究脑衰老有哪些细胞和分子特征,衰老如何诱发神经退行性疾病,以及延缓脑衰老的新策略。

荧光PCR探针熔解曲线技术检测MTB耐药性的成本分析

目的通过将荧光PCR探针熔解曲线技术(简称"熔解曲线技术")与BACTEC MGIT 960技术(简称"MGIT 960")对MTB耐药性检测的成本进行比较,评估熔解曲线技术在中国不同地区、不同层级结核病防治机构检测MTB耐药性的可行性。方法选择西安市胸科医院、新疆维吾尔自治区胸科医院、沈阳市胸科医院、南阳市第六人民医院、遵义医学院附属医院和杭州市红十字会医院6家结核病定点医院,按照高、中、低3种工作量收集3次MGIT 960和熔解曲线技术的成本数据,采用"要素法(包括管理费、建筑费、设备费、人员费、试剂费、耗材费)"计算每种方法的单位检测成本,计算不同检测方法检出每例患者的检测成本。结果使用MGIT 960、熔解曲线技术平均每例患者的检测成本分别为702.6(4215.8/6)和440.7(2644.3/6)元。当熔解曲线技术检测敏感度超过70%,在结核病人群MDR-TB患病率≤50%的情况下,使用熔解曲线技术进行耐药MTB检测的每例患者检测成本(熔解曲线技术检测敏感度为70.0%时,结核病患者MDR-TB的患病率在1.0%、5.0%、10.0%、15.0%、20.0%、30.0%、50.0%时,熔解曲线技术检出1例MDR-TB患者的平均成本分别为62957.1、12591.4、6295.7、4197.1、3147.9、2098.6、1259.1元;熔解曲线技术检测敏感度为80.0%时,上述患病率情况下平均成本分别为55087.5、11017.5、5508.8、3672.5、2754.3、1836.3、1101.8元)均低于MGIT 960(平均成本分别为70260.0、14052.0、7026.0、4684.0、3513.0、2342.0、1405.2元)。结论与MGIT 960相比,熔解曲线技术更具成本-效益,具备在中国不同地区、不同层级结核病防治机构检测MTB耐药性的价值。

巨噬细胞极化对动脉粥样硬化发生发展的影响

动脉粥样硬化的发生和发展主要由局部血管壁炎症和脂质积累引发。巨噬细胞在病灶演变中发挥着核心作用。在动脉粥样硬化病变中,巨噬细胞受到各种各样的微环境信号调节,如细胞因子、氧化脂质、亚铁血红素等,从而导致其表型极化。目前已证实巨噬细胞表型谱主要由T辅助细胞1(Th-1)细胞因子诱导的M1型和由Th-2细胞因子诱导的M2型为主,其中M2型又细分为M2a、M2b、M2c、M2d,此外尚有Mox型、M4型、M(Hb)和Mhem型。对巨噬细胞表型可塑性机制的研究成为制定抑制或稳定动脉粥样硬化斑块治疗策略的重要内容。近年来,社会心理因素在动脉粥样硬化发生发展中的作用已成为研究的热点。慢性心理应激时交感肾上腺髓质(SAM)系统和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的持续激活导致儿茶酚胺类激素和糖皮质激素分泌显著增加,它们对巨噬细胞表型可塑性的调节和功能后果产生重要影响。该文对动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞亚群的特征,及在多种组织中神经内分泌激素如儿茶酚胺类激素和糖皮质激素对巨噬细胞表型可塑性的影响进行综述。

棕榈酰化蛋白质组学分析揭示前列腺癌细胞中雄激素促进代谢相关蛋白棕榈酰化修饰

目的:筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白,探索前列腺癌去雄激素治疗外其他潜在的治疗靶点。方法:以LNCaP细胞为研究对象,雄激素(Methyltrienolone,R1881,5 nmol/L)或DMSO(dimethyl sulfoxide)处理LNCaP细胞24 h,同时利用人工合成的炔基棕榈酸Alk-C16(100μmol/L)对细胞进行代谢标记,收集细胞,裂解,提取总蛋白,加入标记有叠氮化物的琼脂糖珠(1 mmol/L),室温反应1 h,利用叠氮化物与Alk-C16末端炔基发生点击化学反应形成的共价键将棕榈酰化修饰蛋白富集在琼脂糖珠上,进行蛋白质谱非标记定量分析(label-free quantitation,LFQ),比较R1881处理和非处理细胞蛋白棕榈酰化修饰变化情况,筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白。结果:实验共鉴定出907个潜在的棕榈酰化修饰蛋白(mascot score>2,P<0.05),其中有430个蛋白LFQ值至少有2次不为0。在这430个蛋白中有92个蛋白R1881处理与非处理样品LFQ比值大于1.5(P<0.05),说明雄激素能够显著促进该蛋白棕榈酰化修饰。利用Cytoscape软件对92个蛋白进行功能富集分类,发现已知功能蛋白可分为代谢相关、蛋白折叠相关和翻译起始相关3类,其中,代谢相关蛋白包括脂代谢(6个)、糖代谢(7个)和呼吸电子传递链(8个)3部分,另外还有少量氨基酸代谢(2个)和其他代谢相关蛋白(2个)。参与呼吸电子传递链的细胞色素b-c1复合体亚基2(cytochrome b-cl complex subunit2,UQCRC2)雄激素R1881处理和未处理样品LFQ比值最高(>3,P<0.05),说明该蛋白棕榈酰化修饰受雄激素诱导最为明显。LFQ比值最高为UQCRC2,其次为脂代谢相关的长链特异性酰基辅酶A脱氢酶(very long-chain specific acyl-CoA dehydrogenase,ACADVL)和糖代谢相关的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,PGD),但其LFQ比值均未超过3。结论:代谢尤其是呼吸电子传递链相关蛋白的棕榈酰化调控机制的研究可能将为前列腺癌的诊疗和靶向药的研发提供新的指导思路。

评价一种新CYP2C9突变型对药物代谢的影响

目的在体外表达细胞色素P2C9(32T> C),构建酶促反应体系,检测其对甲苯磺丁脲(tolbutamide)的代谢活性.方法利用定向诱变技术,以细胞色素P2C9野生型的互补DNA为反义链,获得细胞色素P2C9*3以及细胞色素P2C9(32T>C)的complementary DNA,利用杆状病毒穿梭载体bacmid抽提试剂盒获得bacmid,转染伪黏虫卵巢细胞,充分表达后提取微粒体蛋白质,并用免疫印迹法检测其表达量.在体外条件下,测定各型细胞色素P2C9催化甲苯磺丁脲代谢的最大反应速率Vm和米氏常数Km,评价新突变体的催化功能.结果利用昆虫表达系统表达获得细胞色素P2C9 * 1、细胞色素P2C9*3和细胞色素P2C9(32T> C)3种微粒体蛋白质.免疫印迹结果显示,新变异型蛋白表达水平接近于野生型.体外代谢实验结果显示,细胞色素P2C9(32T> C)针对甲苯磺丁脲的体外清除率(Vm/Km)明显低于野生型,体外酶学活性为野生型的12.40%.结论在体外条件下,细胞色素P2C9(32T> C)对甲苯磺丁脲的代谢活性明显下降,提示携带有该基因型的患者服用细胞色素P2 C9的底物药时,体内代谢速率可能会有不同程度的降低,用药前需考虑调整剂量.

KIF5B过表达和干扰慢病毒载体的构建及对结直肠癌细胞增殖的影响

目的构建马达蛋白KIF5B基因重组慢病毒过表达和RNA干扰载体并进一步构建稳定转染结直肠癌细胞模型,检测敲低KIF5B蛋白对结直肠癌细胞增殖的影响。方法将PCR扩增的人KIF5B基因序列和设计合成的shRNA序列分别插入GV-358和GV-248表达载体。采用慢病毒三质粒包装系统共转染HEK293T细胞,进行病毒包装和扩增。重组慢病毒感染结直肠癌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot法检测KIF5B过表达和沉默效率。CCK-8检测KIF5B干扰后HCT116和SW480细胞的增殖,并检测细胞内周期相关蛋白的表达。结果KIF5B过表达及shRNA载体测序与原设计序列完全符合。重组病毒感染结直肠癌细胞中,可见绿色荧光蛋白表达。KIF5B过表达组细胞中KIF5B-FLAG蛋白大量表达,KIF5B沉默细胞中,KIF5B的蛋白表达量显著下降。KIF5B被敲低后,HCT116和SW480细胞增殖加快,细胞内p21、p16两种蛋白表达下调。结论成功建立了KIF5B过表达和沉默的结直肠癌细胞模型,并且发现KIF5B表达被干扰后,可能会抑制p21与p16蛋白的表达,加速细胞周期,从而促进结直肠癌细胞增殖。

老年新型冠状病毒肺炎诊治与防控专家共识

新型冠状病毒肺炎在老年人中病死率高、危害性大。由于增龄导致的生理功能下降及基础疾病导致的病理状态,老年新型冠状病毒肺炎的临床表现、辅助检查等具有不典型性,治疗手段和防控措施须考虑该人群的特殊性。为进一步做好老年新型冠状病毒肺炎诊治和防控工作,中国老年学和老年医学学会老年病学分会呼吸和危重病专家委员会编写了本共识,针对老年新型冠状病毒肺炎的临床特点、诊治要点提出意见建议,强调:(1)诊断应强调新型冠状病毒肺炎在老年人中的临床不典型性、基础疾病导致病情的复杂化;(2)治疗须兼顾多系统功能,实施以呼吸和危重症学科为主的多学科综合救治;(3)防控需建立"院中-院外全程照护"和"急慢性疾病一体化管理"体系,并形成常态化防控,以提高老年新型冠状病毒肺炎诊治能力和防控水平。

WNT1诱导信号通路蛋白2对肝细胞脂质代谢的影响及其作用机制

目的探讨不同浓度人重组WNT1诱导信号通路蛋白2(WISP2)对人肝癌细胞(HepG2)脂质代谢的影响及相关作用机制。方法分别用不同浓度(0、0.4、1和2 μg/L)人重组WISP2作用于HepG2细胞48 h, Cell-Titer发光法测定细胞活力, 酶法检测各组HepG2细胞内三酰甘油(TG)及总胆固醇(TC)含量, 同时应用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及免疫印迹法(western blot)检测HepG2细胞内脂质合成、分解、转运相关基因mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较, 各浓度人重组WISP2处理组均未降低HepG2细胞的活性;人重组WISP2处理上调HepG2细胞TG、TC含量, 0.4、1、2 μg/L人重组WISP2处理组TG的含量分别为未处理组的1.254±0.039、1.216±0.028、1.174±0.014倍(F=6.791, P=0.006), TC含量分别为未处理组的1.264±0.057、1.394±0.101、1.392±0.077倍(F=7.045, P=0.005)。进一步研究发现, 与对照组比较, 加入人重组WISP2明显增加HepG2细胞脂质合成蛋白甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及二酰基甘油酰基转移酶(DGAT2)mRNA表达(均P<0.05), 显著上调SREBP1、ACC及脂肪酸合成酶(FAS)蛋白水平的表达(均P<0.05);但对低密度脂蛋白受体(LDLR)、载脂蛋白B(ApoB)、载脂蛋白E(ApoE)这类脂质转运蛋白及关键的脂质分解蛋白--脂肪三酰甘油脂肪酶(ATGL)的表达无明显影响。结论 rh-WISP2能显著增加肝细胞脂质含量, 促进脂质合成增加可能是其作用的关键机制。

氯化锂通过上调焦磷酸水平抑制血管平滑肌细胞钙化

目的探讨氯化锂对血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞,用钙化培养基(无机磷浓度为3 mmol/L)建立平滑肌细胞钙化模型。药物处理组用氯化锂(10 mmol/L)预处理细胞4 h后加入3 mmol/L的无机磷,继续培养细胞数天后用茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平,同时应用焦磷酸偶联酶反应底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)消耗法,酶标仪(OD340)检测细胞外焦磷酸的分泌;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测细胞中ankh基因的表达;采用慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞的方法,建立对照细胞组和ankh敲低的实验细胞组,并观察其对细胞钙化的影响。结果高磷细胞组钙化检测值为(65.00±2.11)ng/g,较对照细胞组(12.39±0.38)ng/g钙化水平明显升高(P<0.01)。氯化锂预处理细胞的钙化检测值为(24.92±1.87)ng/g,与高磷对照组(60.94±4.51)ng/g比较能显著抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化(P<0.01);氯化锂预处理明显上调细胞外液中焦磷酸的含量,基础条件下预处理组为(51.70±7.26)×10^-3 mmol/g,对照组为(28.71±2.55)×10^-3mmol/g(P<0.01);高磷刺激下预处理组为(34.35±4.27)×10^-3mmol/g,对照组为(20.89±4.93)×10^-3mmol/g(P<0.05),同时氯化锂预处理显著升高细胞ankh表达水平(P<0.01);而敲低ankh使无机磷诱导的血管平滑肌细胞钙化程度显著加重,敲低ankh细胞钙化检测值为(71.73±2.45)ng/g,对照组为(56.19±3.59)ng/g(P<0.01)。结论氯化锂通过上调平滑肌ANKH的表达,升高细胞外液中的焦磷酸水平,抑制高磷诱导下血管平滑肌细胞的钙化。