世界卫生组织《人类精液检查与处理实验室手册(第6版)》简介

世界卫生组织(WHO)《人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》于1980年首次出版,以满足临床与科研对人类精液标准化检测程序日益增长的需求。该手册是人类精液实验室检查和处理程序及方法的标准操作指南,旨在提高精液分析的质量和提高不同实验室结果的可比性。

男性生育力评价与中国不育症现况

《生殖医学杂志》为庆祝新中国成立70周年,特别邀请了生殖医学领域的专家撰写了新中国成立70年以来在妇产科、男科学、辅助生殖技术、计划生育方面的发展历程和现状,歌颂伟大祖国在生殖医学领域取得的辉煌成绩。《生殖医学杂志》设置“新中国生殖医学发展70年巡礼”专栏,将分期发表四篇文章。

增龄对生育期雄性大鼠精子氧化应激与凋亡的影响

目的探讨增龄对生育期雄性大鼠精子氧化应激和凋亡的影响,为增龄对生育期雄性大鼠生育力影响的机制研究提供理论基础。方法SPF级雄性Wistar大鼠18只,分为低(6个月龄)、中(9.5个月龄)、高(12.5个月)3个年龄组,每组各6只。大鼠腹腔注射3%戊巴比妥,麻醉后称重并取材,记录大鼠体重、睾丸和附睾重量,全自动精子分析仪检测稀释20倍后附睾精子参数,应用流式细胞分析仪检测大鼠精子的活性氧(ROS)和凋亡情况,统计分析各组间指标的差异。结果高龄组大鼠的睾丸、附睾重量以及睾丸/体重比显著低于低龄组和中龄组(P<0.05)。3组大鼠间附睾精子的精子浓度、精子总活力及前向运动精子比例比较均无统计学差异(P>0.05)。流式细胞学检测结果显示,3组大鼠间附睾精子ROS荧光强度随年龄增长呈现下降的趋势,高龄组显著低于低龄组和中龄组(P<0.05);晚期凋亡的附睾精子比例随年龄增长逐渐增加,高龄组显著高于低龄组和中龄组(P<0.05)。结论增龄引起生育期雄性大鼠晚期凋亡的精子比例增加,可能是导致雄性大鼠生育力下降的原因之一。

弱精子症患者精浆外泌体has-miR345-3p和has-miR424-5p的分析及生物作用的预测

目的 分析弱精子症患者精浆外泌体微小RNA(miRNAs)差异表达谱,探讨has-miR-345-3p和has-miR-424-5p在弱精子症的作用。方法 收集2021年7—10月就诊于北大国际医院生殖医学科的男性弱精子症(精子活力<40%)患者50例(弱精子症组)及同时期在该院体检中心健康体检的精液参数正常男性50例(对照组)为研究对象,分离留存精浆后,每组随机取10例混为1个混合样本,每组各5个混合样本。采用梯度超速离心的方法分离纯化精浆外泌体,提取总RNA,芯片法分析miRNAs的差异表达谱,采用实时定量PCR(qRT-PCR)验证has-miR-345-3p和has-miR-424-5p,生物信息学技术预测has-miR-345-3p和has-miR-424-5p的生物作用。结果 芯片检测结果表明,与对照组相比,弱精子症组精浆外泌体中共6个miRNAs表达显著上调,2个miRNAs表达显著下调(P均<0.05)。qRT-PCR验证结果显示,弱精子症组精浆外泌体中的has-miR-345-3p表达水平显著高于对照组,has-miR-424-5p表达水平显著低于对照组(P均<0.05)。通过TargetScan数据库分析预测has-miR-345-3p和has-miR-424-5p的靶基因分别为KCNMB1和KCNN4,has-miR-345-3p可与KCNMB1的3’UTR连续5个碱基相匹配,has-miR-424-5p可与KCNN4的3’UTR连续7个碱基相匹配。数据库分析显示KCNMB1和KCNN4属于钾离子通道蛋白,是构成精子离子通道KSper的辅助亚基,与精子活力和男性不育密切相关。结论 弱精子症患者精浆外泌体中has-miR-345-3p表达上调、has-miR-424-5p表达下调,两者可能通过对靶基因的调控影响下游相关蛋白继而影响精子活力,但具体机制有待进一步研究。

四省一个直辖市精液分析外部质量控制网络建立的初步研究

目的在全国四省一市,建立精液分析外部质量控制网络。方法2017年在辽宁省沈阳市、甘肃省兰州市、四川省成都市、吉林省长春市和北京市,开展精液分析外部质量控制网络建立方法的初步探索。主要参加实验室为各省市三甲医院的男科实验室、生殖中心实验室、精子库实验室和临床检验实验室,共106家单位。采用在指定实验室集中发放质控品,现场评估的形式。主要外部质量控制的方法采用《WHO人类精液检查和处理实验室手册(第5版)》精液分析标准化方法,包括改良Neubauer血细胞计数板评估精子浓度、活动力视频录像评估、精子活动力、伊红苯胺黑评估精子存活率、巴氏染色方法评估精子形态,分别用变异系数(CV)和Youden图评估外部质控的结果。结果精子存活率评估四省一市两个质控品的CV均在15%以下;而仅吉林省精子浓度和辽宁省精子活动力评估中两个质控品的CV在15%以下;精子形态学评估四省一市两个质控品的CV均在15%以上。Youden图分析精子浓度显示:23.53%、25.00%、36.84%、10.00%和18.18%的质控结果均在95%可信区间(95%CI)内;Youden图分析活动力显示:9.38%、25.00%、44.44%、12.50%和30.00%的质控结果均在95%CI内;Youden图分析精子存活率显示:8.33%、37.50%、47.37%、10.00%和20.00%的质控结果均在95%CI内。结论本研究证实外部质量控制网络的建立方法可行且结果可靠,其中精子存活率最容易质控,易于操作;精子浓度和活动力的外部质控方法还需进一步优化;而精子形态评估最难质控,使用桥连显微镜的方法便于质控。

人类精子冷冻损伤与保护的相关研究

人类精子冷冻保存是男性生育力保存和不育症治疗的重要技术。无论是捐精冻存还是自精保存,都面临着冷冻损伤对精液质量的影响。如何提高冻存复温后精液的质量成为我们急需解决的科学和技术问题,目前研究发现人类精子冷冻复苏主要引起冰晶形成、氧化还原反应失衡和生物大分子改变的损伤;可以通过精子优选、添加冷冻保护剂和优化冷冻复苏方法的途径降低冷冻损伤。

未成熟大鼠睾丸组织玻璃化冻存效果的比较性研究

目的采用三种浓度冷冻保护剂方案对两周龄未成熟大鼠睾丸组织进行玻璃化冻存,并对冻存效果做出评价。方法根据DMEM/F12培养基中所含二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(EG)的浓度差异,将冻存液分为A、B、C三组,其中DMSO和EG的浓度依次为7.5%、15%、25%。将大鼠睾丸分割为8 mm^3~9 mm^3大小的组织块,分别纳入对照组、A组、B组和C组中。对照组的睾丸组织不作冷冻处理,直接进行后续实验;A、B、C三组使用不同浓度的冷冻保护剂进行玻璃化冷冻。冻存2周后,取出样本进行复苏。比较各组睾丸组织的形态学改变,采用免疫荧光染色观察精原细胞标志物UCHL1、支持细胞标志物SOX9、睾丸间质Leydig细胞标志物StAR和细胞增殖核抗原PCNA表达的改变,观察细胞的凋亡情况。结果玻璃化冻存后,未成熟大鼠睾丸组织形态发生一定程度改变,生精细胞及支持细胞标志物表达下降,凋亡增加,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。三个冻存组中,B组形态学改变最小,细胞标志物表达水平与对照组相差最少,凋亡最少;A组的结构损伤明显,生精上皮与基底膜分离;C组的细胞标志物表达显著下降,凋亡增加最显著。结论冷冻保护剂浓度变化对未成熟睾丸组织玻璃化冻存效果有显著影响,15%DMSO和15%EG组合是玻璃化冻存未成熟大鼠睾丸组织较适宜的冷冻保护剂浓度方案,可为进一步的临床应用提供参考。

锌-α2糖蛋白和锌指蛋白32在大鼠睾丸及睾周脂肪中的表达

目的:探讨肥胖大鼠睾丸及睾周脂肪中锌α2糖蛋白(ZAG)和锌指蛋白32(ZBTB32)的表达及在睾丸中的定位。方法:清洁级雄性SD大鼠20只,随机分成研究组(高脂饲料喂养)和对照组(普通饲料喂养),12周后成功构建肥胖大鼠模型。采用免疫组织化学法检测ZAG和ZBTB32在睾丸中的定位,采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测ZAG和ZBTB32在大鼠睾丸及睾周脂肪中mRNA和蛋白表达。结果:ZAG和ZBTB32在大鼠睾丸生精细胞胞质中表达;研究组大鼠睾周脂肪中ZAG蛋白的表达量和mRNA相对表达量(0.751±0.030,0.048±0.068)均低于对照组(1.116±0.021,1.000±0.000)(P<0.05);研究组与对照组大鼠睾丸组织中ZAG蛋白表达量(0.616±0.025,0.605±0.033)和mRNA相对表达量(0.820±0.760,1.000±0.000)均无差异(P>0.05);ZBTB32在研究组大鼠睾丸及睾周脂肪组织中蛋白表达量(1.514±0.057,0.376±0.007)与对照组(1.477±0.035,0.390±0.019)比较无差异(P>0.05);ZBTB32在研究组大鼠睾丸及睾周脂肪中mRNA相对表达量(0.994±0.770,0.744±0.650)与对照组大鼠(1.000±0,1.000±0.000)比较无差异(P>0.05)。结论:肥胖大鼠睾周脂肪中ZAG表达显著降低,提示肥胖可能导致ZAG表达异常,进而影响雄性生殖。