药物安全性评价中的实验动物福利

开展实验动物福利工作不论对于实验动物自身,还是科学研究都具有重要意义。本文对实践中如何开展实验动物福利工作,以及其中存在的问题进行了初步探讨。

中药注射剂不良反应及再评价概述

通过对当前中药注射剂不良反应的特点和原因进行综述,结合中药注射剂质量控制、使用原则和再评价,对中药注射剂的健康发展提出建议。

乌头类中药对CHL细胞的DNA损伤作用

[目的]观察乌头类中药盐附子和乌头碱对CHL细胞(中国仓鼠肺成纤维细胞)的DNA损伤作用。[方法]采用单细胞凝胶电泳法检测盐附子、乌头碱对CHL细胞DNA即刻损伤的影响。在加和不加S9时,盐附子均设5个剂量组(终浓度分别为5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药∕ml)、乌头碱设4个剂量组(终浓度分别为100、50、25、5μg/ml),试验同时设PBS阴性对照组和阳性对照组,阳性对照在不加S9时为0.1 mmol/ml重铬酸钾,加S9时为80μg/ml环磷酰胺。[结果]在加和不加S9时,盐附子各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照比较差异无统计学意义(P﹥0.05),乌头碱100μg/ml和50μg/ml组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照之间差异有统计学意义(P﹤0.05),乌头碱各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长存在剂量反应关系。[结论]在本试验条件下,加与不加S9时,乌头碱浓度为100μg/ml和50μg/ml时对CHL细胞有DNA损伤作用;盐附子5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml时未观察到对CHL细胞有DNA损伤作用。

两种诱导方法制备大鼠肝S9在两种遗传毒性试验中活性比较

目的:通过比较联合诱导法和多氯联苯诱导法制备的S9的活化作用,探讨两种S9活化作用的差异对两种试验阳性结果的影响。方法:采用Ames试验方法和染色体畸变试验方法对两种S9活化的阳性结果进行比较。Lowry法测定两种S9的蛋白含量,Omura法测定P450含量。结果:Ames试验和染色体畸变试验中两种S9在阳性组中都显示出明显活化作用,同一条件下,Ames试验中使用两种S9所得阳性结果并无较大差异,染色体畸变试验中两种S9活化的阳性组畸变率间差异无统计学意义(P>0·05)。多氯联苯诱导法S9的蛋白含量13·25g·L-1,P450含量为3·92nmol·mg-1蛋白,联合诱导法S9蛋白含量为15·25g·L-1,蛋白含量P450含量为2·94nmol·mg-1蛋白。结论:两种S9在Ames试验和染色体畸变试验中对相应阳性诱变剂都有明显的活化作用。可以认为两种S9在Ames试验和染色体畸变试验中对于相应的阳性化学物活化作用无较大差异,联合诱导法可以替代多氯联苯诱导法制备肝匀浆S9。

乌头碱对乳鼠心肌细胞的毒性作用

目的研究乌头碱对乳鼠心肌细胞的毒性作用。方法分离培养SD乳鼠心肌细胞,给予100.0、10.0、1.0、0.1μg.ml-1的乌头碱染毒后,观察乳鼠心肌细胞的形态及细胞搏动的情况,测定丙二醛(MDA)的含量,并采用MTT法检测细胞存活率。结果随着乌头碱浓度的增加,心肌细胞存活率下降。与对照组相比,乌头碱浓度>1.0μg.ml-1时,心肌细胞的存活率显著降低(P<0.01),MDA的含量随剂量的增加而明显升高(P<0.01)。结论乌头碱浓度>1.0μg.ml-1时,对乳鼠心肌细胞有明显的氧化损伤作用,同时表现出较强的细胞毒性。

长春新碱传递体对荷Burkitt’s淋巴瘤裸鼠的抑瘤活性评价

目的评价长春新碱传递体(vincristine loaded transfersom es,VCR-T)对荷Burk itt’s淋巴瘤裸鼠的抑瘤效果。方法建立荷Burk itt’s淋巴瘤的裸鼠模型,将VCR-T分为高(0.8 mg.kg-1)、中(0.2 mg.kg-1)、低(0.05 mg.kg-1)剂量以及单次给药和3次给药组,长春新碱溶液(vincristine solution,VCR-Sol)以0.8 mg.kg-1的剂量分3次静脉注射,比较各组荷瘤裸鼠的相对肿瘤增殖率、肿瘤生长曲线、抑瘤率,并进行瘤体组织学检查考察VCR-T的抑瘤效果。结果各治疗组对肿瘤的生长均有一定的抑制作用,且随着给药剂量及给药次数的增加,对肿瘤的抑制作用也相应的增加;VCR-T以0.8 mg.kg-1剂量单次给药则可达到与VCR-Sol相同的效果,而0.2 mg.kg-1剂量3次给药的疗效则优于VCR-Sol;所有VCR-T组裸鼠100%存活,VCR-Sol组裸鼠存活率仅75%。结论VCR-T透皮给药具有比VCR-Sol静注给药更好的抑瘤效果。

重组人Neureguline对快速起搏所致猴心衰心肌收缩能力的影响及其机制研究

目的研究重组人N euregu line对快速起搏所致心力衰竭恒河猴心肌收缩能力的影响,并探讨其可能的机理。方法成年雄性恒河猴24只,随机分为假手术组、心力衰竭组及N euregu line治疗组,每组8只。治疗组240次/m in起搏7 d后,起搏状态下连续10 d,每天1次静脉注射重组人N euregu line 3μg/kg,心力衰竭组给予同体积生理盐水。连续给药10 d结束后,测定左心室的最大压力上升速度(LV dp/dtm ax)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室收缩末期压(LV SP)等血流动力学指标。提取左室心肌组织mRNA,采用实时荧光定量PCR的方法分析肌球蛋白重链(-αMyH C)的表达水平。结果心力衰竭组LV dp/dtm ax、LV SP低于假手术组(P<0.05),LVEDP高于假手术组(P<0.05);N euregu line治疗组LV dp/dtm ax高于心力衰竭组(P<0.05),LV SP有上升的趋势(上升了11%),LVEDP有下降的趋势(下降了16%)。心力衰竭组-αMyH C表达水平低于假手术组(P<0.05);治疗组-αMyH C表达水平高于心力衰竭组(P<0.05)。结论重组人N euregu lin可能通过向上调节-αMyH C表达水平这一机制来增强心肌收缩力,从而达到治疗心衰的目的。

重组人纽兰格林对正常恒河猴心脏的影响

探索重组人纽兰格林对健康成年恒河猴心脏的作用。将10只健康成年实验恒河猴随机分为实验组及对照组,分别注射等量重组人纽兰格林及生理盐水,采用超声心动图对用药前、用药即刻60 s内及用药10 d后相关指标进行测量,比较两组之间及不同时间之间各指标的差异。结果表明:重组人纽兰格林对健康实验恒河猴的舒张末期左室内径及容积、收缩末期左室容积、每搏量有影响,且随着用药时间的延长4者均增大,而重组人纽兰格林对健康恒河猴的左室射血分数及短轴缩短率没有显著影响。本研究认为重组人纽兰格林对健康成年恒河猴左心室容积有影响,而对心肌收缩力无显著影响。

实验恒河猴10只心脏血流动力学及左室收缩功能的初步测定

目的建立健康成年实验恒河猴心脏血流动力学指标及左室收缩功能正常基础参考值。方法分别采用脉冲多普勒及M型超声Teichholtz公式对10只健康成年实验恒河猴(雌性4只,雄性6只)进行心脏血液动力学指标及左室收缩功能指标测量,并比较雌雄组间各参数的差异。结果健康成年实验恒河猴心脏血液动力学及左室收缩功能指标均类似于人类新生儿,雌、雄组间比较各指标间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论正常恒河猴心脏血液动力学及左室收缩功能测值可作为相关生理参数的基础正常值。

高效液相色谱法测定心达康片的含量

目的应用反相高效液相色谱法测定心达康的含量。方法以甲醇-0.2%磷酸(45:55) (pH2.27)为流动相,采用C_(18)化学键合硅胶为固定相,在检测波长368nm下进行测定。结果槲皮素、山奈素、异鼠李素三种黄酮分别在7.88μg.ml^(-1)～39.39μg·ml^(-1)、1.64μg.ml^(-)～8.18μg·ml^(-1)、23.40μg.ml^(-1)～117.0μg.ml^(-1)范围内线性良好,日内RSD≤1.38%(n=3),日间RSO≤1.96%(n=3),回收率99.4%～100.5%(n=3)。结论该方法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制。

超声评价老年恒河猴颈动脉和腹主动脉结构及血流动力学变化

目的应用超声评价成年及老年恒河猴颈动脉和腹主动脉的形态结构及血流动力学的变化情况,并筛选评价实验动物早期动脉硬化的敏感指标。方法将26只健康恒河猴按年龄分为老年组20只和成年组6只,麻醉状态下对双侧颈动脉及腹主动脉行超声检测。结果恒河猴老年组颈总动脉收缩期最大管径(Ds)、舒张期最小管径(Dd)及内-中膜厚度与Dd比值,颈总动脉窦部Dd、颈内动脉Dd均增大,椎动脉Ds减少;颈总动脉、颈总动脉窦部及颈内动脉僵硬度、弹性系数均增高,顺应性均降低,与恒河猴成年组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。颈总动脉Dd、收缩期峰值血流速度、顺应性及内-中膜厚度与Dd比值,颈动脉窦部顺应性,椎动脉平均血流速度与年龄有较强相关性(│r│≥0.6,P<0.05)。结论超声可以评价老年恒河猴颈动脉和腹主动脉的形态结构及血流动力学的变化情况,其中颈总动脉Dd、收缩期峰值血流速度和顺应性可作为超声早期评价实验动物动脉硬化的敏感指标。

实验恒河猴超声心动图的初步研究

分别采用二维、脉冲多普勒及M型超声心动图Teichholtz公式对1 0只健康成年实验恒河猴(Macacamulatta)的心脏结构、心脏血流动力学及左室收缩功能进行测定,并比较不同性别间各参数的差异,以建立正常健康成年恒河猴超声心动图相关生理学参数的基础正常值。结果表明,健康成年实验恒河猴超声心动图各项生理指标类似于人类新生儿的指标,雌、雄组间比较除室间隔舒张末期厚度有统计学差异外(P <0 0 5 ) ,其余指标均无统计学差异(P >0 0 5 )。

高效液相色谱法测定心达康片的含量

目的应用反相高效液相色谱法测定心达康的含量。方法以甲醇-0.2%磷酸(45∶55)(pH2.27)为流动相,采用C18化学键合硅胶为固定相,在368nm进行测定。结果槲皮素、山奈素、异鼠李素3种黄酮在测定范围内线性良好。结论该方法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制。

大黄对急性胰腺炎治疗作用的实验研究

目的:研究大黄对急性胰腺炎的治疗作用。方法:应用逆行胆管注射3%牛黄胆酸钠诱导大鼠急性胰腺炎,分别于造模后6、12、24 h观察大鼠的死亡率,胰腺系数,血清中淀粉酶(AMY)、超氧化物歧化酶(SOD)、TNF-α和IL-1β含量,并对胰腺进行病理学检测。结果:与模型组比较,各时间点给药组的死亡率、胰腺质量、血清TNF-α和IL-1β含量均显著降低(P<0.05),血清SOD活性显著升高(P<0.01);给药组AMY含量于造模后6 h时显著低于模型组(P<0.01)1,2 h时显著高于模型组(P<0.01)2,4 h时两者未见统计学差异(P>0.05);各给药组病理得分与模型组相比均显著降低,但得分增高的趋势类似。结论:大黄对模型动物的胰腺病变有保护作用,但不能逆转其变化趋势。

栀子甙对血管性痴呆大鼠行为学和脑组织病理改变的影响

目的观察栀子甙对血管性痴呆(VaD)大鼠认知功能的影响。方法采用双侧颈总动脉结扎制备VaD大鼠模型,予VaD大鼠不同剂量栀子甙〔25mg/(kg·d)、50mg/(kg·d)、75mg/(kg·d)〕灌胃,连续治疗4周后,进行水迷宫实验和脑组织病理检查,结果与假手术组、模型组及多奈哌齐治疗组相比较,观察栀子甙对血管性痴呆大鼠的影响。结果模型组较假手术组大鼠逃避潜伏期延长、平台象限游程/总游程下降(P<0.05);栀子甙高、中剂量治疗组逃避潜伏期短于模型组、平台象限游程/总游程大于模型组(P<0.05),接近于假手术组和多奈哌齐组水平(P>0.05),栀子甙低剂量组与模型组比较未见明显差异,但反映出其具有改善认知损害作用趋势。病理检查显示与模型组相比,栀子甙治疗组大鼠皮层及海马神经元的凋亡坏死明显减轻。结论双侧颈总动脉结扎致慢性低灌注能显著影响大鼠的认知功能,栀子甙对血管性痴呆大鼠模型的认知功能损害有防治作用,具有剂量依赖性。

乌头碱对大鼠睾丸支持细胞的毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18～20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×101、5×102、5×103、5×104 ng/ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响,并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。[结果]MTT结果显示:乌头碱作用24h后,各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖均有促进作用;作用48 h后,低剂量乌头碱(5×101、5×102ng/m)对大鼠睾丸支持细胞的增殖有促进作用;高剂量乌头碱(5×103、5×104 ng/ml)抑制支持细胞的增殖。乳酸测定结果显示:乌头碱作用24 h后,各剂量组乳酸分泌量均增加,乌头碱剂量为5×104 ng/ml时,乳酸分泌量增加率降低。[结论]低剂量乌头碱可促进大鼠睾丸支持细胞的增殖及乳酸分泌量的增加,高剂量乌头碱可抑制大鼠睾丸支持细胞的增殖,降低其对乳酸分泌的刺激作用。

盐附子对小鼠的急性神经毒性作用

目的研究盐附子(SAC)对小鼠神经系统的急性毒性作用。方法采用小鼠自发活动、爬杆、Morris水迷宫试验,分别设SAC生药7.68、3.84、1.92 g.kg-1剂量组,ig给药,同时设阴性对照和阳性对照组。单次给药后15、60 min用自发活动仪测定小鼠在10 min内自发活动的次数;单次给药30 min后将小鼠放在爬杆架的玻璃棒上,记录小鼠爬杆时间;连续给药4 d,末次给药后30 min进行水迷宫试验,以小鼠找到隐藏平台的时间为逃避潜伏期。结果SAC高、中、低剂量组的小鼠自发活动次数、爬杆时间、逃避潜伏期与对照组相应指标相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论SAC浓度为7.68、3.84、1.92 g.kg-1时,未观察到其对小鼠神经系统的急性毒性作用。

特异性溶瘤重组腺病毒KH901对荷瘤鼠肿瘤生长的抑制作用和表达GM-CSF的研究

目的探讨特异性溶瘤重组腺病毒KH901的抗肿瘤效果及表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的水平。方法裸鼠皮下接种人肝细胞癌(Hep3B)细胞或人前列腺癌(LNcap)细胞,建立相应裸鼠移植瘤模型。KH901瘤体内注射给药,同时设阳性对照〔5-氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂尾静脉注射〕和阴性对照〔生理盐水(NS)尾静脉注射〕,以相对肿瘤增殖率(T/C%)和抑瘤率观察抗肿瘤效果;建立人肺癌(A549)裸鼠移植瘤模型,瘤体内注射KH901,分别于首次给药后第2、7、11、14、18、36d各取3只动物眶静脉采血并摘取肿瘤,以ELISA法测定血清和肿瘤匀浆液上清中GM-CSF含量。结果1在Hep3B裸鼠抑瘤实验中,KH901高剂量(3×1010VP/鼠)组的T/C%和抑瘤率分别为7.31%、93.61%,与KH901低剂量(3×108VP/鼠)组(40.27%、68.76%)和5-FU组(37.33%、61.49%)相比显示出较强的抑瘤效果(P<0.05)。2在LNcap裸鼠抑瘤实验中,KH901多次给药(3×1010VP/鼠×3)组的T/C%和抑瘤率分别为5.47%、95.29%,其抑瘤效果强于顺铂组(25.47%、71.93%),但与KH901单次给药(3×1010VP/鼠×1)组(12.94%、87.94%)相比差异无统计学意义。3在A549裸鼠移植瘤模型中,肿瘤和血清中的GM-CSF分别在第7d〔(47.72±9.21)ng/mg〕和第11d〔(92.45±18.64)ng/mL〕出现高峰,随后,GM-CSF表达量逐渐降低。结论KH901有明显的抗肿瘤作用,在体内肿瘤中表达高水平的GM-CSF,并渗入血管到循环系统,形成血液GM-CSF的高峰。