人类细胞色素P450s研究概况及其在新药安全性评价中的应用

人类细胞色素P45 0s(CYP45 0s)对许多内源、外源性化合物在体内的I相生物转化有重要作用。人类编码CYP45 0s的基因已基本明确 ,为 5 5个基因 ,2 9个假基因。目前欧美各国已经把CYP45 0s及其同工酶测定用于新药的筛选及安全性评价。本实验室建立了不同种属动物肝细胞色素P45 0s同工酶的测定方法 ,并选择来氟米特、重组人白细胞介素 11(rhIL 11)及重组人表皮生长因子 (rh EGF) ,检测其对不同动物CYP45 0s的影响。实验结果表明 :①来氟米特对Beagle犬肝微粒体蛋白含量、CYP45 0s总量、7 乙氧基试卤灵脱乙基酶 (CYP1A1)、香豆素 7 羟化酶 (CYP2A6 /CYP2A2 )、甲苯磺丁脲羟化酶 (CYP2C8/9)、氯唑沙宗羟化酶 (CYP2E1)的比活性均无明显影响。②大鼠皮下注射rhIL 11后 ,肝微粒体中CYP1A1及CYP2A2比活性明显低于对照组 ,而肝微粒体蛋白含量、CYP45 0总量及CYP2E1比活性无明显变化。③rh EGF对猕猴肝微粒体蛋白含量、CYP45 0s总量、CYP1A1、CYP2A6、CYP2C8/9、S (+) 美芬妥英羟化酶 (CYP2C19)、丁呋洛尔 1 羟化酶 (CYP2D6 )、CYP2E1比活性均无明显影响。本实验建立的犬、大鼠及猴肝CYP45 0s测定方法具有快速、简单、重复性好等特点 ,可广泛用于药物筛选及临床前安全性评价。除合成药物外 。

树突细胞评价免疫毒性的研究进展

树突细胞作为皮肤接触性过敏反应评价模型的研究越来越多,研究内容也从最初的确定该模型的适宜性到更深入的基因组学机制以及替代细胞系的研究,目前该模型已处于接触性过敏反应评价的替代实验的验证阶段,这就为其能够作为其他免疫毒性评价的模型奠定了基础。树突细胞作为免疫毒性评价模型还可以弥补现有的免疫毒性评价环节的缺失以及为自身免疫反应评价提供突破点。所以树突细胞在免疫毒性评价中具有重要的意义。

生物类似药药代动力学研究与评价技术考虑

1概述生物类似药是指在质量、安全性和有效性方面与已获准注册的参照药具有相似性的治疗用生物制品。生物类似药研发主要通过比对试验来证明其与参照药的相似性,以此为基础评价其安全有效性和质量可控。生物类似药总体研发路径采用逐步递进思路,分阶段证明候选药与参照药的相似性,首先经过全面的药学比对研究,然后通过非临床比对试验和临床比对试验进一步确认与参照药的类似性[1]。为支持类似药和参照药的一致性评价,

组织芯片技术及其在新药毒理学研究中的应用

组织芯片(tissue microarray,TMA)也称组织微阵列,是将数十个甚至上千个微小组织标本整齐排列在一张载玻片上制成的高通量微阵列,是基因芯片的延伸和发展,可以同时进行多个标本的同一个指标的研究,具有体积小、耗材少、快速、含生物学信息量大等优点,该技术还可以与免疫组化(immunohistochemistry,ICH)、荧光核酸原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)、RNA原位杂交(RNA in situ hybridization,RNA-ISH)等技术相结合,在基因、转录和表达产物的不同表达分子水平进行研究。本文结合组织芯片技术的特点,对其在新药毒理学研究中的应用进行初步探讨。

转基因作物食用潜在致敏性的安全评价

转基因作物食用潜在致敏性是转基因作物食用安全性评价的焦点问题,目前国内外对其致敏性检测和评价尚无统一的方法和标准。本文借鉴FAO/WHO转基因食品致敏安全性评价的有关策略和评价程序,结合药品、生物制品以及化妆品的相关致敏安全性评价方法,采用危险评价、实质等同性分析、个案处理和逐步完善的评价原则,从转基因作物的转入基因、转基因作物和非预期效应等3方面进行评价,并对目前国内外采用的序列相似性比较、特异血清筛选、靶向血清筛选、模拟胃肠液消化试验和动物模型等不同方法进行综述,旨在为转基因作物食用潜在致敏安全性评价提供科学合理的方案。

安全性评价试验中Beagle犬校正QT间期的计算分析

目的建立分析适合安全性评价试验中Beagle犬心率(Hear rate,HR)的校正QT间期(correct QT,QTc)计算方法。方法171只健康Beagle犬是本实验室7个GLP长期毒性试验所用动物,均购于广州医药工业研究院。本实验采用的HR和QT间期均为给药前测得的Beagle犬基础值。分别采用目前公认的Bazett(QTc=QT/(RR)1/2,Bazett,1920)、Fridericia(QTc=QT/(RR)1/3,Fridericia,1920)、Sagie(QTc=QT+0.154(1-RR),Sagie etal.,1992)、Todt(QTc=QT-0.1(RR-1000),Todt etal.,1992)、Vande Water(QTc=QT-0.087(RR-1000),Van de Water etal.,1989)等5种公式计算QTc。用SPSS作单线性回归,以HR为自变量,QTc为应变量作回归分析。结果用以上5种公式分别计算得到的QTc与HR作回归分析,不同性别间QTc与HR回归参数差异无统计学意义(P>0.05)。除Vande Water公式外(P=0.297),其他公式计算得到的QTc和HR回归参数与0比较,均有显著相关(Bazett、Fridericia和Sagie公式,P<0.001;Todt公式,P=0.024),表明Van de Water公式可能更适合本实验室Beagle犬QT间期的校正。结论根据Beagle犬的基础HR和QT间期值,可以分析获得较适合安全性评价试验中Beagle犬HR的QT间期校正计算公式。

彗星试验在农药安全评价中的应用

彗星试验(Cometassay),又称单细胞凝胶电泳试验(SCGE),是一种快速、简便、灵敏的检测单个细胞DNA断裂的新技术,由于其具备其它试验无可比拟的优越性,因此应用前景十分广泛。本文就该技术的原理、操作程序和方法作一介绍,并预测其在农药安全评价中将有广阔的应用前景。

体外评价药物性肝损伤检测终点研究及其在检测系统中的应用

药物性肝损伤(DILI)是临床上导致急性肝衰竭的重要原因。众多新建细胞模型和高通量筛选技术正在被广泛应用于肝毒性筛选评价。在应用这些新技术和新方法之前,重要的是确定哪些毒性终点应被纳入评价体系,以提高对DILI的预测能力。本文结合DILI相关的重要作用机制,介绍了体外肝毒性评价应考虑的检测终点,包括肝细胞毒性、线粒体毒性、胆汁淤积、反应性代谢物导致的肝损伤以及免疫反应相关的肝损伤等,并归纳了这些毒性终点在DILI检测系统中的应用及在应用过程中面临的挑战,以期为新药开发早期的体外肝毒性筛选评价提供参考。

抗体药物偶联物临床前安全性评价策略

抗体药物偶联物(ADC)是近年来肿瘤治疗研究中的热点问题。临床上ADC药物在增强药效作用的同时,还极大减小毒副作用,因而前景良好。但该类药物组成相对复杂,且临床前安评经验积累较少,为安评带来挑战。本文通过分析ADC药物的作用方式、主要的毒性风险和临床前/临床试验中常见毒性,同时研究已批准ADC药物毒性试验,结合ICH S6(生物技术药物临床前安全性评价)和ICH S9(抗肿瘤药物研究及评价)指导原则,探讨ADC药物的临床前安评策略。

转基因抗虫玉米Bt-176食用安全性研究

转基因抗虫玉米Bt-176具有抗鳞翅目尤其玉米螟等害虫及耐草铵膦除草剂等特性。自1995年在美国首次准许无限制种植以来,Bt-176玉米已经在许多国家和地区大面积种植并作为食品和饲料广泛应用。本文从导入基因及表达蛋白的特征、毒理学研究及营养成分分析入手,探讨了Bt-176玉米的食用安全性。

CFSE示踪与流式细胞仪检测法研究环磷酰胺对T淋巴细胞增殖的影响

目的利用定量分析羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyflu-orescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)时间系列数据的方法研究淋巴细胞细胞增殖动力学及免疫抑制剂对淋巴细胞增殖抑制机制的研究。方法环磷酰胺造成小鼠免疫抑制模型,并用CFSE染料给对照组和给药组动物的淋巴细胞染色,通过数学模型拟合法分析数据。结果对照组和给药组淋巴细胞增殖进入第一代分裂的时间分别是27.17h和22.88h,每代细胞死亡率分别为20%和40%;进入分裂前的细胞半衰期分别为31.53h和43.32h。结论通过数学拟合法对CFSE数据进行定量分析,探讨药物对淋巴细胞增殖影响的机制,该实验中的药物环磷酰胺抑制淋巴细胞增殖的方式可能是使细胞增殖时每代细胞的死亡率增加所致。

喉癌中p15、p16基因纯合缺失与EGFR基因扩增相关性研究

研究p15、p16基因缺失和EGFR基因扩增的相关性及其与喉癌发生、发展的关系。提取喉癌新鲜组织中基因组DNA ,采用聚合酶链反应技术 ,分别对 3 0例喉癌进行p15基因第 2外显子 (p15E2 )和p16基因第 2外显子(p16E2 )进行纯合缺失研究 ;应用FISH方法进行喉癌实体瘤EGFR基因扩增研究。p15E2纯合缺失率为 13 3 % (4 3 0 ) ,p16E2纯合缺失率为 16 7% (5 3 0 ) ,p15E2、p16E2共同缺失率为 6 7% (2 3 0 )。在 3 0例喉癌实体瘤EGFR基因扩增频率为 3 0 % (9 3 0 ) ,扩增 2～ 8倍。p15E2和p16E2纯合缺失以及二者共同缺失与EGFR基因扩增相关 ,可能引起细胞周期失控而导致细胞增殖紊乱 。

雷公藤甲素SD大鼠睾丸毒性体外试验研究

探讨雷公藤甲素(Triptolide,TL)对体外原代培养SD大鼠睾丸支持细胞(sertolicell)和生精细胞(spermat-ogenic cells)增殖的影响及其广谱钙粘附蛋白(Pan-cadherin)的表达。MTT法检测雷公藤甲素8种不同浓度(0,0.1,1,10,1.0×102,1.0×103,1.0×104,1.0×105μg/L)对SD大鼠睾丸原代培养细胞增殖的影响;免疫细胞化学方法探讨在雷公藤甲素对单纯培养支持细胞的最小有毒浓度(0.1,1,10,1.0×102μg/L)水平,培养细胞pan-cadherin的表达。结果表明:雷公藤甲素浓度≥10μg/L时对混合培养细胞(主要为生精细胞),≥1.0×103μg/L时对单纯培养支持细胞的增殖有明显抑制作用,均呈剂量依赖性。细胞半数抑制浓度(IC50)分别为1.22mg/L和28.15mg/L。与溶剂对照组相比混合培养细胞在雷公藤甲素低浓度时(0.1和1μg/L)表达上调。雷公藤甲素低浓度即可抑制生精细胞增殖,而高浓度才能抑制支持细胞增殖,其细胞毒耐受性二者差异很大。睾丸毒性产生的原因可能与生精细胞的pan-cadherin表达上调有关。

转基因小鼠在药物致癌性评价中的应用

致癌性实验是药物非临床安全性评价的重要内容,用以考察药物对动物的潜在致癌作用,辅以机制研究等以评价和预测人体长期用药带来的风险。转基因小鼠肿瘤模型的建立为肿瘤研究带来了巨大变化,转基因动物模型也成为致癌性研究的重要选择之一。本文主要参考国际现有指导原则和已上市药品评价资料,概述当前常用转基因动物的特征及其在药物安全性评价中的实际应用情况,为我国致癌性评价中转基因动物的应用提供参考。

CFSE标记技术的研究进展

羧基荧光素乙酰乙酸（CFSE）标记细胞与流式细胞仪相结合的技术在免疫学领域应用越来越广泛。该技术已经由淋巴细胞扩展到应用于肿瘤细胞、干细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）甚至是细菌的研究,由检测细胞增殖拓展到体内示踪等研究。此外,对于该项技术的热点还集中在对其数据的分析、与传统方法的比较以及标记的方法的研究。尤其是对细胞增殖的结果的定量分析已经成为生物数学领域的一个热点,也为机制研究提供了更丰富的信息。羧基荧光素乙酰乙酸具有动态检测细胞增殖动力学,在单细胞水平上供信息等优势,有替代传统方法（如^3H掺入法、MTT法等）的趋势。

斑马鱼胚胎发育毒性模型评价方法的验证

目的：采用已知胚胎毒性药物验证建立的斑马鱼胚胎发育毒性模型。方法采用水浴染毒法，将受精后2～4 h （2～4 hpf）的斑马鱼胚胎暴露于不同浓度梯度的化合物，设置全反式维甲酸阳性照组、胚胎培养液空白对照组及0．1％DMSO 溶剂对照组。分别在24，48，72，144 hpf，观察胚胎的发育情况，记录畸形及死亡的胚胎数目。通过软件得到 EC50，LC50，阳性药物计算致畸指数（TI）＝LC50/EC50，有 TI 药物记为阳性结果；无 TI 则记录为阴性结果。所得结果与动物实验及临床实验结果进行对比，得出灵敏度与特异性。结果胚胎暴露于乙酰氨基酚（TI ＝2．07）、甲硫咪唑（TI ＝2．91）、吲哚美辛（TI ＝1．67）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）（TI ＝8．31）、甲氨蝶呤（TI ＝1．31），均呈现不同程度的致畸情况，甲硫咪唑出现较为明显的骨骼畸形；吲哚美辛的毒性主要体现在心脏、血液循环等终点的异常；5-FU 在较低剂量下即产生较高的死亡率，同时还发生较严重的色素缺失；对乙酰氨基酚对心脏、肝等靶器官毒性较大，出现心包囊肿；甲氨蝶呤出现显著的体节、骨骼畸形情况。阳性药物计算得出相应的 TI；而抗坏血酸、异烟肼、青霉素 G、糖精无法计算 TI，为阴性结果。9种化合物的斑马鱼试验结果与传统动物实验及临床表现一致，灵敏度为100％，特异性为100％。结论建立的斑马鱼胚胎发育毒性模型稳定，可应用与药物的早期毒性筛选。