不同叶果比对设施‘红美人’杂柑秋梢叶片生理生化特征的影响

为探究不同叶果比(leaffruitratio,LFR)对设施柑橘秋梢叶片生理生化特征的影响,以设施栽培‘红美人’杂柑为试材,设置高(LFR=100)、中(LFR=80)、低(LFR=60)3个叶果比,测定秋梢叶片中矿质元素、碳氮代谢物、碳氮代谢的关键酶、抗氧化酶活性等生理指标的变化。结果显示,LFR80和LFR100秋梢叶片的磷、钾、镁、淀粉含量较高;丙二醛、脯氨酸、抗坏血酸含量较低;β-淀粉酶、硝酸还原酶、谷氨酰胺合成酶和抗坏血酸过氧化物酶的活性较高;LFR80和LFR100秋梢叶片整体养分含量充足,受胁迫程度较低。结果表明,设施栽培‘红美人’杂柑的叶果比控制在80~100有利用于平衡营养生长和生殖生长,延缓叶片衰老,维持树势强健。

一种快速微量提取柑橘早期胚基因组DNA的方法

[目的]建立一种快速微量提取柑橘基因组DNA的方法。[方法]采用优化的CTAB微量提取法,以20.0、10.0、5.0、2.5 mg早期杂种胚为材料进行基因组DNA的提取,并对其DNA进行质量检测和SSR验证。[结果]该方法简单易行,所需材料少,提取的DNA纯度较高,OD260nm/OD280nm在1.800～2.000,可满足SSR等以PCR扩增为基础的试验需要。[结论]建立的方法可以用于快速微量提取柑橘基因组DNA。

一种快速微量提取柑橘早期胚基因组DNA的方法(英文)

[目的]建立一种快速微量提取柑橘基因组DNA的方法。[方法]采用优化的CTAB微量提取法,以20.0,10.0,5.0,2.5mg的早期杂种胚为材料进行基因组DNA的提取,并对其DNA进行质量检测和SSR验证。[结果]该方法简单易行,所需材料少,提取的DNA纯度较高,OD260nm/OD280nm在1.800～2.000,可满足SSR等以PCR扩增为基础的试验需要。[结论]建立的方法可以用于快速微量提取柑橘基因组DNA。

柑橘溃疡病相关基因CitEX3的克隆与表达分析

利用RT-PCR和PCR扩增技术,获得纽荷尔脐橙富亮氨酸重复序列受体样蛋白激酶EXS(EXTRA SPOROGENOUS CELLS)基因CDs全长,命名为Cit EX3.生物信息学分析表明,该基因CDs全长2 667bp,编码888个氨基酸,最大开放阅读框2 667bp,属于富亮氨酸重复序列蛋白激酶家族(LRR-RLKs).Cit EX3基因所编码蛋白EXS3分为胞外域、跨膜域和胞内激酶结构域,胞外域中存在保守的LRR重复序列,胞内激酶结构域中存在一个保守的丝/苏氨酸催化域重复序列.Southern Blot分析表明,在纽荷尔、椪柑、四季桔和金柑中该基因都以单拷贝形式存在.实时荧光定量PCR分析表明,接种溃疡病病菌后,该基因受溃疡病诱导上调表达,推测该基因可能与柑橘溃疡病抗性相关.

柑橘杂种胚挽救及早期鉴定

柑橘的多胚现象是柑橘杂交育种工作中面临的主要问题,胚挽救技术是解决多胚问题的有效方法。介绍了胚挽救技术中胚分离时间、培养基和培养温度等对合子胚发育的影响,并详细介绍了适合柑橘合子胚早期鉴定的分子标记技术(RAPD、AFLP、SSR和SNP等)及它们在早期鉴定中的优势和不足。

柑橘杂种材料鉴定研究进展

从形态鉴别法、化学鉴别法、同工酶鉴别法、分子标记鉴别法几方面,综述了目前国内外关于柑橘材料鉴定方法的研究进展。

基因编辑技术在柑橘中的应用研究进展

随着基因编辑技术的不断改进和完善,其越来越多地被应用到木本果树的研究之中。近几年来,不同类型的基因编辑系统在柑橘的一些品种中也已成功运用。对CRISPR/Cas介导的基因编辑技术在柑橘抗病育种、基因功能研究等方面的应用进展进行了综述,并探讨了目前存在的问题和未来面临的挑战,最后提出相应建议及对策。

柑橘黄龙病脱毒技术研究进展

柑橘黄龙病是柑橘产业中最具毁灭性的病害之一,严重影响柑橘产业的健康发展[1,2]。因全球气温变暖造成的木虱繁殖和活动范围加大以及柑橘嫁接、苗木的频繁调运,致使黄龙病在亚洲、美洲、非洲等柑橘主产区泛滥成灾[1,3]。如巴西圣保罗州南部橘区,黄龙病的发病率达到30%以上[5],而美国佛罗里达州,自2005年首次发现黄龙病以来,种植面积和产量分别下降了38%和74%[3],我国自20世纪首次在华南地区发现黄龙病以来,已有超过半数以上柑橘主产区受到为害,为害面积逐年增加,对我国的柑橘产业造成巨大经济损失[6,7]。

柑橘玻璃化法-超低温脱毒技术研究进展

柑橘类等以营养繁殖为主的植物由于长期的无性繁殖,往往容易感染一种或几种病毒、类病毒及细菌性病害[1]。如柑橘黄龙病、碎叶病、裂皮病、衰退病等,对柑橘生产造成了极大的危害,这些病害通过嫁接代代相传,随着引种和苗木、接穗的流动调运扩散蔓延,是柑橘优质高产的严重障碍[2-4]。目前,对这些病害尚无有效的治疗方法。对带病苗木进行脱毒,建立完善的无病毒苗木繁殖体系,是柑橘产业健康发展的关键。

杂柑媛小春果实的贮藏特性及生理性状变化研究

杂柑媛小春在浙江地区的生长表现良好,具有低酸且风味浓郁等优良特性,是一个具有推广潜力的品种。媛小春果实虽然具有一定的贮藏性,但贮藏周期和贮藏期间的品质变化特点尚无研究报道。本研究结果表明,随着贮藏时间的延长,媛小春果实单果重逐渐降低,果皮逐渐变薄,可溶性固形物含量(TSS)逐渐增加,由(14.34±0.86)°Brix增至(15.9±0.87)°Brix,酸度逐渐降低(0.61%±0.07%至0.46%±0.09%),贮藏品质优良,且贮藏90 d后未表现出变味、浮皮或枯水的现象,还能维持其品质特色。相关性分析表明,贮藏过程媛小春果实的TSS和固酸比变化与外观品质变化呈显著负相关性,而酸度则与外观品质变化显著正相关。贮藏期间的品质变化特点表明,媛小春是一个贮藏性良好的柑橘品种,本研究结果将为媛小春果实的品质评价、种植推广和货架期的选择提供理论依据。

不同叶果比对设施红美人杂柑光合特性和果实品质的影响

【目的】探究不同叶果比对柑橘光合特性和果实品质的影响,以期为柑橘树势调控和品质提升提供理论依据。【方法】以设施栽培红美人杂柑为试材,设置3个叶果比处理,测定枝叶的生长量、叶绿素相对含量、光合参数、产量和果实品质。【结果】叶果比100(LFR 100)的发梢数、节间长度、叶绿素相对含量、单果质量、纵径和横径显著高于其他处理,LFR80的叶面积、厚度和品质较高,LFR60的净光合速率、蒸腾速率、气孔导度和水分利用率较高,LFR80的可溶性固形物含量较高,总酸较低,固酸比最高。【结论】LFR80的枝叶生长量大、叶绿素相对含量和光合速率较高、单果质量和单株产量适中、果实品质最佳。因此,设施栽培红美人杂柑的叶果比控制在80左右比较适宜。

转基因植物疫苗的研究进展

疫苗是目前预防和控制疾病最有效的方式之一。转基因植物疫苗作为一种新型口服疫苗是现代疫苗研究的一个热点,以其价廉、安全、有效、易于储存等优点而具有十分广阔的应用前景。从转基因植物疫苗的作用机理、生产方法和应用前景等方面进行了论述。分析了转基因植物疫苗的优点及不足,并对其未来的发展进行了展望。

媛小春果实发育成熟过程品质变化研究

‘媛小春’是以‘清见’为母本、‘黄金柑’为父本进行杂交的柑橘新品种。栽培过程发现‘媛小春’表现出树势极强,果实具有色淡黄、有香气、风味浓郁和耐贮藏等特点,是一个较有潜力的杂柑新品种[1,2]。目期关于‘媛小春’的研究报道较少,主要针对其生长特性和成熟果实的品质等方面[3,4],而对其果实成熟过程品质的动态变化规律却未见报道。本研究对‘媛小春’果实发育成熟过程中大小和品质变化的特点及规律进行了研究,将为其品质评价和采摘时期的选择等提供理论依据。

不同程度干旱对温州蜜柑树势和成花生理的影响

为探明温州蜜柑对干旱处理的响应以及经干旱处理后“成花素”基因FLOWERING LOCUST(FT)和分生组织基因APETALA1(AP1)在茎和叶片中的表达谱,以两年生盆栽温州蜜柑‘由良’为实验材料,进行轻度干旱、中度干旱、重度干旱处理,处理时间分别为20、30、40 d,追踪植株树势生理、成花生理以及成花相关基因FT和AP1相对表达量。结果表明:中度干旱胁迫30 d处理对温州蜜柑树势影响不大,花芽生理分化和形态学分化较其他处理组早,且FT和AP1基因的相对表达量最高。即中度干旱胁迫30 d不仅不会对树势造成严重损伤,而且是促进植株开花的较为适宜的干旱胁迫强度和时长,成花早的效应在基因表达水平上也得到了进一步验证。

采用UPLC-MS/MS技术分析‘枸头橙’针刺和枝代谢物

【目的】明确柑橘针刺和枝的差异代谢物,探究二者差异发育的调控因素,为深入研究针刺发育机制提供依据。【方法】以‘枸头橙’(Citrus aurantium L.‘Goutou’Sour Orange)为材料,采用石蜡切片技术分析针刺和枝内部组织结构差异;利用超高效液相色谱—串联质谱(UPLC-MS/MS)和广泛靶向代谢组技术检测并筛选针刺和枝的差异代谢物。【结果】柑橘枝内表皮细胞存在分泌道、叶或侧枝原基细胞,而针刺中则无。共筛选到针刺和枝的差异显著代谢物138种,枝中上调代谢物81种,下调代谢物57种,以苯丙素类、黄酮类、萜类、生物碱类和多酚类等次生代谢物为主。差异代谢物注释到74条通路上,主要富集通路包括代谢通路、次生代谢物合成和黄酮(黄酮醇)类合成等路径。【结论】柑橘针刺和枝内部组织结构存在明显差异,明确了二者之间以次生代谢物为主的差异显著代谢物及其主要注释通路,表明次生代谢物在针刺和枝的差异发育中起着重要调控作用,为深入研究针刺发育机制奠定了一定的基础。

植物诱导抗病基因工程育种研究进展

综述了植物抗病育种中主要功能基因的研究进展及其表达策略,在此基础上评述了诱导性抗病育种的研究进展及其优缺点,并对其今后应用进行了展望。

枸头橙针刺和枝的激素水平差异分析

很多柑橘品种的枝干上均具有刺,刺的长度和数量也均有差异。柑橘的刺称为针刺,是柑橘枝条的变态,可继续发育变成枝[1]。柑橘针刺给生产带来许多不利,如造成树冠管理上的困难,增加果实的机械伤害,同时给果实采收也带来不便。但是,目前柑橘针刺的发育调控机制尚不清楚。柑橘属植物中的甜橙和柚子也完成了全基因组草图的绘制[2,3],为柑橘的分子育种等研究提供了良好的基础。

AtNPR1和Cecropin B基因共表达载体的构建

柑橘病害严重影响其外观、 品质和产量,给生产带来损失.本研究利用LP4/2A作为连接肽,构建AtNPR1和抗菌肽Cecropin B基因的共表达载体,为后期转化柑橘获得抗病材料做准备.以实验室前期构建的质粒为模板扩增AtNPR1基因,并人工合成连接肽LP4/2A和抗菌肽Cecropin B基因的编码序列.利用重叠PCR将AtNPR1和LP4/2A-Cecropin B重组,并连接至表达载体pBI121,获得以35S为启动子的35S:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B的共表达载体.同时,本研究还进一步将35S:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B的表达载体中35S启动子序列替换为韧皮部特异性启动子GRP1.8的序列,成功获得GRP1.8:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B的特异性共表达载体.目前,35S:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B和GRP1.8:AtNPR1-LP4/2A-Cecropin B共表达载体均构建完成并已成功转入农杆菌GV3101.抗病基因AtNPR1和Cecropin B共表达载体的构建将为以后转化和筛选转基因抗病柑橘准备材料.

柑橘CAPS标记和AS-PCR引物的开发

以从GenBank中下载的93 955条甜橙[Citrus sinensis(L.)Osbeck]EST序列为源序列,利用QualitySNP软件包从中挖掘出1 521个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)候选位点。进一步利用酶切位点查找软件WatCut进行分析,发现其中125个SNP为酶切扩增多态性序列(cleavedamplified polymorphic sequences,CAPS)位点。随机挑选40个CAPS候选位点设计引物,对12个含多种类型的柑橘品种进行分型,以此验证各标记的有效性。同时,还挑选了25个经生物信息学预测可导致其编码蛋白氨基酸序列改变的SNP位点,分别设计出一组等位基因特异PCR(allele specific PCR,AS-PCR)引物,以6个不同类型柑橘品种的DNA为模板进行PCR扩增,扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳进行检测,筛选多态性引物。结果显示,40个CAPS候选位点中有26个位点具有酶切扩增多态性,且分型结果稳定,可作为CAPS标记。此外,还筛选获得15组在不同柑橘品种间检测到多态性的AS-PCR引物,重复性好,可有效用于柑橘品种的SNP分型。

异源韧皮部特异启动子在转基因枳中的表达

为了筛选在柑橘韧皮部中特异表达的启动子,构建GRP、Rolc、RSSl异源韧皮部特异启动子控制GUS报告基因的植物表达载体,转化枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]上胚轴。GUS组织化学染色分析表明,3个启动子均显示了维管束组织特异性。其中,GRP启动子活性强,且具有严格的韧皮部组织特异性;Rolc启动子活性最强,在根和茎中呈组成型表达;RSSl启动子活性最弱。Real-time RT-PCR和GUS酶活性分析进一步证明了GRP启动子具有较强的韧皮部组织特异性,该启动子有望应用于柑橘抗黄龙病基因工程育种。