番茄环斑病毒5’RNA1保守片段的克隆及病毒检测

提取感染番茄环斑病毒TomatoRingspotNepovirus(TomRSV)的番杏 (TetragoniaExpansa)和葡萄品种赤霞珠(Vitis.cv.CabernetSauvignon)嫩叶及其阴性对照的总RNA ,根据NCBI中报道的TomRSV病毒四个分离物RNA15’端保守片段设计引物 ,对提取的总RNA进行RT -PCR扩增 ,获得长 4 5 0bp特异性片段 ,并克隆到PMD18-T载体中构建PT -TomRSV重组载体。以PT -TomRSV载体为阳性对照 ,以无毒赤霞珠叶片为阴性对照 ,对带毒赤霞珠葡萄叶片作番茄环斑病毒巢式PCR检测。