紫海胆中几种化学成分的分离及结构鉴定

目的研究紫海胆中化学成分并进行结构鉴定。方法以鲜活紫海胆为原料,通过有机溶剂萃取、层析分离及高效液相色谱法制备单体化合物,通过核磁共振波谱分析获得化合物的结构信息。结果从紫海胆原料分离得到9种化合物,分别鉴定为邻苯二甲酸二异辛酯、乙醇胺、胆甾醇、3-甲基-3,4-二氢-1H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-2,5-二酮、4-羟甲基-2-羧基-吡喃、libertellenone E、libertellenone F、ilicicolin C和细胞松弛素E。结论所获得化合物中除乙醇胺、胆甾醇外,其余7种化合物为紫海胆中首次分离得到。本研究可为海胆资源的深入研究和药用开发提供一定的化学依据。

河豚毒素标准样品的研制

采用质谱、核磁、红外及紫外对河豚毒素样品进行结构确证,采用柱后衍生高效液相荧光法对该纯度标准样品进行定值并进行了均匀性、稳定性检验。标准样品经国内6个具有分析资质的实验室进行协同定值,定值结果为99.45%,其扩展不确定度(95%置信区间)为0.51%。该标准样品达到国家标准样品的技术要求,可用于有关河豚毒素的方法校正和质量控制。

N-二异丙基磷酰化氨基酸-N-4-氨基吡啶衍生物的合成及对河豚毒素(TTX)解毒生物活性的研究

通过母体化合物4-氨基吡啶(4-AP)与N-二异丙基磷酰化氨基酸(DiPP-AA)在Ph3P和C2Cl6体系下的缩合反应,将具有生物活性的氨基吡啶环引入到磷酸化氨基酸结构中,设计、合成了5个N-二异丙基磷酰化氨基酸-N-4-氨基吡啶衍生物A1～A5.所有目标化合物均经IR,1H NMR,13C NMR,31P NMR,MS的表征.初步生物活性测试结果表明:目标化合物对河豚毒素(TTX)中毒的小鼠均有一定的解毒作用,并不同程度地延长了生存时间,而且毒性比母体化合物降低了.

一株假单胞菌的亚硝酸盐降解特性及其对鱼池底泥的净化作用

从海水养殖池的底泥中筛选到一株对亚硝酸盐有强降解作用的假单胞菌（Pseudomonas sp．）SF1，在实验室条件下研究了SF1的亚硝酸盐降解特性及其对高污染鱼池底泥的净化作用。研究结果表明，SF1具有高效降解转化高浓度亚硝酸钠的能力，其适宜降解条件为：亚硝酸钠质量浓度范围为1～1000mg／L；菌种接种量为10％；中量充气发酵；发酵时间为12～36h；发酵pH值为6．5～8．0。直接接种SF1发酵液（接种量10％，菌液A值0．36）到鱼池底泥，36h后，底泥的亚硝酸盐去除率达到67％，显示了SF1对鱼池底泥较强的净化作用。

超高压液相色谱法测定鱼油中的EPA-EE和DHP-EE

采用超高压液相方法检测鱼油中的二十碳五烯酸乙酯(EPA-EE)和二十二碳六烯酸乙酯(DHA-EE),采用UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,考察了流动相有机相比例、流速及柱温对鱼油中EPA-EE和DHA-EE分离的影响,确定了最佳色谱条件:等度洗脱,流动相为乙腈-水(80∶20,体积比),流速0.5 mL/min,柱温30℃,检测波长220 nm。该方法下,EPA-EE和DHA-EE分别在10.4μg/mL～209μg/mL、10.3μg/mL～207μg/mL范围内浓度和面积呈现良好的线性关系,相关系数r分别为0.999 4和0.999 7;EPA-EE和DHA-EE的方法的检测限为4 ng和6 ng,定量限分别为10 ng和15 ng,精密度试验RSD(n=6)分别为1.09%和0.34%,重复性试验RSD(n=6)分别为1.54%和1.25%,平均回收率分别为102.26%(RSD=1.33%)和96.64%(RSD=1.05%)。本方法快速、简单、可靠、灵敏、重复性好,可用于鱼油中EPA-EE和DHA-EE的快速检测。

河豚毒素的高效液相/荧光精确定量技术研究

目的：建立高灵敏度检测河豚毒素的高效液相色谱一荧光法。方法：采用柱后衍生高效液相色谱-荧光法检测河豚毒素含量，以庚烷磺酸钠为离子对试剂，应用反相离子对液相色谱分离河豚毒素，采用在线柱后衍生系统，在110％高温和4mol／LNaOH强碱条件下，将河豚毒素衍生化成具有荧光特性的C9碱，荧光检测器定量检测。结果：河豚毒素在0．408—102．00μg／ml范围内呈良好的线性相关，相关系数r=0．9999；方法的检测限为0．41 ng；定量限为0．81 ng；精密性试验相对标准偏差为0．29％；重复性试验相对标准偏差为1．87％；平均回收率为99．70％，标准偏差为1．87％。结论：本方法简单、可靠、灵敏，可用于微量河豚毒素的精确定量分析。

α-羟基膦酸酯芳甲酸酯的合成、晶体结构和质谱裂解规律研究

α-羟基膦酸酯与各种取代苯甲酸或吡啶甲酸,通过酰氯或缩合剂的作用,合成了一系列的O,O-二烷基-α-苯基-α-(取代芳基甲酸酯基)-甲基膦酸酯的衍生物.它们的合成收率为61%～84%,这些化合物的结构经过核磁(1HNMR,13CNMR和31PNMR)、红外、质谱、元素分析或高分辨质谱确证,同时化合物C1的结构在晶体结构解析上进一步得到证实.利用多级质谱分析了化合物C2,C5和C8的质谱裂解规律,解释了重排离子的形成机制.

11-脱氧河豚毒素的结构表征与毒力测定研究

目的对制备获得的11-脱氧河豚毒素(11-deoxyTTX)纯品进行结构确证与毒性测定。方法采用HRMS、1 H NMR和13 C NMR对样品进行结构表征;同时进行11-deoxyTTX对小鼠的急性毒性试验。结果样品的HRMS图谱信息与11-deoxyTTX相对分子质量吻合;1 H NMR和13 C NMR谱揭示了两组数据,该数据与文献报道基本一致;测得11-deoxyTTX对小鼠的半数致死量(LD50)为(128.82±2.09)μg.kg-1。结论 11-deoxyTTX是以半缩醛型-内酯型的互变异构体存在,与河豚毒素(TTX)的结构差别在于TTX中C-11上的羟基被氢取代。11-deoxyTTX的毒性很强,但明显低于TTX的毒性,表明TTX中C-11上的羟基对阻滞钠离子进入钠通道也发挥了重要作用。