枯草芽孢杆菌SH7抑菌蛋白的分离纯化及对烟草青枯病菌的抑制作用

采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析及聚丙烯凝胶电泳,从枯草芽孢杆菌SH7代谢物中分离纯化出一种相对分子质量为33.6 kD的蛋白,该活性物质具有淀粉酶活力,对烟草青枯病菌具有一定的抑制作用。

烟草PVYReal-TimePCR定量检测体系的建立及应用

马铃薯Y病毒是近年来危害烟草生产的重要病毒之一,严重影响烟草的产量与品质。本研究利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)全基因组序列进行序列比对,设计引物,以烟草肌动蛋白基因为内参,建立了烟草PVY的实时定量检测体系。获得的real-time PCR扩增基线平整,指数扩增明显,斜率大;稳定性和重现性好,变异系数小;循环阈值与PCR起始模板量对数之间存在良好的线性关系。与DAS-ELISA相比,该方法具有高效、灵敏、特异性强等优点,为从分子生物学水平上检测烟草中PVY提供了新的技术手段。

一株对TMV具有显著拮抗活性的恶臭假单胞菌的筛选与鉴定

由烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)引起的烟草病毒病是我国烟草上主要的病害之一,是影响我国烟草产量和质量的主要制约因素.本研究从TMV重病区中未发病的K326烟株根际土壤中筛选出对TMV具有高度拮抗活性菌株A3,用半叶法接种,对TMV的抑制效果可达95%以上.利用革兰染色及其一系列生理生化试验,结合该菌株的16S rDNA序列测定,对该菌株进行了鉴定.试验结果表明,菌株A3的革兰染色为阴性,专性需氧型,能以柠檬酸盐作为碳素的营养来源,可以将硝酸盐还原成亚硝酸盐,具有过氧化氢酶活力,但不能分解明胶、淀粉等大分子物质;在平板培养基上形成的菌落约3 mm,边缘整齐,湿润光滑,扁平突起,黏稠,呈淡红色;其16S rD-NA序列与GenBank数据库中假单胞菌属的细菌菌株的16S rDNA序列有98%～99%的高度相似性.结合其生理生化特性鉴定以及16S rDNA序列分析鉴定的结果,判定菌株A3为恶臭假单胞菌Pseudomonas putida,并对其生产可用性进行了讨论.

5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油防治烟田烟青虫药液最佳使用方案研究

为确定烟田采用5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油喷雾防治烟青虫时的最佳药液配制方案,本研究采用正交试验方法研究了稀释倍数、施药液量和添加Silwet喷雾助剂对烟田喷雾防治烟青虫的影响,以药液在烟田的沉积率和对烟青虫的防治效果为评价指标,结合单因素的极差分析结果,获得5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油在烟田喷雾时的最佳配制施药方法。结果表明:在使用3WBJ-16DZ静电喷雾器喷洒5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油防治烟青虫时,药剂稀释1 000倍(有效成分含量50mg/L)、施药液量15L/667m2、添加Silwet喷雾制剂30mL/667m2,药液在烟草植株上的沉积率高达63.76%,7d对烟青虫防治效果达到95.84%,显著好于农户采用的稀释2 500倍(有效成分20.00mg/L)、施药液量50L/667m2的防治效果(76.50%)。本文丰富了烟田喷雾时药液配制方面的参数筛选内容,为农药合理使用提供了有力的技术支持。

恶臭假单胞菌发酵条件的研究

从未发病的K326烟株根际土壤中筛选出对TMV具有高度拮抗活性菌株A3，发酵液的抑制效果可达95％以上，为此，从碳源、氮源、pH、温度、通气量及发酵时间等方面对该菌株的摇瓶发酵条件进行研究。结果表明，A3菌株发酵适宜温度为28℃，在该温度下发酵60～70h达到菌体最大数量，且抑菌效价最高；以葡萄糖为适宜的碳源可以更好的促进菌量的生长和抗病毒物质的分泌，有机氮中酵母膏或蛋白胨对菌株的生长和抗病毒活性成分生成均能达到理想的效果，鱼粉则不能被A3菌株很好的利用；pH7是菌株最适宜的发酵范围，偏酸不利于菌株的生长；适当加大通气量能更好地促进A3菌株的繁殖及抗病毒物质的分泌。