纳米脂质体槲皮素对肝癌腹水抑制效应实验研究

背景与目的:槲皮素是一种具有多种生物活性、潜在的化疗药物,但由于不溶于水限制了其临床运用。本研究探讨用纳米脂质体包裹的槲皮素在小鼠体内分布及对肝细胞癌腹水生成的影响。方法:用旋转蒸发法制备纳米脂质体槲皮素,于BALB/c小鼠右前腋下接种肝癌细胞H2212天后,每只小鼠静脉给纳米脂质体槲皮素1.5mg,采用高压液相色谱法(highpressureliquidchromatography,HPLC)测定不同时间点血浆、正常组织和肿瘤组织中槲皮素含量。观察不同浓度的纳米脂质体槲皮素对腹水生成的抑制作用。100mg/kg纳米脂质体槲皮素处理肝癌腹水小鼠模型,观察小鼠存活期、体重及腹腔渗透性变化,流式细胞仪分析腹水中凋亡细胞比例。结果:纳米脂质体槲皮素粒径为(130±20)nm,含药量为25%(重量比)。纳米脂质体槲皮素能有效聚集在肿瘤组织,在BALB/c小鼠体内半衰期为4h。纳米脂质体槲皮素在体内抑制腹水形成与药物浓度有关。100mg/kg的纳米脂质体槲皮素可延长肝癌小鼠的存活时间,减少腹膜的通透性,增加腹水内凋亡细胞比例。结论:纳米脂质体槲皮素能有效积聚在肿瘤组织中并抑制癌性腹水生成,是一种有希望的抗肿瘤药物,值得进一步研究。

肺部肿瘤的精确放射治疗研究进展

目前肺部肿瘤的放射治疗已进入精确放疗时代。实施精确放疗的具体方法主要包括:调强放疗(intensity modulated radiotherapy,IMRT)、图像引导放射治疗(image-guided radiotherapy,IGRT)和体部立体定向放射治疗(stereotactic body radiotherapy,SBRT)。在实施精确放疗过程中,对于以下问题:患者体位固定、肺部肿瘤运动的控制、影像技术的使用、PTV边界、剂量的处方和报道、射野的安排、剂量体积的控制和治疗的实施等,应给予充分的考虑和注意,以确保精确放疗能够精确执行。

白介素-6对体外培养的黑素细胞影响的实验研究

目的建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,研究白介素-6(Interleukin-6I,L-6)对体外培养的黑素细胞的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定白介素-6对黑素细胞活力的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果白介素-6对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论白介素-6对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用白介素-6治疗色素性疾病提供了实验依据。

儿童口腔正畸治疗的Cochrane系统评价证据

目的评价目前儿童口腔正畸治疗的Cochrane系统评价证据和纳入系统评价的随机对照试验(RCT)/半随机对照试验(qRCT)的方法学质量。方法检索2008年第4期Cochrane Library数据库中有关儿童口腔正畸治疗的系统评价。结果检索到儿童前牙开的正畸和矫形治疗、阻鼾器和功能矫治器治疗儿童阻塞性睡眠呼吸暂停综合征效果、儿童上牙前突正畸治疗和儿童上前牙内倾性深覆正畸治疗的4篇系统评价,共纳入12个RCT。依照Cochrane Handbook for Systematic Reviews of Interventions5.0.0版推荐的质量评价方法得出,仅2个RCT为A级,1个RCT为B级,其余9个RCT均为C级。结论Cochrane系统评价是公认的最高质量的研究证据,但目前尚缺少足够强度的RCT证据来支持儿童正畸和矫形治疗疗效的系统评价。建议推行临床试验透明化,实施临床试验注册制度和按照RCT报告的统一标准声明来严格规范RCT的报告。

猕猴发育过程中肠肝组织生长抑素及其受体表达演变规律

探讨在猕猴发育过程中生长抑素(somatostatin,SST)及其受体在肠肝组织的演变规律。通过手术途径获得胚胎6月、新生2 d、新生45 d和成年猕猴的回肠、肝脏、门静脉和外周血等标本。应用放射免疫分析法测定各标本中的SST含量; 通过免疫组化方法观察SST在肠、肝组织内的分布;利用原位杂交检测SST受体2(somatostatin receptor 2,SSTR2)的表达。结果显示:(1)胚胎6月的猕猴,小肠内SST含量为(27．3±16．6)ng／mg蛋白;黏膜隐窝处SST呈弱阳性染色,肌层 SST染色阴性。在发育过程中,小肠内SST含量逐渐增加,成年期时达最高水平(120．1±35．3)ng／mg蛋白,较胚胎6月显著增加(P<0．01)。(2)成年小肠黏膜隐窝处及肌间神经丛SST呈强阳性染色。(3)胚胎6月,小肠粘膜上皮可见大量SSTR2 表达,成年时SSTR2表达下调,且主要定位于腺上皮隐窝处;胚胎及新生期肌层SSTR2染色阴性,成年时小肠肌间神经丛则可见阳性SSTR2染色。(4)肝脏在发育过程中SST及SSTR2含量逐渐降低;发育的各个时期,小肠组织的SST含量均明显高于肝脏组织含量,门静脉SST水平也始终高于外周血。总之,位于小肠黏膜隐窝处的SST和SSTR2随着发育逐渐增加,来自肠道的SST进入门静脉后迅速被降解。SST阳性的肠肌间神经丛仅在发育成熟后才出现。

严重寡精症ICSI精子供体的DAZ基因拷贝缺失研究

DAZ基因拷贝缺失与人类的生精障碍有关。为了解中国正常生精男性和ICSI中严重寡精症精子供体DAZ基因拷贝缺失的分布,探讨DAZ基因拷贝数检测在严重生精障碍精子供体遗传缺陷筛查中的意义,本研究运用多重PCR和PCR-RFLP技术,对128例严重寡精症ICSI精子供体和287个正常生精男性的DAZ基因缺失进行了研究。发现DAZ1/DAZ2、DAZ3/DAZ4和全部4个拷贝缺失等3种拷贝缺失类型,其中全部4个拷贝缺失仅见于严重寡精症患者,频率为11.7%;DAZ1/DAZ2缺失的频率在严重寡精症患者中显著高于正常男性(9.4%vs2.8%,P=0.004);在严重寡精症患者中DAZ基因拷贝完全缺失与DAZ1/DAZ2缺失的总发生率为21.1%。DAZ3/DAZ4缺失的频率在两组人群中无显著差异(7.0%vs3.8%,P>0.05)。这些结果提示,DAZ基因全部拷贝缺失是严重寡精症患者生精障碍的常见遗传病因,而DAZ1/DAZ2缺失则可能是一种高风险因素。鉴于上述DAZ基因缺失在严重生精障碍精子供体中较高的发生率,在应用ICSI进行辅助生育前,建议对严重寡精症的精子供体进行DAZ基因全缺失与DAZ1/DAZ2共缺失筛查,以评估其男性后代患病的风险。

微卫星不稳定在散发性Ⅱ、Ⅲ期直肠癌中的意义

目的探讨微卫星不稳定(MSI)状态与散发性Ⅱ、Ⅲ期直肠癌临床病理特征和预后的关系。方法选取128例散发性Ⅱ、Ⅲ期直肠癌患者的手术切除标本和相应的正常组织,采用Bethesda标记通过PCR扩增和变性凝胶电泳-银染法检测微卫星状态,分析其与临床病理特征和预后的关系。结果 12例肿瘤为高频率MSI(MSI-H),28例肿瘤为低频率MSI(MSI-L),其余88例肿瘤为微卫星稳定(MSS)。与MSI-L和MSS肿瘤相比,大多数MSI-H肿瘤患者为女性(P=0.031)、黏液腺癌(P=0.023)、高分级(P=0.002)和术前血癌胚抗原(CEA)水平高(P=0.005)。单因素分析显示年龄、肿瘤分期、组织学类型、分化程度和术前血CEA水平为总体生存的影响因素。多因素分析显示性别、年龄、肿瘤分期、组织学类型和术前血CEA水平为术后总体生存的独立影响因素。MSI-H肿瘤患者预后好于MSI-L/MSS肿瘤患者,但差异无统计学意义(P=0.986)。将Ⅱ期和Ⅲ期直肠癌患者分开分析,也未见MSI-H肿瘤患者预后明显优于MSI-L/MSS肿瘤(P=0.705和P=0.664)。结论散发性Ⅱ、Ⅲ期直肠癌患者,具有较高的MSI-H发生率,MSI不是一个预后因素,肿瘤分期比MSI状态更适合用于预测该类患者的预后。

生长抑素对猕猴肠缺血再灌注后回肠黏膜IFN-γ的影响

探讨生长抑素(somatostatin,SST)对肠缺血再灌注(intestinal ischemia reperfusion injury,IIR)后回肠黏膜IFN-γ产生及IIR免疫炎症损伤的影响。取15只健康猕猴分为正常对照、IIR、SST+IIR三组(n=5),ELISA检测回肠组织、肠上皮细胞、肠淋巴细胞、肠淋巴细胞孵育上清液、外周血、门静脉血中IFN-γ的水平;免疫组化检测IFN-γ、CD4、CD8、CD57的分布,图像分析软件测定阳性面积及IOD值。发现,IIR后回肠黏膜上皮细胞、门静脉血内IFN-γ水平较正常组显著增加[分别为(30.7±20.1)pg/mg和(9.4±2.4)pg/mg总蛋白;(18.1±1.1)pg/ml和(8.7±1.3)pg/ml](P<0.05),而肠淋巴细胞及其上清液的IFN-γ水平较正常组明显降低[分别为(1.7±0.02)pg/mg和(11.1±4.0)pg/mg总蛋白;(2.2±0.3)pg/mg和(5.2±1.5)pg/mg](P<0.05);预防性给予SST后,与IIR组比较,回肠上皮细胞及门静脉血内IFN-γ的水平显著下降[分别为(13.6±4.9)pg/mg总蛋白,P=0.055;(8.9±2.5)pg/ml,P<0.05],肠淋巴细胞及其上清液的IFN-γ水平无明显变化。组织匀浆及外周血的IFN-γ水平在三组间无明显差别。CD4+细胞、CD57+细胞分布与IFN-γ无关,CD8+细胞分布与IFN-γ变化趋势相反。因之,SST负性调控IIR时回肠上皮细胞IFN-γ的产生,从而可能阻止多器官功能障碍的发生发展。

生长抑素对猕猴小肠黏膜浆细胞分泌IgA的影响

目的探讨肠缺血/再灌注(intestinal ischemia reperfu-sion,IIR)时生长抑素(somatostatin,SST)对猕猴小肠浆细胞产生IgA的影响。方法随机将15只猕猴平均分成正常组、IIR及IIR+SST3组。IIR组在失血20%基础上,夹闭肠系膜上动脉1h后恢复血液灌流。测定IIR24h后外周血及小肠黏膜内生长抑素浓度以及小肠组织内IgA、分泌片、浆细胞和肠腔分泌型IgA的水平。IIR+SST组在夹闭肠系膜上动脉前,持续静滴SST5μg.kg-1.h-1,IIR+SST组及正常组(假手术组)其余操作同IIR组。结果①IIR后,外周血及小肠黏膜SST明显减少,而在IIR+SST组明显回升(P<0.05)。②肠黏膜sIgA的水平在IIR组和IIR+SST组之间没有差异,都明显低于正常(P<0.05)。③IIR组黏膜固有层浆细胞较正常明显减少,伴黏膜固有层IgA的锐减(P<0.05),补充SST后浆细胞(P<0.05)和IgA都明显增加(P<0.01)。④黏膜下层浆细胞在IIR组和IIR+SST组都较正常组明显增多(P<0.05),而IgA在IIR后减少(P<0.05),补充SST后明显回升(P<0.01)。结论IIR时,机体内源性SST水平降低,肠道血清型IgA和sIgA均严重匮乏,获得性体液免疫严重受抑;SST可促进IIR时猕猴肠黏膜浆细胞分泌IgA。

猕猴发育过程中肠肝组织血管活性肠肽及其受体的变化

本文旨在探讨猕猴发育过程中血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptide,VIP)及其受体在肠肝组织的变化。通过手术途径获得胚胎6月、新生2 d、新生45 d和成年猕猴的回肠、肝脏、门静脉和外周血等标本,应用放射免疫分析法测定各标本中的VIP含量;通过免疫组化方法观察VIP在肠、肝组织内的分布;利用原位杂交法检测VIP受体1(VIP receptor 1,VIPR1)的表达。结果显示:(1)胚胎6月的猕猴小肠VIP含量为(20．7±14．3)ng／mg蛋白;小肠绒毛根部及黏膜下层可见少量的VIP阳性染色颗粒;在发育过程中,小肠VIP含量逐渐增加,成年期时达(514．8±49．2)ng／mg蛋白,较胚胎6月显著增加(P<0．01)。(2)成年猕猴小肠VIP主要分布于绒毛隐窝部、黏膜下层神经及环、纵行肌间神经丛及环行肌,在发育过程中相应部位的VIPR1表达逐渐上调。(3)肝脏在发育过程中VIP及VIPR1含量逐渐降低。(4)发育的各个时期,小肠组织的VIP含量均明显高于肝脏组织,门静脉VIP水平也始终高于外周血。结果提示,小肠绒毛隐窝部、黏膜下层神经及环、纵行肌间神经内VIP及VIPR1含量足在出生以后才迅速增加的;不论是在胚胎还是成年期,VIP均不在肝中代谢和分解,VIPR1仅见于胚胎肝脏血管。

肿瘤坏死因子-α对人表皮黑素细胞增殖及黑素合成的影响研究

目的建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度肿瘤坏死因子-α对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度肿瘤坏死因子-α对黑素细胞增值的影响,NaOH裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果肿瘤坏死因子-α对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论肿瘤坏死因子-α对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用肿瘤坏死因子-α治疗色素性疾病提供了实验依据。

白介素-8对体外培养黑素细胞的影响

目的:建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度白介素-8对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度白介素-8对黑素细胞增值的影响,NaOH裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果:白介素-8对黑素细胞活力有增强作用,能使细胞增殖能力增加,黑素合成增加,但对黑素细胞的凋亡率无显著性影响。结论:白介素-8对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有增强作用。

白细胞介素4对体外培养人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐比色(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定不同浓度IL-4对黑素细胞增殖的影响,氢氧压钠(NaOH)裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果 IL-4对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论 IL-4对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用IL-4治疗色素性疾病提供了实验依据。

白介素-1对培养人表皮黑素细胞增殖及黑素合成的影响研究

目的:建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度的白介素-1α,白介素-1β对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定白介素-1α及白介素-1β对黑素细胞增值的影响,NaOH裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果:白介素-1α及白介素-1β对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论:白介素-1α及白介素-1β对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用白介素-1α及白介素-1β治疗色素性疾病提供了实验依据。

水疱口炎病毒诱导人鼻咽癌凋亡的体内实验

目的:建立人HNE-1细胞株鼻咽癌的BALB/c裸鼠肿瘤模型,观察水疱口炎病毒(VSV)有无诱导鼻咽癌凋亡作用。方法:收集体外培养的人鼻咽癌HNE-1细胞,将HNE-1细胞接种到小鼠右侧后背部皮下,每只接种6×106个细胞(0.1ml)。建立人HNE-1鼻咽癌BALB/c裸鼠肿瘤模型,予以VSV 1×1011pfu/L(plaque forming unit,pfu,噬斑形成单位)治疗和盐水对照组,Hoechst 33258染色荧光显微镜检测小鼠肿瘤病理切片中肿瘤细胞凋亡情况。结果:人HNE-1鼻咽癌BALB/c裸鼠肿瘤模型予以VSV治疗和不治疗相比较,治疗组小鼠的残存肿瘤中凋亡细胞明显增多。结论:通过人HNE-1鼻咽癌BALB/c裸鼠肿瘤模型的体内实验结果表明,VSV治疗能诱导人鼻咽癌HNE-1肿瘤细胞凋亡。

双功能VEGF受体融合蛋白突变体的生物学活性研究

为了研制出能同时阻断肿瘤血管与淋巴管生成的抗肿瘤制剂,我们设计构建了同时包含VEGFR1和VEGFR3功能域的基因工程双功能融合受体(VEGFRIg)。为了改善VEGFRIg的血浆半衰期以增强其抗肿瘤疗效,我们选择VEGFRIg的3个碱性氨基酸进行突变诱导获得了双功能受体的突变体VEGFRIgm。研究结果表明,VEGFRIgm具有与VEGFRIg相似的与VEGF-A和VEGF-C结合的能力,能有效地抑制VEGF-A诱导的人脐静脉内皮细胞增殖及VEGF-C诱导的人皮肤淋巴内皮细胞增殖。进一步研究表明,VEGFRIgm在小鼠体内的半衰期比VEGFRIg显著延长,提示其可能发展成为一个新型的高效抗肿瘤药物。

弥猴肠缺血再灌注后生长抑素含量与中性粒细胞寿命的相关性探讨

目的探讨多器官功能障碍综合征时中性粒细胞凋亡延迟的潜在原因,以增加对全身炎症反应内源性保护机制的认识。方法对照组、实验组各5只弥猴用放射免疫分析法测定其外周血、肠黏膜生长抑素浓度;生长抑素与猕猴外周血中性粒细胞共同孵育后,观察猕猴外周血中性粒细胞的形态变化,流式细胞仪测定细胞凋亡率,电泳分析中性粒细胞DNA断裂片段,生物分子相互作用系统检测中性粒细胞上生长抑素受体(SSTR-1、SSTR-2)。结果猕猴肠缺血再灌注后,猕猴外周血及小肠黏膜中生长抑素含量均明显下降;中性粒细胞凋亡率由阻断前的15.4%±1.4%,显著降低至3.5%±0.5%(P<0.05);腹腔巨噬细胞凋亡率由阻断前的14.1%±1.7%增加至20.2%±1.8%(P<0.05);体外实验表明,生长抑素可使中性粒细胞体积缩小,细胞质密度增加,染色质固缩,细胞核变小;中性粒细胞凋亡率(50.2%±1.8%)明显高于对照组(20.0%±2.2%,P<0.01);中性粒细胞的DNA片段断裂分析电泳可见Ladder带。中性粒细胞上生长抑素受体能与生长抑素受体SSTR-1抗体、SSTR-2抗体发生结合反应,其特异结合量分别为(548±20)RU/m l及(28±21)RU/m l。结论生理状态下,生长抑素通过猕猴外周血中性粒细胞上生长抑素受体介导,诱导其凋亡;肠缺血再灌注后猕猴外周血及小肠黏膜中生长抑素含量明显下降,这使中性粒细胞凋亡延迟,从而推动了全身炎症反应综合征和多器官功能障碍综合征的发生。

伊曲康唑胶囊微丸在蒸馏水、牛奶、可乐中溶出度分析

目的临床上发现用可乐或牛奶送服伊曲康唑胶囊可提高其生物利用度和治疗效果,本研究旨在比较伊曲康唑胶囊微丸在蒸馏水、牛奶(全脂、低脂以及脱脂牛奶,伊利乳业)和可乐(可口可乐)中的溶出度。方法进行伊曲康唑微丸溶出度试验,采用液相色谱-串联质谱法对伊曲康唑微丸在溶出度试验中不同阶段的溶出浓度进行检测。结果自然pH的蒸馏水、牛奶、可乐中,伊曲康唑溶出度:可乐>牛奶>蒸馏水。从溶解平均最高浓度来看,可乐溶解伊曲康唑的能力约是牛奶的2.36~3.19倍,是蒸馏水的10.37倍。在蛋白质含量相同的情况下,全脂牛奶(脂肪6%)在牛奶中溶出能力最强。结论推荐临床上使用可乐或者全脂牛奶送服伊曲康唑胶囊,可增加药物溶出度,促进胃肠道吸收。

水疱口炎病毒诱导人类鼻咽癌凋亡和抗肿瘤作用的体外研究

目的:通过体外培养,探讨水疱口炎病毒(VSV)对人类鼻咽癌HNE-1细胞株的抗肿瘤作用和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法:体外培养HNE-1细胞,实验组分别给予浓度梯度不同的VSV(以感染复数moi为单位),即0.1moi、1.0moi、10.0moi、100.0moi组和空白对照组。分别在24h和48h于倒置显微镜下观察各组肿瘤细胞出现的细胞病变,MTT实验分析VSV处理导致的肿瘤细胞杀伤作用,HO33258染色荧光显微镜检测VSV诱导体外培养的肿瘤细胞凋亡。结果:不同浓度的VSV实验组与空白对照比较,实验组肿瘤细胞出现了细胞病变,MTT实验证实VSV杀伤肿瘤细胞的作用随VSV感染复数增加、作用时间延长而增强。HO 33258染色荧光显微镜检测发现VSV能诱导体外培养的肿瘤细胞凋亡,并且凋亡率随VSV的增加而增加。结论:体外实验的结果表明VSV具有杀伤肿瘤细胞的能力,能够一定程度地诱导人鼻咽癌HNE-1细胞凋亡。

人T细胞因子4外显子3～9突变在微卫星不稳定性直肠癌中的意义

目的 探讨人T细胞因子4（hTCF-4）外显子3～9突变在微卫星不稳定散发性直肠癌中的意义.方法 对102例散发性直肠癌患者进行微卫星标记遗传筛选.11例证实为高频率微卫星不稳定.对这11例以及来源于不同样本的微卫星稳定和正常组织病例各5例进行hTCF-4基因外显子3～9编码区测序分析.结果 研究揭示几个新的突变和序列变异体.在外显子4,一个为导致氨基酸由Q131T改变为S132I的一个四位连续变化（391insA、392G＞A、393A＞G and 395delC）,另一个为核苷酸缺失（395delC）,这些改变分别存在于不同的高频率微卫星不稳定病例（5/10,50%和4/10,40%）,而对照组缺乏.结论 这些突变与高频率微卫星不稳定性散发性直肠癌患者高度相关.