应用定点突变技术进行流感病毒NS1蛋白功能的研究

目的流感病毒NS1基因敲除毒株(delNS1毒株)的获得可以使我们建立更有效的生物学关系,主要表现在流感病毒繁殖周期和致病的过程中,流感病毒NS1蛋白和双链RNA活性蛋白激酶(PKR)之间的生物学关系.资料表明,缺少功能性的PKR可以使delNS1毒株在其他非允许宿主中繁殖,这表明流感病毒NS1蛋白的主要功能是对抗或阻止PKR调解抗病毒效应.因此,本实验为了证明流感病毒NS1蛋白对其复制和毒力的影响.方法应用定点突变技术进行流感病毒NS1基因的第38位和第41位氨基酸残基位点的定点突变;然后进行细胞转染包装成新的缺陷病毒;再对其进行转染后产量的测定,如TCID50和PFU.结果包装成的缺陷病毒与包装成的非缺陷病毒相比,缺陷病毒的TCID50和PFU明显下降.结论本实验证明了流感病毒NS1蛋白在流感病毒复制过程中,使其产量和毒力下降.

优化的套式核酸体外扩增方法用于甲型流感病毒快速诊断的研究

目的临床上对流感的有效控制与治疗在于实验室快速与准确的诊断,这对于指导用药和避免滥用抗生素具有重要意义。RT_PCR在流感病毒检测中特异性和灵敏度较强,nestedmultiplexRT_PCR法可以在此基础上提高灵敏度。实验的目的是应用分子生物学方法对流感病毒进行快速诊断。方法我们结合流感病毒M基因、NS基因、HA基因的结构和进化特性设计多元引物达到流感病毒的型和亚型准确与快速的鉴定。结果甲型流感病毒以M基因保守区域设计引物,PCR后电泳带为413bp;甲型流感病毒以HA基因分亚型,H1N1亚型PCR后电泳带为348bp,H3N2亚型PCR后电泳带为291bp,H5N1亚型PCR后电泳带为326bp。结论应用优化的套式核酸体外扩增方法进行流感病毒的型与亚型的诊断是比较快速的,且所需要的病毒量少(0.01～0.1TCID50),灵敏度较高。

疯牛病感染因子的检测

研究目的是对北京某公司研制的一种牛血源性生物制品进行疯牛病感染因子的检测。通过对供体牛及其产地牛进行疯牛病流行病学调查及免疫细胞化学、Westernblot和组织病理学检测,确认这些供体牛没有感染疯牛病,以其血液作为原料研制的生物制品没有携带疯牛病病原的危险,本研究也为在我国进一步建立牛源性药品、生物制品中疯牛病感染因子的检测和评估提供了科学资料。

肺结核与结核性脑膜炎病例中结核分枝杆菌耐利福平相关基因突变分布分析

目的分析结核性脑膜炎与肺结核病例中,导致结核分枝杆菌利福平耐药的rpoB基因突变分布规律及差异。方法对包含利福平耐药决定区81bp的102株结核分枝杆菌临床分离株的PCR产物进行测序分析。结果 102株利福平耐药的结核分枝杆菌的rpoB基因测序发现,63株导致肺结核的结核分枝杆菌的rpoB基因突变常见位点为:531(53.97%),526(20.63%),516(6.45%)。39株导致结核性脑脑膜炎的rpoB基因突变最常见位点为:531(61.54%),526(20.51%),533(7.69%)。结论导致结核性脑膜炎与导致肺结核的结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因的最常见两个突变位点(531和526)无显著差异。其中531位密码子的Ser-Leu突变率占明显优势。

2011年苏州地区诺如病毒GⅡ组变异株的分子特征研究

目的了解苏州地区诺如病毒的感染状况及其变异株的分子特征。方法收集苏州市儿童医院疑似病毒性腹泻粪便标本419例，采用荧光定量PCR方法检测粪便中诺如病毒RNA及其基因组别，并对部分阳性标本测序分析。结果419份粪便标本中，GⅡ组诺如病毒为122例，阳性率为29％，未检测出GI组诺如病毒，对本地区部分诺如病毒阳性标本进行测序，A区（RdRp区）测序的25份GII标本中25株均为G11．4型；C区（N-s区）测序的26份G11标本中17株为GII．4型，8株为GⅡ．3型，1株为G11．2型；D区（P区）测序的25份GII标本中16株为G1I．4型，9株为GⅡ．3型。结论诺如病毒是本地区婴幼儿病毒性腹泻的重要病原体，以诺如病毒GII．4-2006b亚型为主，此外发现有Gtl．4-2010亚型（GII．4NewOrleans株）的流行，这是国内首次对该亚型毒株进行报道，同时还检测到部分重组毒株，提示诺如病毒在本地区的遗传变异日趋复杂。

南京地区腹泻婴幼儿新型诺如病毒GII.17变异株的检出及基因分析

目的了解南京地区腹泻婴幼儿新型GII.17诺如病毒变异株的检出及其基因特征,为疾病预防控制及疫苗研制提供切实有力的科学依据。方法收集2015年1-6月南京市妇幼保健院疑似病毒性腹泻粪便标本178份,采用荧光定量PCR方法对标本进行诺如病毒检测并对阳性标本进行基因分析。结果 178份粪便标本中,检出GII型诺如病毒27份,阳性率为15.2%,未检测出GI型诺如病毒,对该地区诺如病毒阳性标本进行衣壳蛋白区测序,发现27份GII标本中14株为新型GII.17变异株,8株为GII.3型,5株为GII.4-Sydney型;对其中5株GII.17变异株进行完整的衣壳蛋白VP1测序,发现其VP1区部分氨基酸已经出现了突变,而有些氨基酸位点的突变是与病毒抗原性及人群易感性密切相关。结论新型GII.17诺如病毒变异株在南京地区患病毒性腹泻的婴幼儿中检出,且检出率高于其他诺如病毒株,表明其可能已成为本地区新的诺如病毒流行变异株,考虑到其已在国内引起暴发流行,提示该毒株将会是本地区在今后重点预防控制监测的诺如病毒株。