食管癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及机制研究

目的探讨食管癌KYSE410细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制。方法超速离心法分离食管癌KYSE410细胞培养上清中的外泌体;采用透射电镜及Western blotting观察所获得的外泌体的形态及其标志物;共聚焦显微镜观察KYSE410、KYSE510和YES2细胞摄取荧光染料标记的KYSE410外泌体;采用Transwell小室实验分析3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力以及KYSE410外泌体对3种食管癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blotting检测Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化。结果透射电镜下观察KYSE410外泌体具有膜结构,直径分布在30~100nm;3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力从大到小依次为KYSE410、KYSE510、YES2;KYSE410外泌体能够促进KYSE410、KYSE510、YES2细胞迁移及侵袭能力并增强3种食管癌细胞中β-catenin和p-Akt的表达。结论来源于高迁移及侵袭能力的食管癌KYSE410细胞的外泌体能够促进自身和低迁移及侵袭能力的食管癌KYSE510、YES2细胞的迁移和侵袭,并且可能通过激活Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路发挥上述作用。

慢性压力通过激素及炎症影响肿瘤发展及预后

压力作为现代文明生活要素之一影响着我们的生活和健康。恶性肿瘤患者不仅承受着多种生活因素、社会因素带来的压力,而且长期处于与疾病诊断、治疗以及进展有关的慢性压力之下。在日益追求精准治疗的今天,关注患者心理健康问题也至关重要。文章从慢性压力对机体造成的最直接的影响—压力相关激素的产生入手,进而从两方面对慢性压力与肿瘤的相关性进行阐述:一方面,压力相关激素可以通过影响肿瘤细胞的增殖以及肿瘤进展有关基因的表达对肿瘤发挥直接作用;另一方面,压力相关激素可以通过影响炎症微环境对肿瘤发挥间接作用。以期根据肿瘤患者心理压力情况制定个性化的治疗方案,从而达到更好的抗癌治疗效果。

缺氧相关的miRNA-210在肿瘤中的研究进展

肿瘤组织失控性增殖及其内部新生血管网的相对不足导致氧气供应不足,低氧是肿瘤微环境的重要特征,低氧环境可激活肿瘤细胞中低氧诱导因子(hypoxia-inducible factors,HIFs)的表达并诱导一系列miRNAs(micro RNAs,miRs)含量发生变化。miRNA是一种小的、非编码RNA,可和m RNA3’端非编码区结合,在转录后水平调节基因的表达,miR-210作为最主要的HIFs诱导表达的miRNA,参与肿瘤细胞多种生命活动,如肿瘤细胞线粒体代谢、血管形成、细胞周期调节、DNA断裂修复等;miR-210在大部分肿瘤患者的血清及肿瘤组织中高表达,且miR-210的表达水平与不良预后呈正相关,故miR-210可用于肿瘤的筛查、诊断和预测患者预后;随着对miR-210下游靶基因的深入研究,针对miR-210细胞信号转导通路的靶向治疗可为恶性肿瘤的治疗提供更广阔的前景。

免疫检查点抑制剂:肿瘤免疫治疗的机遇与挑战

免疫系统是人体防御肿瘤发生的一道系统屏障,肿瘤细胞通过改变自身生物学特征逃避免疫监视或通过削弱机体的免疫监视能力实现自我生长。近年来,机体免疫因素在肿瘤发生与治疗中的作用越来越受到肿瘤研究领域的重视和关注,不但在科学性方面取得了新的认识成果,而且极大地推进了临床肿瘤免疫治疗的实践。从较早期的免疫因子治疗、免疫细胞治疗到已经成功进入临床实践的免疫检查点抑制疗法,代表着肿瘤免疫治疗研究发展的历程。

基于随机森林算法的宫颈癌淋巴结转移相关基因的生物信息学筛选

目的分析与淋巴结转移最相关的基因集和基因集中的关键节点性基因,为宫颈癌淋巴结转移预测潜在干预靶点。方法利用TCGA宫颈癌患者转录组数据集,使用随机森林算法对淋巴结转移最相关基因进行分析和排名,使用STRING和Cytospace对这些相关基因进行互作网络分析,筛选对其他基因具有最广泛相互作用的基因节点,使用DAVID对这些基因在整体上进行功能识别。结果获得淋巴结转移相关基因重要性排序(2784个),并获得其中的关键节点基因(前13位分别为EGFR,NOTCH1,RHOA),这些基因均与淋巴结转移显著相关(P<0.05)。与淋巴结转移最相关的基因主要聚集在趋化因子信号通路、MAPK通路、细胞间相互作用、黏着连接、细胞骨架调控、wnt通路等。对这些有意义的宫颈癌转移相关基因集在统计学上进行了验证,获得的关键节点基因如EGFR,NOTCH1,RHOA在临床水平均已发现与宫颈癌淋巴结转移显著相关。结论随机森林算法是一个有效的方法,采用此方法获得的宫颈癌转移相关的基因集有很大比例与淋巴结转移显著相关。

肿瘤基础研究对促进新时期癌症防治工作具有关键作用

癌症是全球范围内最主要的健康问题之一,在2020年导致全球近1000万人死亡,是人类第二大死亡原因。中国人口基数庞大,癌症整体新发病例数和死亡人数都显著高于其他国家,居于世界首位。因人口老龄化逐渐加剧和城乡卫生条件差异导致的总体早诊率偏低等因素影响,当前中国许多癌种的发病率仍在持续升高,癌症总体死亡率高于世界平均水平,癌症防控形势十分严峻。

中国胰腺癌多学科综合治疗模式专家共识(2020版)

胰腺癌的病因尚未完全明确,预防便尤为困难。辅助检测手段的灵敏度和特异度低,早诊是世界性难题,现有的治疗手段疗效不满意,且短期内难以突破,总的5年生存率仅7.2%。面对胰腺癌的现状,要加强基础研究、探究其病因和发病机制,去除病因、切断发生发展路径。研发高灵敏度、高特异度的外周血和尿液等检测技术以及影像诊断技术以提高早期诊断率和疗效,但基础和早期诊断技术的研究时间长、费用高,短期内难以见效。因此,急需解决的问题是通过规范的多学科综合治疗(MDT)、优化组合现有的诊疗方法,制定个性化的治疗方案,达到改善疗效的目的。本共识是在第1版的基础上,基于胰腺癌的诊治现状且短期内难以突破的窘境,参照国际、国内成功的诊治经验,结合中国国情、由国内业界众多知名专家参与,经反复推敲、讨论、几易其稿成文。本共识就MDT的意义和宗旨、主要任务、开展的必要客观条件、工作流程、注意事项、相关临床和基础研究、多中心MDT模式探索、eMDT模式探索等方面进行了详细论述,希望能为推动我国胰腺癌MDT的规范化开展、改善胰腺癌的疗效、总结成功经验、促进国际交流、加强人才培养和梯队建设有所裨益;为国家制定相关政策、推动全国MDT的开展有所帮助。本共识不仅仅适用于胰腺癌,也可供其他肿瘤借鉴。

长链非编码RNA结肠癌相关转录本2在胃癌血清中的表达及临床意义

目的:检测长链非编码RNA结肠癌相关转录本2(CCAT2)在胃癌患者和正常对照组血清中的差异表达,探讨其对胃癌临床诊断的效能及意义。方法:通过实时荧光定量PCR方法检测胃癌和正常对照组血清CCAT2的表达,分析其与胃癌临床病理特征的相关性;通过受试者工作特征(ROC)曲线和危险分数分析法评估CCAT2对胃癌的诊断效能,并与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原72-4(CA72-4)以及甲胎蛋白(AFP)的诊断效能进行比较。结果:胃癌患者血清中CCAT2的表达量明显高于正常对照组;其表达水平与年龄、性别、肿瘤临床分期、淋巴结转移以及肿瘤远处转移等均不相关,但与肿瘤细胞的分化程度呈负相关。CCAT2诊断胃癌的曲线下面积为0.619,敏感度和特异度分别为78.63%和53.00%,阳性预测值和阴性预测值分别为66.18%和67.95%。与CA19-9、CEA以及CA72-4相比,诊断的敏感度显著增高。结论:CCAT2在胃癌血清中高表达,有可能成为胃癌临床诊断的潜在生物标志物。

江苏省启东市HBV感染相关疾病的医疗费用及其影响因素分析

目的量化江苏省启东市HBV感染相关疾病的例均医疗费用,并分析其构成及影响因素。方法基于启东市人民医院与启东市传染病医院,采用时间阶段连续病例整群抽样法,选取2012年HBV感染相关原发性肝癌(n=217)、乙型肝炎肝硬化(n=234)、慢性乙型肝炎(CHB,n=136)住院患者,收集2010年1月-2012年12月住院及门诊费用合计(例均医疗费用)及相关基本和临床信息。采用专家咨询法,调查急性乙型肝炎、HBs Ag无症状携带者和HBV隐匿感染者的例均医疗费用。不同年份的费用采用2014年医疗保健消费价格指数进行转换。计量资料组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析,组内进一步两两比较采用SNK-q检验;采用多重线性回归分析(逐步回归法)进行例均医疗费用的影响因素探讨。结果 HBV感染相关原发性肝癌、乙型肝炎肝硬化、CHB患者2010-2012年的例均医疗费用分别为30 183元、22 066元和15 703元,住院费用分别为29 058元、21 383元和15 394元,占例均医疗费用的比例分别为96.3%、96.9%、98.0%;药品费用分别占例均住院费用的55.0%、73.4%和78.2%;3种疾病患者的住院次数(F值分别为89.1、67.7、11.5,P值均<0.001)、治疗方案(F=21.8、t=-2.1、t=-3.7,P值分别为<0.001、0.039、<0.001)、医保类型(t值分别为3.1、2.6、2.7,P值分别为0.002、0.011、0.012)是例均医疗费用的影响因素,临床分期仅为CHB患者例均医疗费用的影响因素(分为轻、中和重度,多因素分析:β=1.238,F=5.9,P=0.021)。急性乙型肝炎患者例均医疗费用为5950元,HBs Ag无症状携带者或HBV隐匿感染者的年均医疗费用为770~1540元。结论 HBV感染相关疾病的医疗费用随着病情加重逐步递增,该数据将为后期疫苗或筛查干预的经济学效果评价提供基线信息。

江苏省启东市HBV感染相关疾病住院患者的经济负担及对家庭经济的影响

目的分析江苏省启东市HBV感染相关疾病住院患者(包括原发性肝癌、乙型肝炎肝硬化和慢性乙型肝炎)的经济负担以及患病对家庭经济的影响。方法采用时间段连续病例整群随机抽样方法,抽取江苏省启东市(县级市)人民医院及启东市传染病医院2014年5月1日-2015年3月31日收治的HBV感染相关疾病住院患者,通过问卷调查收集其人口社会学信息、临床信息、近3年的直接医疗费用、直接非医疗费用、因患病所致的误工损失及患病对家庭经济的影响。采用Wilcoxon秩和检验或KruskalWallis H秩和检验分析疾病临床分期、年龄、性别、受教育程度、职业、医保类型、家庭收入等因素对经济负担的影响。通过χ~2检验或Fisher精确检验分析HBV感染后不同疾病类型住院患者家庭经济压力的差异。结果 HBV相关原发性肝癌、乙型肝炎肝硬化、慢性乙型肝炎住院患者近3年的经济负担总和分别为94 001元、63 421元和39 360元;其中直接医疗费用分别占84.7%、83.6%和89.9%;近1年的自付费用分别占家庭年收入的99.6%、59.4%和16.7%。3组患者自述经济压力很大比例之间比较,差异有统计学意义(38.7%vs 43.1%vs 11.3%,χ~2=30.066,P<0.001);3年内的3组患者误工经济损失比较,差异亦有统计学意义(7903元vs 6280元vs 2600元,χ~2=68.601,P<0.001)。结论 HBV感染相关疾病住院给家庭带来沉重的经济负担,HBV感染相关疾病住院患者的病程越长、病情越严重,疾病所带来的经济负担就越高。随着慢性乙型肝炎向乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌的进展,疾病给家庭带来的经济压力也在增加,患者本人及亲属因疾病产生的误工损失也越来越大。预防和控制HBV感染相关疾病具有较大的社会和经济效益。

食管癌淋巴结转移相关基因的转录水平筛选及网络分析

目的从转录组水平筛选食管癌淋巴结转移相关基因,为深入研究食管癌淋巴结转移提供线索。方法利用癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据资源,采用随机森林分类方法从转录水平分析、筛选食管癌淋巴结转移相关基因,并对其进行功能聚类。结果获得了与食管癌淋巴结转移相关基因的相关显著性排序,分析获得的重要相关基因集的功能主要集中在细胞代谢及DNA修复、转录等的调控上,并在其中获得了与食管癌淋巴结转移密切相关的代谢及DNA调控领域中的重要节点基因。结论 Heatmap图显示获得一簇明显的淋巴结转移相关基因,聚类分析显示这些基因主要集中在代谢和DNA调控等功能上,网络分析获得了KRAS、PPM1B、PPP3CA、ATR、WRN、TOP2B等与食管癌淋巴结转移相关的重要节点基因。

结直肠癌组织中KIAA1522的表达及临床意义

目的:检测KIAA1522蛋白在结直肠癌中的表达变化并评价其临床意义。方法:应用组织芯片-免疫组织化学染色技术,检测96例结直肠癌组织及其配对癌旁正常组织中KIAA1522蛋白的表达情况,并对其阳性表达率与结直肠癌临床病理指标及患者预后的关系进行统计学分析。结果:KIAA1522蛋白在癌旁正常结直肠上皮细胞中主要定位于细胞浆,阳性表达率为12.5%(12/96),而在结直肠癌组织中KIAA1522蛋白阳性表达率为81.3%(78/96),两者间差异显著(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,KIAA1522蛋白阳性表达与结直肠癌患者术后3年无瘤生存期短显著正相关(P=0.017,Log-rank检验)。多因素Cox回归分析结果表明,KIAA1522蛋白阳性表达是结直肠癌患者预后不良的独立预测因素(P=0.020)。卡方检验的分析结果显示,KIAA1522蛋白阳性表达与肿瘤的远处转移正相关(P=0.012,Fisher精确检验)。结论:KIAA1522在结直肠癌组织中的阳性表达与肿瘤的远处转移及患者术后生存期短显著相关,可能作为预测结直肠癌患者预后及转移的潜在分子标志。

食管癌中KIAA1522基因的转录本及蛋白表达分析

目的:检测食管鳞癌组织及细胞系中KIAA1522基因不同转录本的表达及丰度,确定其蛋白的表观分子量,为进一步研究KIAA1522在食管癌中的表达改变及功能提供实验依据。方法:使用反转录PCR(RT-PCR)及实时荧光定量PCR(qPCR)检测食管癌组织及细胞系中KIAA1522基因4个不同转录本的表达及丰度;以特异性si RNA敲降食管癌细胞中KIAA1522的表达,并在模式细胞中过表达KIAA1522,通过Western blot检测确定KIAA1522的表观分子量,并通过质谱分析验证KIAA1522条带的序列组成。结果:KIAA1522的转录本T1和T4在食管鳞癌组织及多个细胞系中均有表达,其中T1的表达丰度相对最高。Western blot检测中观察到的分子量为170 k Da的条带为KIAA1522基因特异性的蛋白表达产物,同时质谱分析结果也证实该条带为KIAA1522多肽。结论:T1为食管鳞癌组织及细胞系中KIAA1522基因的优势转录本,KIAA1522蛋白的表观分子量为170 kDa。

食管鳞癌组织的常见基因组DNA异常改变及其临床预后的相关性分析

目的:分析食管鳞癌组织的常见基因组DNA改变,以期获得可能用于该病诊断和预后判断的分子标志。方法:对112例食管鳞癌手术组织标本,提取基因组DNA采用聚合酶链式反应(PCR)和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测位于染色体3p和13q上的6个微卫星的杂合性丢失(LOH)情况,并与我们已报道的高频基因突变进行联合分析。结果:在被测的微卫星中,D3S1768的LOH频率最高,为48.9%;D3S2452的LOH最低,为28.8%。当与昕测突变联合分析时,发现一个较优的组合,包括D3S1768、D13S171、D13S1493、TP53和TTN,该组合中任意2个标志同时出现异常改变的频率为75.6%,远高于任何单一标志的改变频率。生存分析的结果显示,在本组病例中昕测微卫星LOH频率与患者生存率之间无统计学相关性,但PBRM1和SYNE2基因突变多存在于生存期较短的病例中。当将基因突变与淋巴结转移联合分析时,发现这两类指标同为阳性患者的总生存期显著短于仅有其一阳性或均为阴性的患者(P=0.027)。结论:食管鳞癌组织中存在较高频率的微卫星D3S1768杂合性丢失,包括TP53突变的标志物组合有助于提高检测食管鳞癌的敏感度,PBRM1、SYNE2基因突变联合淋巴结转移可作为食管鳞癌预后判断的指标。

Syntenin在非小细胞肺癌中的表达及其与患者总生存期的关系

目的:检测Syntenin在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的蛋白表达水平并探讨其临床意义。方法:采用组织芯片和免疫组织化学染色法,检测Syntenin在147例NSCLC及相应癌旁组织中的表达水平,并分析Syntenin的表达与NSCLC患者临床病理指标及预后的关系。结果:Syntenin在NSCLC组织中的阳性表达率(49.7%)显著高于癌旁组织(4.1%)(P<0.01)。Syntenin的表达与NSCLC的淋巴结转移、临床分期和病理类型显著相关(P值分别为0.039、0.038、0.024),与患者的性别和年龄无显著相关(P>0.05)。Kaplan-Meier分析表明,Syntenin的表达与NSCLC患者的总生存期显著相关(P=0.028)。结论:Syntenin在NSCLC组织中高表达,并且其高表达预示了患者的不良预后。

子宫内膜癌患者血清has-miR-141的表达及其临床意义

目的探讨人类微小RNA-141(has-miR-141)在子宫内膜癌患者血清中的表达及其临床意义。方法收集55例子宫内膜癌患者术前24 h内的血清标本,以同期收治的12例子宫肌瘤患者术前24 h内的血清和5例健康志愿者的血清作为对照组,应用实时荧光定量PCR技术检测子宫内膜癌患者和对照组血清中has-miR-141的表达水平,并分析has-miR-141表达水平与55例子宫内膜癌患者的临床病理危险因素的关系。结果子宫内膜癌患者的血清has-miR-141的表达水平(2.6295±2.038)高于对照组的(1.561±0.695),差异有统计学意义(P﹤0.05)。子宫内膜癌患者血清中has-miR-141表达与组织病理分型、淋巴结转移和临床分期诊断有关(P﹤0.05),非子宫内膜样癌、淋巴结转移、Ⅲ期+Ⅳ期患者has-miR-141的表达水平高于子宫内膜样癌、无淋巴结转移、Ⅰ期+Ⅱ期患者。不同组织病理分级、年龄、CA125值患者血清中has-miR-141的表达水平比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论子宫内膜癌患者血清中has-miR-141呈高表达水平,且与淋巴结转移、病理分型及临床分期有关。has-miR-141有可能成为一种诊断子宫内膜癌的新型标志物,同时有可能作为进展期子宫内膜癌的诊断依据,从而为子宫内膜癌的诊断及治疗提供有效帮助。

肿瘤免疫结构的研究进展及在子宫内膜癌中的应用价值

肿瘤微环境免疫状态是肿瘤生物学特征与机体免疫功能相互作用在肿瘤局部的综合体现,免疫结构是对肿瘤微环境免疫状态的多维度定量描述方式,近年来在多种肿瘤研究中取得了巨大进展。随着子宫内膜癌免疫特性研究深入及抗免疫检测点治疗在内膜癌中的临床应用进展,以CD3＋及CD8＋肿瘤浸润性T细胞为主要指标的子宫内膜癌免疫结构评估正日益凸显其临床价值,以期在指导精准选择个体化治疗方案及预测预后中发挥重要作用。

抗PD-1/PD-L1免疫治疗在子宫内膜癌中的研究和应用

靶定免疫检查点的治疗为恶性肿瘤尤其是晚期恶性肿瘤的治疗开辟了新领域,其中针对程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)的免疫治疗在包括子宫内膜癌在内的多种恶性肿瘤的治疗中展现出极大优势。本文针对PD-1/PD-L1的作用机制及抗PD-1/PD-L1免疫治疗在子宫内膜癌中的研究进展作一综述。

ANO1蛋白在食管鳞状细胞癌中表达的瘤内异质性

目的:探讨ANO1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中表达的瘤内异质性及与肿瘤临床病理学特征的关系。方法:采用组织微阵列免疫组化法检测122例食管鳞癌每例4个肿瘤取材区域及相应正常组织中ANO1蛋白的表达情况,比较每例肿瘤不同取材区域的表达差异,分析ANO1蛋白表达情况与患者临床病理学特征的相关性。结果:ANO1蛋白在所有正常组织中呈阴性表达,而在肿瘤组织的表达阳性率为53.3%(65/122)。统计学分析显示,ANO1蛋白的表达情况在有、无淋巴结转移之间及不同肿瘤临床分期之间存在显著性差异(P<0.05)。在阳性表达的病例中,绝大多数(55/65)肿瘤内显示不同程度的ANO1蛋白表达异质性,其中32.3%(21/65)的病例存在不同取材区域之间较大的异质性。结论:ANO1蛋白在正常组织中呈阴性表达,在食管鳞状细胞癌组织中呈部分阳性表达,与临床病理学参数存在显著相关性(P<0.05)。而且,食管鳞状细胞癌ANO1蛋白表达存在明显的瘤内异质性,多位点取材有助于提高ANO1表达的检出率并可减少漏检。

表达单纯疱疹病毒受体HVEM的黑色素瘤B16-ova-HVEM细胞系的构建及成瘤后oHSV2治疗效果初探

目的构建可被单纯疱疹病毒感染的新型细胞系B16-ova-HVEM,体外验证目的基因的表达并初步探究其成瘤后,应用Ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒(oHSV2)的治疗效果。方法构建表达单纯疱疹病毒受体(HVEM)的质粒载体,脂质体转染B16-ova细胞,嘌呤霉素筛选表达HVEM的阳性克隆。体外验证后进行体内检测,B16-ova-HVEM荷瘤C57BL/6小鼠,成瘤后分为两组,每组5只小鼠,给予oHSV2治疗为oHSV2治疗组,荷瘤未治疗的小鼠为对照组。治疗后测量肿瘤大小,观察小鼠生存期;流式细胞术检测两组小鼠外周血中CD4^+、CD8^+T细胞和髓系来源的抑制性细胞(MDSC)比例变化。结果质粒DNA测序和酶切鉴定结果均显示成功构建含HVEM的质粒;荧光显微镜下可观察到筛选后细胞发绿色荧光;流式细胞术检测筛选后细胞GFP阳性率为98.3%;RT-PCR验证结果显示筛选后细胞含有目的基因HVEM;oHSV2在感染复数(MOI)为0.1、0.5和1的情况下均能明显感染筛选出的细胞;动物实验显示,oHSV2体内治疗后抑瘤效果显著(P﹤0.001);流式检测结果显示oHSV2治疗后小鼠外周血中CD4^+、CD8^+T细胞比例明显高于对照组(P﹤0.01),而MDSC比例明显低于对照组(P﹤0.01)。结论成功构建B16-ova-HVEM细胞系,其既可被OT-1小鼠T细胞特异性识别又可被单纯疱疹病毒感染,为肿瘤特异性免疫治疗和溶瘤病毒联合治疗的研究奠定基础。