2株2023年禽源H7N9亚型禽流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析

为了解H7N9亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的遗传进化特点,探究我国H7N9亚型AIV的流行特征,试验对2023年采集自四川、河北两地活禽市场禽类咽拭子及泄殖腔拭子进行病原分离鉴定,并对分离株进行全基因组序列测定,进一步构建进化树并分析其遗传演化情况和分子特征。结果显示:共分离2株H7N9亚型AIV,其遗传距离较近,HA基因均属于YRD-B分支;2株AIV的HA蛋白裂解位点均含有连续碱性氨基酸,具有高致病性的分子特征;PB2、HA和NA蛋白均具有哺乳动物适应性突变,其中HA蛋白第226位受体结合位点均由谷氨酰胺(Q)突变为亮氨酸(L),使其能够识别人流感病毒唾液酸受体,并且HA蛋白A27S、I96V、V143T、A169T、I187V和D457N抗原位点发生突变;2株AIV虽均能与Re-4和H7N9rHN7903灭活疫苗免疫血清产生交叉血凝抑制反应,但HI抗体效价较低。研究表明,从活禽市场分离到2株H7N9亚型AIV,其对家禽具有高致病性,且抗原性发生变化。

基于RT-RAA的禽流感H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法的建立

采用逆转录-重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)和成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)检测系统,建立一种快速、高灵敏度和高特异性的禽流感病毒(AIV)H5亚型核酸检测新方法。通过分析342条禽流感病毒H5亚型的HA基因序列,选取保守性区域设计具有强特异性的CRISPR RNA(crRNA)序列以及RT-RAA引物,并对检测体系中的主要成分LwaCas13a蛋白、crRNA、TaqMan探针、T7 RNA Polymerase、NTP Buffer Mix含量进行优化,建立了基于RT-RAA的AIV H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法。取105~1 copies·μL^(-1)含有目的基因的质粒标准品和其他亚型禽流感病毒以及其他禽病病毒分别验证和评价该方法的灵敏性和特异性。结果表明,本文设计的RT-RAA引物与crRNA特异且灵敏,其最佳反应体系中主要成分用量分别为LwaCas13a蛋白(60μg·mL^(-1))2.0μL、crRNA(100μmol·L^(-1))3.2μL、TaqMan探针(50μmol·L^(-1))1.28μL、T7 RNA Polymerase 0.25μL、NTP Buffer Mix 2.0μL。该方法检测灵敏度可达1 copy·μL^(-1),且与AIV H3、H6、H7、H9、H10亚型以及NDV、IBV、IBDV、DTMUV无交叉反应。对56份已知的临床样品进行检测,检测结果与荧光定量RT-PCR符合率为98.2%。综上,本研究通过RT-RAA等温扩增技术结合CRISPR-Cas13a基因编辑技术建立了针对AIV H5亚型的快速检测平台,该方法从样本的核酸抽提到获得检测结果的时间控制在1 h 20 min以内,为AIV H5亚型高灵敏度和高特异性的临床快速检测提供了新的技术手段,具有良好的应用前景。

2023年我国禽流感等禽病流行情况与2024年预测分析

2023年我国家禽生产较为稳定,疫病控制总体良好。全球高致病性禽流感疫情持续威胁我国家禽业,对我国高致病性禽流感防控带来巨大压力,且在局部地区造成损失。本文将对我国2023年禽流感等重要家禽疫病发生情况简要回顾,对2024年禽病的流行趋势进行预测分析。

2022年我国禽流感等禽病流行情况与2023年预测分析

2022年我国家禽产业总体表现较好,多数养禽企业可实现盈利。受国际禽流感疫情影响,我国高致病性禽流感防控压力陡增,且在局部地区造成影响,对我国家禽生产造成了较大损失。本文将对我国2022年禽流感等重要家禽疫病发生情况进行简要回顾,对2023年禽病的流行趋势进行预测分析。

禽流感病毒H10N3亚型一步法双重RT-PCR检测方法的建立

2021年6月初,我国报道了全球首例H10N3亚型禽流感病毒感染人的事件,该亚型病毒具有跨宿主感染人类的能力,对社会公共卫生安全形成潜在的重大危害,因此,亟须建立一种快速、简便、适用于实验室的H10N3亚型禽流感病毒核酸检测方法。将自GISAID下载的H10N3亚型禽流感病毒HA基因和NA基因序列进行分析比对后,根据其保守区域设计并筛选出2对特异性检测引物,分别对引物浓度、核酸浓度、退火温度、循环数等进行优化,以确定最佳反应条件,建立禽流感病毒H10N3亚型一步法双重RT-PCR检测方法。结果显示,该方法可分别扩增出407 bp和602 bp禽流感病毒H10基因和N3基因的特异性条带,且不与H1N1、H3N2、H6N6、H7N9、H9N2亚型禽流感病毒以及NDV、IBV、IBDV、DTMUV发生交叉反应。该方法灵敏度高,最低检出限为900 pg。在对36份已知的临床样品的检测中,H10N3亚型禽流感病毒阳性率为2.78%,与禽流感H10Nx基因型、Hx N3基因型一步法RT-PCR检测方法以及病毒分离鉴定结果一致,符合率均为100%。上述结果表明,本研究建立的一步法双重RT-PCR方法可以在一次PCR反应中检出H10与N3亚型禽流感病毒混合感染或者单一感染样品,为兽医工作者开展H10N3、H10Nx和Hx N3亚型禽流感的临床诊断和流行病学监测提供了一种简单、有效的分子生物学快速检测方法。

2018年我国禽流感等主要禽病流行情况与2019年预测分析

2018年上半年国内禽肉及蛋价持续走高,养殖户利润可观,下半年商品肉鸡鸡苗和肉鸭鸭苗价格达到历史高峰,市场盈利逐步增大。本文将对我国2018年禽流感等重要家禽疫病发生情况进行简要回顾,对2019年这些禽病的流行趋势进行预测分析。

2019年我国禽流感等禽病流行情况与2020年预测分析

受非洲猪瘟疫情影响,生猪存栏量大幅下降,人们对禽肉、禽蛋的消费需求增加,2019年上半年禽肉及蛋价持续走高,养殖户利润可观,家禽存栏量增幅显著,部分养猪场也转型养殖肉鸡、肉鸭等家禽。家禽养殖量的增加一方面带来了市场风险,导致第四季度禽肉价格下滑,另一方面也为家禽疫病的防控带来了挑战。本文将对我国2019年禽流感等重要家禽疫病发生情况进行简要回顾,对2020年禽病的流行趋势进行预测分析。

2021年我国禽流感等禽病流行情况与2022年预测分析

受新冠肺炎疫情和家禽生产量增加的影响,2021年家禽价格仍保持低位运行,随着词料成本的大幅上涨,多数养禽企业呈现微利或亏损局面。在家禽疫病防控方面,高致病性禽流感仍然是养禽业的最大威胁,2021年H5N8、H5N6和H5N1高致病性禽流感对我国家禽生产造成较大损失。本文将对我国2021年禽流感等重要家禽疫病发生情况进行简要回顾,对2022年禽病的流行趋势进行预测分析。

当前H5N1禽流感疫情形势及对国内家禽产业的影响

近期欧美多个国家暴发H5N1亚型高致病性禽流感疫情,引起了广泛关注,对我国家禽业和公共卫生造成了较大威胁。为此,本文对当前H5N1禽流感疫情形势及对国内家禽产业的影响进行了总结分析。

2020年我国禽流感等禽病流行情况与2021年预测分析

受2019年养禽高收益和猪肉供给偏紧预期的影响,2020年养禽场户大量补栏,蛋鸡、肉鸡和水禽产能大幅增长,达到5年来的最高水平。由于新冠肺炎疫情造成消费不振,加上禽肉的增产量已大于对猪肉的替代需求量,家禽价格持续低迷,家禽养殖总体亏损。家禽生产量增加、养殖水平参差不齐和周边国家高致病性禽流感肆虐,使我国家禽防疫压力陡增。本文将对我国2020年禽流感等重要家禽疫病发生情况进行简要回顾,对2021年禽病的流行趋势进行预测分析。