北京某医院体检人群亚健康状况及其影响因素相关性研究

目的了解北京某医院体检人群亚健康状况及其影响因素。方法以在北京医院体检人群为对象开展问卷调查,内容包括基线调查问卷和亚健康评定量表(Sub-Health Measurement Scale,SHMS V1.0)。结果本研究最终纳入91例,总体亚健康发生率为69.23%,青年组和中年组心理亚健康发生率均明显高于老年组。青年组总体亚健康发生率明显高于老年组,差异有统计学意义(P<0.05)。对总体亚健康影响因素分析可知,各种相关因素中,记忆力减退、与亲属亲密程度较低、非外向性格、镍和铅的含量高均与亚健康发生具有相关性,健康组与亚健康组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究人群总体亚健康检出率偏高,应重视青、中年人群的心理亚健康问题,针对亚健康发生相关的因素进行干预,有助于提高居民健康水平。

脑衰老及其干预新策略

随着年龄的增长,脑器官逐渐展示出衰老的一些细胞和分子特征,导致脑功能逐渐下降,神经退行性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病发生的易感性升高。目前研究表明,应用一些干预新策略可以延缓脑衰老。该文主要了解和探究脑衰老有哪些细胞和分子特征,衰老如何诱发神经退行性疾病,以及延缓脑衰老的新策略。

巨噬细胞极化对动脉粥样硬化发生发展的影响

动脉粥样硬化的发生和发展主要由局部血管壁炎症和脂质积累引发。巨噬细胞在病灶演变中发挥着核心作用。在动脉粥样硬化病变中,巨噬细胞受到各种各样的微环境信号调节,如细胞因子、氧化脂质、亚铁血红素等,从而导致其表型极化。目前已证实巨噬细胞表型谱主要由T辅助细胞1(Th-1)细胞因子诱导的M1型和由Th-2细胞因子诱导的M2型为主,其中M2型又细分为M2a、M2b、M2c、M2d,此外尚有Mox型、M4型、M(Hb)和Mhem型。对巨噬细胞表型可塑性机制的研究成为制定抑制或稳定动脉粥样硬化斑块治疗策略的重要内容。近年来,社会心理因素在动脉粥样硬化发生发展中的作用已成为研究的热点。慢性心理应激时交感肾上腺髓质(SAM)系统和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的持续激活导致儿茶酚胺类激素和糖皮质激素分泌显著增加,它们对巨噬细胞表型可塑性的调节和功能后果产生重要影响。该文对动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞亚群的特征,及在多种组织中神经内分泌激素如儿茶酚胺类激素和糖皮质激素对巨噬细胞表型可塑性的影响进行综述。

棕榈酰化蛋白质组学分析揭示前列腺癌细胞中雄激素促进代谢相关蛋白棕榈酰化修饰

目的:筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白,探索前列腺癌去雄激素治疗外其他潜在的治疗靶点。方法:以LNCaP细胞为研究对象,雄激素(Methyltrienolone,R1881,5 nmol/L)或DMSO(dimethyl sulfoxide)处理LNCaP细胞24 h,同时利用人工合成的炔基棕榈酸Alk-C16(100μmol/L)对细胞进行代谢标记,收集细胞,裂解,提取总蛋白,加入标记有叠氮化物的琼脂糖珠(1 mmol/L),室温反应1 h,利用叠氮化物与Alk-C16末端炔基发生点击化学反应形成的共价键将棕榈酰化修饰蛋白富集在琼脂糖珠上,进行蛋白质谱非标记定量分析(label-free quantitation,LFQ),比较R1881处理和非处理细胞蛋白棕榈酰化修饰变化情况,筛选棕榈酰化修饰水平受雄激素诱导的蛋白。结果:实验共鉴定出907个潜在的棕榈酰化修饰蛋白(mascot score>2,P<0.05),其中有430个蛋白LFQ值至少有2次不为0。在这430个蛋白中有92个蛋白R1881处理与非处理样品LFQ比值大于1.5(P<0.05),说明雄激素能够显著促进该蛋白棕榈酰化修饰。利用Cytoscape软件对92个蛋白进行功能富集分类,发现已知功能蛋白可分为代谢相关、蛋白折叠相关和翻译起始相关3类,其中,代谢相关蛋白包括脂代谢(6个)、糖代谢(7个)和呼吸电子传递链(8个)3部分,另外还有少量氨基酸代谢(2个)和其他代谢相关蛋白(2个)。参与呼吸电子传递链的细胞色素b-c1复合体亚基2(cytochrome b-cl complex subunit2,UQCRC2)雄激素R1881处理和未处理样品LFQ比值最高(>3,P<0.05),说明该蛋白棕榈酰化修饰受雄激素诱导最为明显。LFQ比值最高为UQCRC2,其次为脂代谢相关的长链特异性酰基辅酶A脱氢酶(very long-chain specific acyl-CoA dehydrogenase,ACADVL)和糖代谢相关的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,PGD),但其LFQ比值均未超过3。结论:代谢尤其是呼吸电子传递链相关蛋白的棕榈酰化调控机制的研究可能将为前列腺癌的诊疗和靶向药的研发提供新的指导思路。

KIF5B过表达和干扰慢病毒载体的构建及对结直肠癌细胞增殖的影响

目的构建马达蛋白KIF5B基因重组慢病毒过表达和RNA干扰载体并进一步构建稳定转染结直肠癌细胞模型,检测敲低KIF5B蛋白对结直肠癌细胞增殖的影响。方法将PCR扩增的人KIF5B基因序列和设计合成的shRNA序列分别插入GV-358和GV-248表达载体。采用慢病毒三质粒包装系统共转染HEK293T细胞,进行病毒包装和扩增。重组慢病毒感染结直肠癌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot法检测KIF5B过表达和沉默效率。CCK-8检测KIF5B干扰后HCT116和SW480细胞的增殖,并检测细胞内周期相关蛋白的表达。结果KIF5B过表达及shRNA载体测序与原设计序列完全符合。重组病毒感染结直肠癌细胞中,可见绿色荧光蛋白表达。KIF5B过表达组细胞中KIF5B-FLAG蛋白大量表达,KIF5B沉默细胞中,KIF5B的蛋白表达量显著下降。KIF5B被敲低后,HCT116和SW480细胞增殖加快,细胞内p21、p16两种蛋白表达下调。结论成功建立了KIF5B过表达和沉默的结直肠癌细胞模型,并且发现KIF5B表达被干扰后,可能会抑制p21与p16蛋白的表达,加速细胞周期,从而促进结直肠癌细胞增殖。

WNT1诱导信号通路蛋白2对肝细胞脂质代谢的影响及其作用机制

目的探讨不同浓度人重组WNT1诱导信号通路蛋白2(WISP2)对人肝癌细胞(HepG2)脂质代谢的影响及相关作用机制。方法分别用不同浓度(0、0.4、1和2 μg/L)人重组WISP2作用于HepG2细胞48 h, Cell-Titer发光法测定细胞活力, 酶法检测各组HepG2细胞内三酰甘油(TG)及总胆固醇(TC)含量, 同时应用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及免疫印迹法(western blot)检测HepG2细胞内脂质合成、分解、转运相关基因mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较, 各浓度人重组WISP2处理组均未降低HepG2细胞的活性;人重组WISP2处理上调HepG2细胞TG、TC含量, 0.4、1、2 μg/L人重组WISP2处理组TG的含量分别为未处理组的1.254±0.039、1.216±0.028、1.174±0.014倍(F=6.791, P=0.006), TC含量分别为未处理组的1.264±0.057、1.394±0.101、1.392±0.077倍(F=7.045, P=0.005)。进一步研究发现, 与对照组比较, 加入人重组WISP2明显增加HepG2细胞脂质合成蛋白甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及二酰基甘油酰基转移酶(DGAT2)mRNA表达(均P<0.05), 显著上调SREBP1、ACC及脂肪酸合成酶(FAS)蛋白水平的表达(均P<0.05);但对低密度脂蛋白受体(LDLR)、载脂蛋白B(ApoB)、载脂蛋白E(ApoE)这类脂质转运蛋白及关键的脂质分解蛋白--脂肪三酰甘油脂肪酶(ATGL)的表达无明显影响。结论 rh-WISP2能显著增加肝细胞脂质含量, 促进脂质合成增加可能是其作用的关键机制。