重组流感血凝素三聚体蛋白疫苗的制备及免疫原性评价

目的制备重组流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)三聚体蛋白疫苗并进行相关表征分析,研究重组HA三聚体在小鼠模型中的免疫原性。方法构建稳定表达HA三聚体蛋白的CHO细胞株,通过Western blot、单向免疫扩散试验、蛋白质粒径检测和N-糖基化位点分析对重组蛋白进行定性及定量分析。根据剂量、佐剂等处理条件的不同将BALB/c小鼠分为11个组,并进行一致的免疫程序。初次免疫后56 d检测血清中和抗体效价,以评价免疫原性。结果构建的CHO细胞株能够分泌表达HA三聚体。HA三聚体具备生物学活性能够在单向琼脂免疫扩散试验中形成沉淀环,蛋白质粒径大小约为18.79 nm,具有10个N-糖基化位点,包括高甘露糖型、复合糖型和杂合糖型;HA三聚体重组蛋白疫苗在2次免疫小鼠后,3.75μg剂量配伍RFH01佐剂与对照组单价疫苗原液15μg引起的中和抗体效价差异无统计学意义(P=0.4312,U=36),配伍佐剂组免疫后血清抗体效价均高于未加佐剂组,其中15μg HA三聚体+RFH01组效价最高,为1280。结论成功制备了流感病毒重组HA三聚体蛋白,其与RFH01佐剂配伍能够诱导BALB/c小鼠产生针对流感病毒的体液免疫应答,为流感病毒重组亚单位疫苗的研发提供了参考。

不同层析介质纯化H5N1型流感病毒的研究

目的分别用新型复合层析介质Capto Core700和传统分子筛介质Sepharose 4FF纯化MDCK细胞制备的H5N1型流感病毒浓缩液,并比较分离纯化效果。方法用Capto Core700与Sepharose 4FF纯化灭活H5N1型流感病毒浓缩液,透射电镜分析不同样品中病毒颗粒的形态;分别用单向免疫扩散法(single radial immunodiffusion,SRID)、福林酚法(Lowry法)、双抗体夹心ELISA、qPCR检测不同层析介质纯化前后病毒血凝素含量、总蛋白质含量、宿主细胞蛋白质(host cell protein,HCP)含量和宿主细胞DNA(host cell DNA,HCD)含量,计算病毒抗原回收率和杂质去除率;用动物实验检测不同纯化病毒的免疫原性,并用t检验分析两种层析介质纯化效果差异。结果Capto Core700与Sepharose 4FF纯化的H5N1型流感病毒在透射电镜下均呈典型的流感病毒形态;两种层析介质纯化后病毒血凝素回收率差异无统计学意义(P>0.05),但前者的杂质(总蛋白质、HCP、HCD)去除率均高于后者,且差异有统计学意义(P<0.05);动物实验表明两种层析介质纯化的病毒样品均具有良好的免疫原性。结论相对于Sepharose 4FF层析介质,Capto Core700在保证病毒抗原蛋白回收率的基础上可以更有效地去除HCP、HCD和总蛋白质等工艺相关杂质。本研究为MDCK细胞生产H5N1型流感病毒疫苗纯化工艺开发提供了参考。

以流感病毒血凝素为靶标的抗病毒防治策略研究进展

流感是由流感病毒引起的一种在全球范围内流行的传染病,从1918年追溯至今,已给公共健康和社会稳定带来了巨大的冲击。目前,接种流感疫苗是预防和控制流感流行的最有效方式。近几年,对广谱抗病毒药物和中和抗体的研究不断深入。流感病毒表面血凝素在病毒侵入宿主细胞阶段发挥重要作用,是现有流感疫苗的主要有效抗原成分,也是广谱中和抗体、广谱抗病毒药物的主要靶标。本文就近年来基于流感病毒血凝素的新型流感疫苗、中和抗体以及抗病毒药物等防治策略的研究进展进行综述,为后续流感的预防和控制提供新的思路。