高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用法对兰索拉唑肠溶制剂的杂质谱研究

采用高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用检测方法,建立二维在线除盐检测方法对兰索拉唑肠溶制剂法定检验条件下检出的杂质进行结构推定,建立兼容质谱检测器的色谱方法对法检方法无法分离的杂质进行测定和结构推定,检出杂质结构的鉴定方法根据有无杂质对照品而异来推定其结构,以此考察不同企业间产品杂质谱的差异性。二维在线除盐方法的一维色谱条件同《中华人民共和国药典》(2020版)有关物质项下,二维质谱条件采用Waters C_(18)T_(3)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,0.1%甲酸水-乙腈流动相,梯度洗脱。兼容质谱的色谱条件采用Agilent Extend C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相A相:25 mmol/L乙酸铵,B相:25 mmol/L乙酸铵-乙腈(1∶4)[用冰乙酸调节pH至6.5],梯度洗脱。二维在线除盐方法检出杂质9个,其中5个为已知杂质A~E,4个为未知杂质。兼容质谱检测器方法检出杂质14个,其中9个为未知杂质(4个与二维在线除盐方法结果一致,5个为该条件下新检出)。对未知杂质的结构进行了推测和来源归属。本文建立的两个高效液相色谱-高分辨轨道阱质谱联用检测方法对兰索拉唑制剂的质量控制和工艺评价具有指导意义。

氯唑沙宗杂质的遗传毒性研究

目的:本试验在体外条件下研究氯唑沙宗杂质是否具有遗传毒性,为临床用药安全提供依据。方法:采用Derek和Sarah方法,从定量构效关系(Q)SAR的角度对氯唑沙宗杂质进行分类和评价。对于软件预测结果为阳性的杂质,进一步采用细菌回复突变试验验证上述结果。结果:氯唑沙宗杂质6(CAS:889884-60-0)、杂质7(CAS:28443-50-7)的Derek和Sarah软件预测结果为阳性。细菌回复突变试验中,杂质6、杂质7在15~1250μg/皿剂量范围内,在代谢活化系统S9存在或不存在的情况下,五种菌株的回变菌落数均未超过自发回变菌落数2倍以上,试验结果为阴性。结论:氯唑沙宗杂质6、杂质7体外细菌回复突变试验结果均为阴性,可以按照非遗传毒性杂质进行控制。

基于构效关系模型和体外实验的acetylnerolin遗传毒性评价

目的评价萘普生的杂质acetylnerolin(Ace)的遗传毒性。方法采用基于定量构效关系的方法ADMET、Derek和Sarah,预测Ace的遗传毒性,利用体外染色体畸变和细菌反向突变(Ames)实验验证上述结果。在染色体畸变实验中,中国仓鼠肺(CHL)细胞与Ace 10,20,40 mg·L-1在有/无代谢活化系统混合液(S9 mix)的条件下,分别以甲基磺酸甲酯(MMS)20 m L·L-1及环磷酰胺(CP)12 mg·L-1作为阳性对照,孵育4 h后,对每个畸变中期(包括断裂、交换、环状、分裂和多倍体)的染色体数目计数并记录,当畸变率<5%为阴性,>10%为阳性。在Ames实验中,用5种鼠伤寒沙门氏菌(TA97,TA98,TA100,TA102和TA1535)对Ace进行致突变评价。这5种菌种分别与Ace 5,25,125和625μg(每个平板)在有无S9 mix条件下孵育48~72 h。在不添加S9 mix的条件下,敌克松50μg(每个平板)作为TA97和TA98组的阳性对照;MMS2.0μL(每个平板)作为TA100和TA102组的阳性对照;叠氮化钠1.5μg(每个平板)作为TA1535的阳性对照;在添加S9 mix的条件下,2-氨基芴100μg(每个平板)作为TA97,TA98和TA100的阳性对照;1,8-二羟基蒽醌100μg(每个平板)和CP 50μg(每个平板)分别作为TA102和TA1535的阳性对照,当菌落数≥2×阴性对照时,则认为该化合物具有致突变性,反之则为阴性。结果 Derek和Sarah软件预测NPX杂质不具有遗传毒性,但ADMET数据显示Ace可诱发染色体畸变。在染色体畸变实验中,Ace 40 mg·L-1致畸变率>5%,但<10%;Ace <20 mg·L-1时致畸变率<5%,提示Ace可能诱发染色体畸变,这与ADMET结果一致;Ames试验结果表明,与阴性对照组相比,5种菌种每个平板给药Ace 5~625μg后,各组的细菌数量没有显著增加,提示Ace无致突变性,这与ADMET结果相反。结论 Ace有潜在的致染色体畸变性,对于长期服用萘普生的患者,为保障用药安全,建议将Ace的含量从普通杂质的0.15%降至0.015%。

超临界流体-蒸发光散射法测定常见油脂类药用辅料皂化后的脂肪酸组成及其在油脂鉴别中的应用

脂肪酸是油脂类药用辅料的重要组成成分,可直接反映油脂类药用辅料及制剂的质量和安全性。本研究利用超临界流体色谱-蒸发光散射检测器,建立了同时测定肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、二十二烷酸和木蜡酸6种脂肪酸的分析方法。为避免脂肪酸与酯相互转化而造成的脂肪酸种类与含量测定偏差,本方法采取先皂化后测定的方式,并系统优化了实验条件,实现了6种脂肪酸的定量分析。在优化的实验条件下,6种脂肪酸可在12 min内实现高效分离,并且在各自的质量浓度范围内线性关系良好,检出限和定量限分别为5~10 mg/L和10~25 mg/L,加标回收率为80.93%~111.66%。本文所建立方法灵敏,高效,重复性和稳定性好,满足油脂类药用辅料中脂肪酸的分析要求,并成功应用于5种常见油脂类药用辅料(玉米油、大豆油、椰子油、橄榄油、花生油)中6种脂肪酸的含量测定;同时结合主成分分析方法,实现了对不同油脂类药用辅料的准确判别,为油脂类药用辅料的快速鉴别和掺伪分析提供了有价值的参考。

多种技术不同维度分析兰索拉唑肠溶片溶出度异常原因

利用激光红外成像技术和轨道阱高分辨质谱技术分析兰索拉唑肠溶制剂抽检中样品溶出度异常的原因并提出改进建议。按照法定标准对抽检制剂进行检验,一批样品的溶出度低于限度,其他项目均符合规定。考虑到本品对酸、碱不稳定,结合对生产企业飞行检查的结论,从不同维度设计实验考察该批次样品溶出度异常的原因,包括高温高湿的贮存环境对样品关键质量属性的影响、2 h抗酸实验对溶出度的影响、片芯成像及包衣层厚度测定、有关物质色谱条件优化、杂质谱分析等。研究发现,流通环节贮存不当和样品包衣工艺差是引起该批次样品溶出度低的原因。流通环节可能出现的高温高湿贮存环境引起样品中崩解剂功效下降,主药难以完全释放;包衣液不能均匀包裹于片芯,引起隔离层薄且厚度不一,继而影响其保护主药防止酸降解的效果。两者共同造成该批次样品溶出度偏低。兰索拉唑肠溶制剂总体质量较好,但部分企业处方和工艺需要优化;流通环节需要严格按照规定控制温湿度。

应用液相色谱-串联质谱联用技术分析厄贝沙坦及其制剂的杂质谱

目的采用液相色谱-串联质谱联用技术(LC-MS/MS)分析厄贝沙坦及其制剂的杂质谱。方法采用色谱柱ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,3.5μm),以体积分数0.1%甲酸溶液(用氨水调节pH值至3.5)-乙腈(体积比62∶38)为流动相,等度洗脱,对厄贝沙坦及其制剂中有关物质进行分离,采用电喷雾-飞行时间质谱法(ESI-TOF-MS/MS)测定各有关物质分子结构信息,并结合对照品质谱结构信息确证有关物质结构。结果厄贝沙坦与其有关物质在该色谱条件下分离良好,共检出16个有关物质,通过对照品确证其中10个有关物质的结构。结论本实验建立的LC-MS/MS方法能够有效分离鉴定厄贝沙坦及其制剂中有关物质,为其质量控制和工艺优化提供参考依据。

生物制品中宿主细胞残留DNA的检测研究进展

宿主细胞残留DNA是生物制品中最为常见且影响安全性的工艺杂质之一,因其具有潜在的安全风险,国内外监管机构分别要求在成品检定或在适宜的中间产物控制阶段对其进行检测并控制在可接受的限度范围内。通过不同生产阶段产品的监测,验证去除的效果,有助于确认生产工艺的科学性与稳定性。为加深对生物制品宿主细胞残留DNA控制策略的认识与理解,作者结合实际工作及文献调研情况,对生物制品中宿主细胞残留DNA相关研究内容进行梳理,以期为今后相关工作提供参考。

旋光法快速测定乳糖含量的研究

目的:建立一种快速测定乳糖(C_(12)H_(22)O_(11))含量的方法。方法:采用乳糖精制品测得纯品乳糖的比旋度值[α]^(20)_(D),计算得到校正系数,将测得样品的旋光度值,乘以校正系数得到供试品中乳糖的质量(g),即可计算得到乳糖的含量。并对新建立的旋光法与法定检验方法(HPLC-RID法)测定乳糖含量的等效性进行了研究。结果:所建立的方法在0.05~0.20 g·mL^(-1)范围内与旋光度呈良好的线性关系(r=1.0000)、重现性[RSD=0.07%(n=6)]。旋光度法测得的141批乳糖含量与法检结果比较,同批样品间相对偏差均不大于1.0%。单因素方差分析检验结果也显示,两组数据无显著性差异(Sig.>0.05)。结论:本法与《中国药典》2020年版四部中HPLC-RID法性能相当,同时,可降低测试成本,缩短测试时间,满足质量控制需求。

基于杂化颗粒色谱柱技术对欧洲药典中螺旋霉素有关物质检验方法的改进

目的建立并优化了螺旋霉素有关物质的分析方法,用于螺旋霉素有关物质的常规检验。方法采用基于杂化颗粒技术的Waters Xbridge shield RP C18(4.6 mm×250 mm,3.5μm)色谱柱,色谱条件为:水-0.2 mol·L^(-1)磷酸氢二钾溶液(用1 mol·L^(-1)的KOH溶液调节pH值至9.5)-乙腈-甲醇-(10∶60∶28.5∶1.5)作为流动相A,水-0.2 mol·L^(-1)磷酸氢二钾溶液(pH 9.5)-乙腈-甲醇(10∶30∶57∶3)作为流动相B,梯度程序洗脱。检测波长232 nm。结果所建立的检验方法可以将螺旋霉素各组分与其有关物质实现良好分离,螺旋霉素Ⅰ质量浓度在0.7~1200μg·mL^(-1)范围内,其峰面积与浓度呈良好线性关系(r=0.9993),检测限(LOD)为0.2μg·mL^(-1),定量限为(LOQ)为0.7μg·mL^(-1),重复性与精密度试验结果相对标准偏差(RSD)均<2.0%,供试品溶液在5℃下24 h稳定。结论与现行分析方法相比,该方法专属性强,灵敏度与稳定性均较好,且有效缩短检验时间,提升检验效率,可用于螺旋霉素有关物质的日常检验工作。

高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法替代微生物检定法测定硫酸新霉素效价的研究

目的建立用于测定硫酸新霉素效价的高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法(HPLC-PAD)。方法建立并验证HPLC-PAD法,测定硫酸新霉素各主要组分含量及相关物质;采用在线膜抑制脱盐技术辅助LC-IT-TOF法测定硫酸新霉素杂质谱,结合组分活性研究确定了硫酸新霉素的主要活性组分;采用半制备液相色谱-蒸发光散射检测器串联制备硫酸新霉素B及硫酸新霉素C精制品,采用波谱手段进行结构确证;采用质量平衡法测定二者的纯度;采用三剂量抗生素微生物检定法测定B、C精制品各自的效价值,推导公式计算出硫酸新霉素的量效转换系数,设计实验进行交互作用考察及实际样品的验证。结果建立的HPLC-PAD方法在分离能力及方法的稳定性上均优于《欧洲药典》(EP)方法,适用于硫酸新霉素各组分的准确定量及有关物质检查;在线膜抑制脱盐技术成功地去除了流动相中的三氟乙酸,对硫酸新霉素的杂质谱进行研究,结合活性研究结果,确定新霉素B和新霉素C为新霉素的主要活性组分;成功制备获得新霉素B、C精制品,通过实验和计算获得了硫酸新霉素的量效转换系数,并通过了验证。结论初步实现了仪器法对微生物生物检定法的替代,基本完成了多组分氨基糖苷类抗生素硫酸新霉素的量效一致性研究工作。

兰索拉唑肠溶胶囊生物相关性溶出方法的构建研究

目的探索建立兰索拉唑肠溶胶囊生物相关性溶出方法,为药品常规质量控制及市场监管提供有效手段。方法根据前期研究所构建的兰索拉唑肠溶制剂的体内外相关性模型,结合体外溶出数据、肠溶胶囊的制剂处方以及体外溶出模型进一步开发生物相关的溶出条件。结果推测可能的生物相关溶出方法:采用美国药典(the United States Pharmacopoe-ia,USP)篮法;设定仪器转速为150 r·min^(-)1;45 min之前采用pH 5.8的磷酸盐缓冲液;45~90 min调整溶出介质的p H,形成p H为7.5的缓冲液;90 min之后调整溶出介质的p H至10.0。通过体外溶出实验进一步验证和确认了该方法,表明模型推测的溶出方法具有较好的准确性。结论建立的生物相关溶出方法,真实反映仿制药的内在质量,为药物的质量控制及一致性评价提供一种简单、便捷的手段,为科学监管提供新的思路。

以兰索拉唑肠溶胶囊为例探索模型引导的仿制药等效性替代方法

目的:本研究探索如何建立体内外相关性与生物等效性的替代方法,为药物日常质量控制及市场监管提供有效手段。方法:通过分析兰索拉唑体内吸收、分布、代谢、排泄(absorption,distribution,metabolism,excretion,ADME)过程,整合已有体外研究结果至生理药代动力学模型(physiological pharmacokinetics,PBPK)中,搭建兰索拉唑的体内药代动力学(pharmacokinetics,PK)模型,借助GastroPlus中的机制性口服吸收模型反推口服给药后在胃肠道内的释放与吸收曲线,进而构建兰索拉唑肠溶制剂的体内外相关性模型,分析现有体外溶出条件是否是与生物体相关的溶出方法。最后再通过软件开展虚拟生物等效性(bioequivalence,BE)的分析。结果:成功搭建了兰索拉唑口服给药的PK模型,模型能够较好地反映口服给药后兰索拉唑在体内的ADME过程,口服特点以及在体内的处置行为。目前法定的溶出方法与体内并非生物体相关,通过软件推测了可能生物体相关的溶出方法。同时虚拟评估了7家仿制药企业与参比制剂的生物等效性情况。结论:本研究建立了体内外相关性与生物等效性的替代方法,为药物的质量控制及一致性评价提供了一种简单、便捷的手段,为科学监管提供了新思路。

硫酸新霉素及相关物质体外抗菌活性与毒性的研究

目的:研究硫酸新霉素及相关物质体外抗菌活性及毒性,探索可能影响硫酸新霉素安全性及有效性的因子,为合理制定有关物质限度提供依据。方法:采用常量肉汤稀释法和纸片扩散法考察硫酸新霉素及相关物质的抗菌活性;用豚鼠和斑马鱼模型评价硫酸新霉素及其成分B、C的毒性。结果:硫酸新霉素及相关物质的体外抗菌活性顺序均为:硫酸新霉素B>硫酸新霉素>硫酸新霉素C>硫酸核糖霉素>巴龙霉素>新霉胺;对豚鼠听力损伤大小排序为:硫酸新霉素>硫酸新霉素B>硫酸新霉素C;药物对斑马鱼致死率及器官毒性排序均为:硫酸新霉素>硫酸新霉素B>硫酸新霉素C。结论:硫酸新霉素及相关物质抗菌活性和毒性存在较大差异,建议在硫酸新霉素质量标准中增加对有关物质的控制,明确新霉素C、新霉胺、单杂及总杂限度,提高该药质量。

硫酸核糖霉素杂质谱的在线膜脱盐LC-Orbitrap HRMS研究

目的 建立硫酸核糖霉素杂质谱的在线膜脱盐液相色谱-静电轨道阱质谱(LC-Orbitrap HRMS)研究方法,消除流动相中三氟乙酸等对电喷雾离子化的抑制作用。方法 采用Thermo Aminoglycoside (RP_(18) 4.6 mm×150 mm, 3μm)色谱柱,以体积分数0.20%五氟丙酸0.15%三氟乙酸溶液-乙腈(99∶1)为流动相1 mL·min^(-1)等度洗脱,柱后分流(3∶2)电喷雾正离子化质谱检测。采用在线膜脱盐消除流动相中五氟丙酸和三氟乙酸对电喷雾离子化的抑制作用。结果 测得硫酸核糖霉素中11个有关物质,经质谱解析推测了其结构,分析确定其来源主要为合成中间体、副产物或降解杂质。结论 研究结果可为硫酸核糖霉素质量控制提供参考。

市售11种煎煮类中药饮片微生物污染情况考察

目的通过对11种市售煎煮类中药饮片微生物限度的检测,分析中药饮片中微生物污染状况。方法根据《中国药典》2020年版四部通则中药饮片微生物限度检查法,研究11种共计101批煎煮类中药饮片的整体微生物负载情况。结果市售不同种类的煎煮类中药饮片微生物负载水平差异大。结论中药饮片的微生物负载水平和药用部位、炮制工艺等相关,为今后政府监管工作的开展指明方向并提供技术支撑。

一种快速分析聚山梨酯80组分的方法

由于聚山梨酯80的组分复杂,分析耗时耗力,亟需寻找一种能够快速分析聚山梨酯80组分的方法。本研究采用ExcipientProfiler药用辅料智能分析系统,通过UHPLC-HRMS对收集到的国内外3家企业共10批样品进行分析,同时利用扩展数据库对分析结果进行补充解析。分析结果显示,ExcipientProfiler软件能够快速识别质谱图中加合了Na^(+)的组分峰,得到样品的组分分布、组分数和聚合度信息,并利用系统聚类分析法证明能用其得到的组分数来区别注射级和普通级的样品。此外,通过手动搜索相关扩展数据库补充说明了样品中还含有其他脂肪酸酯类组分,以及根据质谱数据解析发现样品中存在聚氧乙烯山梨醇酐四油酸酯组分。实验结果表明,该方法虽然快速简便,但是后续需要添加四酯组分和其他脂肪酸酯类组分进一步完善ExcipientProfiler软件中信息,以便能更好地应用于聚山梨酯80的分析。

亚硝胺类基因毒性杂质专项应急检验管理的一些思考

目的进一步提高药品应急检验应对能力。方法采用回顾性研究的方法,对江苏省食品药品监督检验研究院2019年亚硝胺类基因毒性杂质专项应急检验全过程工作进行梳理。结果总结了专项应急检验中各环节的处置流程、管理特点和难点,提炼处置经验教训。结论应急检验工作是对检验机构应急响应能力、技术实力的全面考验。需从事前、事中和事后制订系统的应对策略,构建完善的药品应急检验管理体系。

洛索洛芬钠片降解杂质Ⅰ成因分析

目的研究影响洛索洛芬钠片降解杂质2-[(4-乙酰基苯基)甲基]环戊酮(杂质Ⅰ)产生的因素,为洛索洛芬钠片的处方工艺及包装设计提供参考。方法分别在高温(60℃)、高湿(92.5%RH)、强光照射(4500 lx)条件下进行洛索洛芬钠原料药及片剂的影响因素试验。在加速试验条件下(温度50℃、湿度75%)进行洛索洛芬钠与辅料的相容性试验,同时考察裸片及不同包材洛索洛芬钠片杂质Ⅰ的含量。采用高效液相色谱法(HPLC)测定杂质Ⅰ的含量。结果洛索洛芬钠高湿环境下易降解出杂质Ⅰ,含水量高、引湿性强、亲水性强的辅料磷酸氢钙、二氧化硅、羧甲基淀粉钠均会引起杂质Ⅰ显著增加,且甘露醇与洛索洛芬钠存在不相容性,铝塑板加铝箔袋的包装密封性能优于单独的铝塑板包装。结论为避免降解产生潜在的毒性杂质Ⅰ,洛索洛芬钠片辅料及制粒干燥后的颗粒均应控制含水量,处方中应避免加入甘露醇,建议选用密封性能较好的铝塑板加铝箔袋包装。

盐酸坦索罗辛有关物质测定方法及杂质控制限度研究

目的建立加校正因子的主成分自身对照法,测定盐酸坦索罗辛有关物质,并基于Nexus 2.6软件(包含Derek和Sarah模型)遗传毒性预测结果拟定各已知杂质的控制限度。方法采用ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm),以高氯酸盐缓冲液-乙腈为流动相,梯度洗脱,225 nm波长下测定盐酸坦索罗辛8个已知杂质的校正因子,通过加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸坦索罗辛的有关物质,并采用Nexus 2.6软件对已知杂质进行遗传毒性预测。结果采用加校正因子的主成分自身对照法测定各已知杂质含量与外标法测定结果基本一致(差值为±0.02%),方法学验证结果显示各已知杂质线性、精密度、准确度、定量限、检测限均满足检测要求,遗传毒性软件预测结果杂质I为阳性(ICH M7第3类),其他杂质均为阴性(ICH M7第5类)。结论本研究建立的方法快速、高效、准确、灵敏,并且基于遗传毒性软件预测结果拟定各已知杂质限度为0.1%,本研究可为盐酸坦索罗辛标准的制修订提供参考。

基于柱前衍生-高效液相色谱-串联质谱联用技术的骨肽注射液中10种生物胺定量测定方法及其稳定性研究

目的:采用柱前衍生化-高效液相色谱-串联质谱联用技术建立骨肽注射液中生物胺类物质定量测定方法,并通过影响因素试验和加速试验考察其生物胺类物质的稳定性。方法:采用丹磺酰氯衍生化法对样品进行前处理,经ZORBAX SB-C_(18)色谱柱梯度洗脱分离,电喷雾离子源正离子模式下多反应监测,对骨肽注射液中10种生物胺进行定量测定,并于高温条件、强光照条件和加速试验条件下考察生物胺类物质的稳定性。结果:方法学考察结果显示10种生物胺线性关系良好,相关系数均大于0.990,方法检测限为0.01~0.10 ng·mL^(-1),定量限为0.05~0.30 ng·mL^(-1),准确性、重复性和耐用性较好。稳定性研究结果显示不同条件下骨肽注射液中生物胺类物质变化存在差异,高温条件下腐胺增多,精胺和亚精胺减少,强光照条件及加速试验条件中生物胺类物质含量均存在变化。结论:方法学验证表明该方法可用于同时测定骨肽注射液中10种生物胺,为骨肽及其它药品质量标准中生物胺类物质检测方法的建立和完善提供了参考,同时生物胺类物质稳定性研究结果表明高温及强光条件可对其稳定性产生影响,提示药品生产及贮存过程中应加强质控和监管,从而保障药品质量的稳定性。