柱前衍生化液质联用法测定氯乙酰氯试剂中的乙酰氯和二氯乙酰氯

建立了柱前衍生化超高效液相色谱-三重四级杆联用(UPLC-MS/MS)法同时测定酰化试剂氯乙酰氯中的杂质乙酰氯和二氯乙酰氯的含量。以苯胺作衍生化试剂,采用Poroshell 120 Aq-C18(150 mm×2.1 mm, 2.7μm)为色谱柱,0.1%(V/V)甲酸水和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min。在电喷雾离子源(ESI),正离子监测下,采用多反应监测扫描(MRM)模式。乙酰氯和二氯乙酰氯分别在0.5~50 ng/mL和5~500 ng/mL范围内线性关系良好(R^(2)≥0.998 6),定量限为0.5和5 ng/mL,检出限为0.2和2 ng/mL;回收率(n=3)为90.8%~103.1%和92.5%~108.7%,RSD为1.4%~6.6%和0.9%~3.8%。衍生化产物室温放置24 h内稳定。方法准确可靠,简便高效,可用于氯乙酰氯中乙酰氯和二氯乙酰氯的同时检测。

基于超高效液相色谱-质谱法的肽段分析中非特异性吸附评估及通用型最小化策略

蛋白质组学技术在多肽和蛋白质类新型治疗药物的开发、临床诊断生物标志物的深入发掘中应用广泛。然而,多肽和蛋白质类大分子的非特异性吸附性质给分析方法的开发带来极大挑战,亟须一种通用型的策略去评估和降低非特异吸附对超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)大分子检测造成的负面影响。研究以牛血清白蛋白(BSA)为模型,探讨其酶解后多肽组理化性质与吸附程度之间的相关性;根据肽段的响应和吸附程度设计分级策略;针对高响应、强吸附的ClassⅡ类肽段,从样品制备中离心管、进样瓶的选择,乃至液相色谱系统中色谱柱固定相、流速、梯度、柱温、洗针液的选择全过程设计试验,探讨非特异吸附的影响因素及其通用型最小化策略。结果显示,肽段的被吸附程度与其理化参数HPLC指数(HPLC Index)、肽段长度等显著相关(p<0.05),但仅凭上述参数仅能解释30%肽段的被吸附程度。改性的聚丙烯材料可使肽段溶液在储存或前处理过程中获得较高的回收率(24 h内回收率大于80%)。在对液相色谱条件的考察和优化过程中发现,C_(8)填料的色谱柱、高流速、缓梯度以及强洗针液,可使残留量降至最低(降低为原来的1/150)。柱温对残留的影响在肽段间存在较大个体差异,需要对不同的肽段具体分析以得到较少量的残留。研究以详实的数据考察并最小化模型肽段组在分析过程中的非特异吸附,提示了蛋白质类大分子药物分析方法建立中应重点关注的影响因素及其有效的解决方案。

酒石酸美托洛尔原料及其片剂有关物质检查方法研究

目的:改进酒石酸美托洛尔现行标准中有关物质的测定方法,为修订和提高标准中的有关物质测定方法提供参考和依据。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Waters Xbridge C 18(4.6 mm×150 mm,5μm),以醋酸盐缓冲液(取醋酸铵3.9 g,加水810 mL溶解后,加三乙胺2.0 mL,冰醋酸10.0 mL,磷酸3.0 mL,摇匀)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速为2.0 mL·min-1,检测波长为280 nm,柱温为30℃,进样量为20μL;采用线性斜率法计算各杂质校正因子。结果:在拟定的色谱条件下,酒石酸美托洛尔色谱峰与相关杂质完全分离,制剂中的辅料对主成分及有关物质测定无干扰;杂质A^H、杂质J、杂质235和杂质B(USP)的校正因子分别为0.74、0.36、0.048、0.61、1.01、1.47、0.33、0.76、0.99、0.22和0.84;6家企业6批原料的单杂均小于0.049%,杂质总量为0~0.10%;6家企业6批片剂的单杂均小于0.082%,杂质总量为0.0057%~0.23%。结论:改进后的方法更具合理性、准确性和专属性,可用于酒石酸美托洛尔及其片剂有关物质测定。