WHO药品预认证微生物实验室质量管理的要求与思考

目的:介绍世界卫生组织(WHO)对药品微生物检测实验室的预认证要求,推动我国药品检测质量管理体系的完善和发展。方法:从预认证实验室应遵循的质量管理原则出发,对照我国实验室ISO/IEC 17025体系要求,分析药品微生物检测实验室在质量管理中的不足。结果:预认证实验室更多地采纳了《药品生产质量管理规范》(GMP)的质量管理理念,而我国药品微生物检测实验室在记录与数据可靠性、基于风险的变更控制和偏差调查等方面的应用与实施还存在较大差距。结论:我国药品微生物检测实验室应学习和借鉴国内外GMP的质量管理经验,不断更新理念,改进质量管理体系,更多地以风险评估方式保障检测数据的可靠性。

分子生物学技术在药品微生物鉴定溯源中的应用

目的:为满足基于风险评估的微生物控制体系及药品质量全过程控制的要求,建立更加完善的药品微生物鉴定溯源标准化分子生物学技术体系。方法:总结各国药典中分子生物学标准体系的构成,并分析《中国药典》中收载的分子生物学技术及该技术在药品微生物鉴定溯源中的应用。结果与结论:分子生物学技术是进行药品微生物鉴定溯源的重要标准,不同的分子生物学鉴定方法都有其优势和局限性,需要根据需求选择最合适的方法,以期达到最佳效果。

罗红霉素胶囊微生物限度检查方法适用性研究

目的通过微生物适用性试验,建立罗红霉素胶囊的微生物限度检查方法。方法按照2020年版《中国药典(四部)》通则1100生物检查法要求,采用平皿法、薄膜过滤法并使用中和剂稀释等方法开展回收试验,进行微生物计数检查、控制菌检查方法研究。结果采用中和剂稀释联合分膜的薄膜过滤法,可有效去除罗红霉的抑菌作用,回收率达到要求。结论所建立的检查方法符合药典要求,可作为罗红霉素胶囊的微生物限度检查方法。

《美国药典》《欧洲药典》《日本药典》与《中国药典》中中药饮片微生物限度检查及标准的比较研究

目的:比较《美国药典》43版(USP43)、《欧洲药典》10.0版(EP10.0)、《日本药典》17版(JP17)与《中国药典》2020年版(ChP2020)中中药饮片微生物限度检查方法及标准的差异,为我国中药饮片相关微生物标准的修订和完善提供参考。方法:比较USP43、EP10.0、JP17和ChP2020在中药饮片的微生物计数法(包括抽样与取样、菌种和培养基选择、微生物和耐热菌计数等)、控制菌检查(包括样品前处理、增菌、分离、鉴定等)、微生物相关限度标准等方面的差异。结果与结论:在中药饮片微生物的检查方法上,USP43、EP10.0、JP17都有各自独立的规定,ChP2020则新增了"通则1108"。在检验项目上,除需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数外,ChP2020与EP10.0规定了3种控制菌(耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌、沙门菌)的检查方法;在此基础上,JP17补充了金黄色葡萄球菌的检查方法;USP43增加了梭菌的检查方法,并最早提出不可接受微生物风险评估理念;ChP2020还新增了耐热菌计数方法。在微生物限度标准上,USP 43对中药饮片的分类最为细致,要求较为严格且高于EP10.0、JP17;ChP2020仍未对中药饮片控制菌检查设立统一的限度标准。虽然,ChP2020对"中药提取物及中药饮片的微生物限度标准"进行了修订,但相较于美国、欧洲和日本药典的规定还不完善。建议根据我国中药饮片微生物污染和控制现状,逐步完善药典对中药相关产品的微生物检验和限度标准,合理细化相应产品的微生物限度水平。

中药饮片微生物污染研究热点及标准探讨

中药饮片微生物污染是影响中药质量的重要方面。该文通过分析近年来报道的中药饮片污染微生物调查数据,综述中药饮片微生物污染的种类、污染水平和研究热点等问题,探讨中药饮片微生物污染的控制策略和研究方向,为中药饮片微生物限度标准的制修订及实际控制提供参考。

莫匹罗星软膏微生物限度检查方法适用性研究及水分活度测定

目的建立科学、统一的莫匹罗星软膏微生物限度检查方法,为其药品质量检验提供参考。方法参考2020年版《中国药典(四部)》微生物限度检查法,对6个生产企业127批次的莫匹罗星软膏建立统一的微生物限度检查方法及控制菌检查法,并测定其水分活度。结果采用1∶10常规法测定霉菌和酵母菌计数;采用中和-薄膜过滤法测定需氧菌总数和控制菌金黄色葡萄球菌;采用直接接种法检查控制菌铜绿假单胞菌。均可有效去除样品的抑菌性,方法适用性试验均通过。6个生产企业的莫匹罗星软膏的水分活度均值为0.025~0.145。结论所建立的莫匹罗星软膏的微生物限度检查方法科学、合理,可为药品监管检验提供参考;样品水分活度的测定可为生产企业的风险评估提供依据。

中药饮片金银花、菊花微生物限度检查方法研究

目的:研究中药饮片金银花、菊花微生物限度检查方法。方法:按照《中国药典》2020年版规定,测定试验菌株的回收率,研究需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的计数方法和控制菌检查方法,并对方法加以试验验证。结果:试验结果表明,用常规法开展实验,需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数方法验证试验,供试品对照组的试验菌回收率在0.5~2.0范围内;控制菌检查,实验组检出阳性试验菌,阴性对照没有菌落生长。结论:该方法简便、准确、安全、可靠,可用于中药饮片金银花、菊花的微生物限度检查。

药品中金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR精准快检

为实现药品中金黄色葡萄球菌的精准快速检测,通过加入内参(internal amplification control,IAC),优化PCR反应体系,建立能够实时监控过程的基于内参的金黄色葡萄球菌实时荧光定量PCR快检方法,并对方法的特异性、检测限、重现性、可行性进行验证。验证结果表明,所建立方法的特异性良好,仅金黄色葡萄球菌呈现典型扩增曲线;对金黄色葡萄球菌基因组DNA的检测限为0.23 pg/μL;C_(t)值与模板拷贝数呈现出良好的线性关系(R^(2)=0.99);重现性实验的相对标准偏差均小于3.0%;人工污染药品增菌10 h后即可检出金黄色葡萄球菌。该方法不仅缩短了药品中金黄色葡萄球菌的检验时间,还可以实时监测PCR反应过程,有效防止“假阴性”结果的发生,能够作为确认金黄色葡萄球菌的补充方法。

重组酶聚合酶扩增检测产志贺毒素大肠埃希菌的微流控芯片技术

采用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),开发产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)的等温检测方法,结合圆盘式微流控芯片快速检测目标微生物。以stx1和stx2基因为靶点,设计和筛选适宜的RPA检测引物和探针序列,验证了19株STEC菌株(含9种stx基因亚型)和21株非STEC菌株,并采用人工污染的牛肉样品对集成化的微流控芯片进行评价。筛选出检测stx1和stx2基因的高特异性引物、探针组合,与美国农业部微生物实验室技术指南中STEC定量聚合酶链式反应(real-time polymerasechainreaction,real-timePCR)方法相比,目标基因检测的包容性和排他性均为100%。荧光RPA微流控芯片法在20 min内可同时进行32个反应,可检测STEC菌体灵敏度为9.5×10^(3)CFU/mL。根据GB 4789.6—2016《食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》的规定经增菌培养后在人工污染牛肉样品中可检测1 CFU/25 g的STEC污染,方法的相对正确度和相对检出水平均为100%。本研究开发了一种荧光RPA微流控芯片检测方法,可检测常见stx基因亚型STEC菌株,操作简单、反应速度快,适用于STEC的高通量快速检测。

金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法及前处理技术研究进展

金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌之一,肠毒素是导致金黄色葡萄球菌污染食物中毒的最主要原因。现有肠毒素检测方法包括免疫学方法、分子生物学方法、生物传感器方法和质谱法等。各方法均存在优劣,酶联免疫法作为现有国家、行业标准推荐方法,虽然灵敏度高,但存在交叉反应,且价格昂贵。质谱分析技术具有高通量、专属性强等优点,已成为近年肠毒素检测技术研究热点。由于食品基质含有脂质、糖类等多种复杂成分,对肠毒素的分离与检测具有较强的干扰,因此选择恰当的样品前处理方法是实现肠毒素准确检测的关键。本文分别从肠毒素性质、肠毒素检测方法及原理、样品前处理方法等方面对现有研究进展进行阐述。通过对现有技术方法的比较分析,基于高效液相分离技术结合质谱检测技术开发肠毒素检测方法,不仅能够从食品中实现多种肠毒素的高效分离富集,还具有灵敏度高、专属性强等优点,有望成为肠毒素检测方法的主要研究方向。

中成药中沙门氏菌环介导等温扩增快速检测方法的建立及应用

目的建立以invA特异性基因设计合成为引物的沙门氏菌环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法选择沙门氏菌的毒力因子invA基因作为检测模板,采用Primer Exploer V5软件设计3组LAMP引物[正向外引物(F3)、反向外引物(B3),正向内引物(FIP)、反向内引物(BIP),正向环引物(LF)、反向环引物(LB)],以4种沙门氏菌(甲型副伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌)和3种非沙门氏菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产志贺氏毒素大肠埃希氏菌)的细菌DNA为模板,进行LAMP快速检测。结果在反应温度为65℃、反应时间为60 min条件下,即可快速检测4个亚种沙门氏菌,其检测灵敏度可达10 cfu/mL,且试验结果易于观察,筛选的引物特异性良好。结论所建立的方法灵敏度高、特异性好、检测快速,可应用于中成药中沙门氏菌的快速检测。

荧光PCR技术在麝香壮骨膏控制菌检查中的应用

目的建立麝香壮骨膏控制菌检查中金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的双重荧光PCR体系。方法针对金黄色葡萄球菌根据fem B基因序列,铜绿假单胞菌根据ETA基因序列设计引物及探针,建立双重荧光PCR体系并进行灵敏度、特异性、重复性研究,对国家药品评价性抽检品种麝香壮骨膏进行检测。结果271份麝香壮骨膏的生化与荧光PCR检测结果一致,均为未检出。双重荧光PCR检测金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌,灵敏度达到20、10 cfu/mL,且荧光信号无干扰,特异性良好。结论该方法可大幅缩短检测时间,且操作简便,为药品微生物检验提供了新的方法与思路。

制药用水及受控环境中寡营养微生物的生物负载监测

目的:筛选适用于制药环境中寡营养微生物的监测方法,了解制药用水及洁净环境等寡营养条件下的生物负载及微生物特征。方法:通过比较R2A和TSA培养基对实验室纯水中微生物在不同温度、培养基及培养时间的计数结果比较,优化寡营养条件下微生物的培养条件和检测方法。以传统方法与寡营养检测方法同时开展制药生产环境中寡营养微生物的监测,结合16s rDNA测序和MALDI-TOF MS等技术,对分离的微生物开展多相微生物鉴定及分析。结果:菌落计数方法、培养基种类和培养时间在微生物计数中有显著性影响,采用寡营养R2A培养基分离环境微生物的效果优于TSA培养基。上述2种培养基的微生物分离谱差异较大,在R2A培养基中革兰阴性菌的分离率可达37.0%,在TSA培养基中革兰阴性菌的分离率仅为14.0%。此外,初次分离于R2A培养基的多株条件致病微生物在TSA培养基中生长缓慢,在传统监测方案中易被漏检。结论:随着制药工艺的发展,以革兰阳性球菌为主的人源性微生物污染比例将逐步下降,适时选用寡营养微生物监测方法作为传统技术的补充,有助于在早期发现生产环境中潜在的不可接受微生物污染风险。

现代微生物鉴定技术在药品质量控制中的应用研究进展

本文通过比较近年来报道的药品微生物鉴定文献,从表型鉴定和基因型鉴定两方面阐述各种技术的优势和缺陷。结果显示,文献重点研究的种群包括葡萄球菌属、伯克霍尔德菌属、肠杆菌属和芽孢杆菌属等:约65%的研究报道采用2种及以上鉴定技术,表型鉴定中生化鉴定系统VITEK的应用较广泛,基因型鉴定中16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,16SrRNA)核酸测序的应用较广泛:鉴定技术在环境菌库建设方面的应用研究较多。实践中,应针对药品微生物控制和鉴定需求,合理选择不同原理的鉴定技术,形成各自实验室独特的多相鉴定方案,以提高药品质量控制水平。

食品中肌醇测定用菌株的筛选及检测方法建立和应用

基于肌醇缺陷型酵母菌菌株的生长与培养液中肌醇含量的对应关系,建立食品中肌醇含量的检测方法。通过比较6株酵母菌对肌醇的生长特异性筛选实验,获得肌醇利用特异性菌株葡萄汁酵母Saccharomyces uvarum CICC 1465。利用该菌进行食品中肌醇的定量检测方法研究,通过对4种食品中肌醇含量的测定,结果显示,本方法获得良好的精密度(相对标准偏差10%以内)、回收率(92.3%~114.3%)及重现性(相对标准偏差10%以内),表明该方法可用于食品中肌醇的定量检测。

新型172 nm氙准分子消毒器应用研究

文章开展172 nm氙准分子消毒器消毒灭菌测试研究,旨在为正确使用消毒器提供支撑。按照消毒程序开启消毒器,采用不同浓度测试活氧浓度、自然菌及白色葡萄球菌等的消毒灭菌效果并进行对比;实际使用高污染量的中药饮片进行灭菌前后的微生物对比,以说明消毒灭菌效果。使用消毒器灭菌,低浓度适当延长消毒时间,可使空气中的微生物消亡率达到90%以上;在高浓度条件下,很短时间就可达到99%以上的微生物消亡率;同时可在人机共处的环境下消毒灭菌,对中药饮片污染菌消毒效果好。氙准分子消毒器消毒灭菌高效、安全、环保,值得推广和应用。

无菌药品生产企业过程污染微生物菌株库的建立及数据分析

目的:建立某无菌药品生产企业过程污染微生物菌株库,为无菌药品生产过程污染微生物有效控制和溯源调查提供指导。方法:对原辅料、包装材料、生产人员、生产环境、制药用水和检验实验室等环节建立污染微生物监控方案,采用基于16S rRNA序列比对等方法鉴定污染微生物,结合微生物种属和来源信息进行分析,建立覆盖药品生产过程的污染微生物菌株库。结果:共分离鉴定292株微生物,其中生产环境污染率最高,占全部污染微生物来源的72.6%;其次是生产用水(13.4%)、原辅料(10.3%)、生产人员(3.77%)。值得关注的是,A级洁净生产区检测到30株微生物。污染微生物主要分布于44个属、95个种,表明药品生产过程污染微生物种类复杂。其中葡萄球菌污染率最高,占全部污染微生物的40.25%,其次是微球菌(11.20%)、芽孢杆菌(8.30%)和不动杆菌(5.81%)。此外,经分析发现,部分污染微生物分布具有空间特异性,如芽孢杆菌主要存在于原辅料活性炭中,而不动杆菌则主要存在于注射用水中。结论:无菌药品生产过程中多个环节都存在微生物污染,且污染微生物种类复杂,建立覆盖整个生产过程的微生物监控和污染微生物数据库,对药品微生物质量控制和溯源调查分析具有非常重要的作用。

检验检测机构从业人员信用档案建立的标准化建设研究

建立检验检测机构从业人员信用档案是我国检验检测体系标准化建设中的重要内容,也是国家检验检测行业标准化建设信用管理制度建设的起点。本文论证了建立检验检测机构从业人员职业信用档案的意义及必要性,对目前我国检验检测机构从业人员信用档案建设的现状进行了分析,为建立检验检测机构从业人员信用档案问题的解决提供对策以及建议。

常用儿童药品的微生物限度检查方法的建立及评价

【目的】建立44种常用儿童药品的微生物限度检查方法。【方法】按《中国药典》2015及2020年版四部通则,采用常规法、中和法或稀释法等分别对44种常用儿童药品的微生物限度检查方法进行适用性试验。【结果】需氧菌总数计数:化学口服液体制剂采用1∶10平皿法检查;中药制剂需对样品进行中和处理,其中,中药口服液体制剂采用1∶10平皿法检查,中药颗粒剂采用1∶100平皿法检查。所有样品的霉菌和酵母菌总数计数均可采用1∶10平皿法检查。所建立的检查方法对5种试验菌株的回收比值在0.5~2.0之间,试验组控制菌均可检出,阴性对照组均未检出,符合《中国药典》要求。【结论】建立的方法准确可靠,可用于44种常用儿童药品的微生物限度检查及质量控制。

保健用品眼贴制剂霉菌和酵母菌总数定性检测方法建立

目的:研究保健用品眼贴制剂的霉菌和酵母菌数检测方法,为生产企业在进行此类保健用品检验时提供参考,填补陕西地方标准保健用品眼贴制剂霉菌和酵母菌定性检测方法的空白。方法:参考《中国药典》,取供试品制成1∶10供试液,取供试液接种至预增菌培养基中进行预增菌培养,培养物接种至选择性分离平板进行霉菌和酵母菌总数的检查,建立适用保健用品眼贴制剂霉菌和酵母菌定性检测方法。结果:霉菌和酵母菌在预增菌培养液中可快速增值,接种于选择性平板后,霉菌和酵母菌菌落典型,便于观察。结论:建立的方法可以用于保健用品眼贴制剂霉菌和酵母菌的定性检查。