新冠疫情形势下食品药品检验机构的担当与思考

新型冠状病毒肺炎疫情期间,各地食品药品检验机构积极发挥专业特长和检验优势,采取特事特办、抽检结合、组团帮扶等多项举措,为企业提供应急检验服务,为食品药品监管部门提供强有力技术支撑,彰显了食品药品检验机构的责任与担当。本文列举了部分食品药品检验机构开展的疫情防控保障工作,论述了食品药品检验工作的现实意义和社会价值,并对后疫情时期的检验检测工作模式作了思考。

基于DEA模型的食品药品检验机构“最多跑一次”改革成效评价体系构建与解析

为科学评价食品药品检验机构"最多跑一次"改革成效,在文献梳理与政策分析的基础上,本文提出"群众满意度-检验服务增速提质"双元综合改革成效评价模型。以11个主要子指标构建群众满意度评价指标体系,以4个主要子指标构建检验服务增速提质评价指标体系,基于Matlab语言和数据包络分析(DEA)模型对"最多跑一次"改革进行成效评价,并在此基础上提出"最多跑一次"改革成效评价研究建议。

制药用水系统微生物菌群特性分析及培养探讨

制药用水是药品生产过程中应用最广泛的原料和溶剂,大量用于器具、设备设施和系统的清洗、消毒过程等,参与药品的整个生产过程。制药用水是药品微生物污染的主要源头之一,因此制药用水的微生物安全对药品质量至关重要。本文主要介绍制药用水系统微生物菌群及特性,并进行生物膜分析。因制药用水系统中微生物具有寡养、生长缓慢等特性,本文也进一步探讨制药用水微生物检查方法及培养方法,为建立科学合理的微生物检测体系提供参考,也为深入研究难培养微生物的培养提供思路与理论基础。

宏基因组测序技术检测胎菊饮片表面微生物污染方法研究

目的 建立基于宏基因组测序技术检测胎菊表面微生物含量的方法,检测市售中药饮片胎菊微生物污染情况,探索微生物污染途径和来源。方法 利用宏基因组测序比较市售胎菊样品培养组与非培养组之间的表面微生物检出差异,并运用宏基因组测序技术检测2款胎菊商品的表面微生物含量。检测杭州原种场和桐乡新鲜胎菊样品的表面微生物种类,并比较新鲜样品与商品表面微生物种类及相对含量差异。结果 相较于培养组,宏基因组测序技术可以从非培养组中检出更多真菌和古菌。2款胎菊商品表面均检出条件致病菌,饮片表面的微生物与同产地新鲜胎菊样品表面微生物组成相近,表明污染可能来自于种植环境。结论 市售胎菊商品中存在微生物污染情况,宏基因组测序方法可以有效检测胎菊饮片表面微生物,可作为中药饮片微生物污染监测、中药饮片污染微生物数据库构建的有力工具,进而为提高中药饮片的用药安全奠定技术基础。

不同16S rRNA片段长度在微生物鉴定中鉴定能力的比较研究

目的 比较不同16S rRNA片段长度在微生物分类鉴定中的区别。方法 收集公共数据库NCBI中药典控制菌及相关细菌的16S rRNA序列,使用不同引物组合将16S rRNA序列截取为500 bp、1 000 bp、全长(~1 500 bp)的片段,通过BLAST进行序列比对并注释,获得相似度数据进行统计分析。结果 16S rRNA基因序列500 bp、1 000 bp、全长(~1 500 bp)均可以100%对药典控制菌及相关细菌鉴定到属水平,种水平的鉴定能力随着片段长度的增加而提高,其中500 bp长度可鉴定到90.73%的序列,1 000 bp可鉴定到94.04%的序列,全长(~1 500 bp)可鉴定到96.36%的序列。梭菌属、沙门氏菌属、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌使用3种片段长度均可满足药典控制菌的鉴定需要,而金黄色葡萄球菌鉴定使用全长(~1 500bp)的鉴定效果最佳。结论 16SrRNA序列片段长度越长鉴定效果越好,但在实际应用中考虑到成本因素推荐1 000 bp片段长度。大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌在实际鉴定中可能鉴定程度率不高。

洋葱伯克霍尔德菌群3种检测方法的比较

目的通过对环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、基于聚合酶链式扩增(polymerase chain reaction,PCR)的SYTO 9染料法及TaqMan探针实时荧光定量PCR法(简称TaqMan探针法)3种检测方法的比较,旨在建立一种能够快速、准确检测24株洋葱伯克霍尔德菌群的PCR方法。方法根据NCBI数据库中24株洋葱伯克霍尔德菌的分子生物学信息,筛选出洋葱伯克霍尔德菌所特有的多个候选序列片段,设计能同时检出24株洋葱伯克霍尔德菌的特异性引物和探针,同时探索了LAMP法、基于PCR的SYTO 9染料法及Taqman探针法3种检测方法,优化筛选出最佳退火温度,并采用39株实验菌株对洋葱伯克霍尔德菌群检测方法开展了验证研究。结果采用LAMP法无法实现对洋葱伯克霍尔德菌群的有效检出,采用SYTO 9染料法和TaqMan探针法可以实现对20多株洋葱伯克霍尔德菌群的有效检出,而TaqMan探针法扩增效率更高,检测灵敏度、重复性、稳定性更好,能够满足本研究的要求。结论本研究建立了洋葱伯克霍尔德菌群的TaqMan探针快速检测方法,相较于LAMP法和SYTO 9染料法,该方法具有快速、简便和敏感性高等优点,为洋葱伯克霍尔德菌群的快速检测提供了技术支持。

双歧杆菌类微生态活菌制品的活菌含量研究及基因安全性分析

目的 聚焦双歧杆菌类微生态活菌制品活菌含量影响因素及测定方法、基因安全性等核心问题,开展相关研究和分析,为该类产品质量控制的提升提供参考和建议。方法 研究贮藏温度和活菌数测定方法对该类产品活菌计数的影响,并进行前处理方式和稀释液成分的优化;采用全基因组测序和功能基因组分析方法开展4种产品包含的11株菌的耐药基因和毒力基因分析。结果 研究结果表明,温度对双歧杆菌类微生态活菌制品的活菌计数结果影响较大,优化后的活菌计数方法可有效提高计数结果,该类活菌制品中有多株菌含有耐药基因和毒力基因。结论 建议在生产、储藏和流通等环节重点关注温度对产品的影响;活菌计数方法需考虑菌株特性和生产工艺等,对前处理方式和稀释液等影响因素进行优化;有必要对已上市的微生态活菌制品涉及的所有菌株进行系统性的安全性评估。

《中国药典》2015年版灭菌法的修订研究

目的:国家药典委员会“2017年度药品医疗器械审评审批制度改革专项课题”子课题之一《中国药典》灭菌法通则修订(课题编号:ZG2017-4-03),研究成果将作为《中国药典》2020年版灭菌法通则修订的参考。方法:在充分调研的基础上,通过查阅国内外相关法规和技术指南,结合我国无菌药品生产实际情况,提出相应的修订建议。结果与结论:无菌药品是药品中要求最为严格、风险最大的一类产品,受到污染的无菌药品一旦流入市场,会造成严重危害,甚至危及患者生命。建议《中国药典》灭菌法通则涵盖适宜灭菌方式的选择,灭菌工艺的开发及验证,以及日常生产控制、变更控制等方面,并体现质量源于设计和风险管理的理念。

叠氮溴化丙锭与实时荧光定量PCR结合检测地衣芽孢杆菌活菌制品中金黄色葡萄球菌

目的排除样品中高浓度活菌和大量辅料及死菌DNA的干扰,检测地衣芽孢杆菌活菌胶囊中金黄色葡萄球菌。方法将叠氮溴化丙锭(PMA)、实时荧光定量PCR(qPCR)和微孔膜过滤法相结合,收集滤液后离心,富集菌体,优化PMA工作浓度、暗孵育时间和曝光时间,确定PMA最佳处理方案。采用不同浓度金黄色葡萄球菌的死菌与活菌进行PMA-qPCR方法验证,同时考察方法灵敏度和特异性。结果样品采用5.0μm的聚醚砜膜过滤,辅料截留率和滤液活菌计数最高。PMA工作质量浓度40μg·mL^(-1),暗孵育时间10 min,曝光时间10 min为最佳处理方案,该处理方案下PMA既不影响活菌DNA的PCR扩增,又能进入死菌中结合DNA抑制其扩增。本法高效快速、实时准确,全过程筛选鉴定只需4 h,最低检测限为1×10^(4)CFU·mL^(-1)。结论本法灵敏度高、特异性强,适用于地衣芽孢杆菌活菌制品中金黄色葡萄球菌的检测。

PCR反应条件对16S rRNA基因扩增子测序准确性的影响

【背景】16S rRNA基因扩增子测序技术是一种不依赖培养而获得样本中细菌种群结构、相对丰度等信息的方法。高通量测序技术实验步骤较多,每一步骤细微的差别都可能在最终的测序结果中放大,并造成测序结果与实际情况的偏差。【目的】基于MiSeq测序平台,探讨PCR反应体系中扩增引物序列、退火温度、模板起始量、扩增循环数和变性时间等5个因素对16S rRNA基因测序结果的影响。【方法】对mock DNA的16S rRNA基因扩增子进行测序,分别分析不同的扩增引物、退火温度、模板起始量、循环数和变性时间对数据准确性的影响。【结果】不同的扩增引物对检测结果有较大的影响,采用的4组引物中,引物B(V3-V4,341F/806R)的准确性最好,引物A(V3-V4,341F/805R)次之。比较不同退火温度(52、55和60℃)对检测准确性的影响,退火温度60℃的结果最接近理论值。模板起始量(2、10和50 ng)的检测结果显示,mock DNA起始量为2ng的结果准确性最高。相较于其他3组(15+18、25+8和30+8),循环数为(20+8)的检测结果最接近mock DNA的理论值。不同变性时间(3 min和5 min)对分析结果无显著性影响。【结论】引物序列、退火温度、模板起始量和循环数是影响16S rRNA基因测序结果准确性的重要因素。

冠状病毒基因组资源库介绍

冠状病毒基因组资源库(Coronavirus Tracing,CoVTrac)是通过2019新型冠状病毒信息库(2019 novel coronavirus resource,2019nCoVR)、全球流行性感冒病毒数据库(Global Initiative on Sharing All Influenza Data,GISAID)和美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)等多个数据平台及自测方式收集冠状病毒基因组序列(包括2019新型冠状病毒),利用Java、Spring、Angular和MySQL等技术搭建的在线数据平台。CoVTrac数据库整合了包含α、β、γ、δ4个冠状病毒属共456条基因组序列,实现了数据提交、数据展示、进化溯源分析、基因功能注释和辅助分子实验设计等功能。CoVTrac数据平台可为包括新型冠状病毒在内的冠状病毒基因组的科学研究、流行病学调查和快速检测、药物研发等行业应用提供支持。