甘肃两种道地药材当归及党参中药饮片中微生物污染状况研究

目的:研究甘肃省市售的两种道地药材当归和党参中药饮片的微生物污染状况。方法:根据《中华人民共和国药典》(2015版)微生物相应的检查方法,对两种中药材饮片共计61批样品的需氧菌总数(total aerobic microbial count,TAMC)、酵母菌和霉菌总数(total combined yeasts and molds count,TYMC)、耐胆盐革兰阴性菌及沙门菌进行检查,初步了解市售当归、党参中药饮片的微生物负载量。结果:61批中药饮片样品的对数IgTAMC值介于2.05~6.30,IgTYMC值介于0.70~3.23,47.5%的样品检出耐胆盐革兰阴性菌,当归和党参饮片所有批次均未检出沙门菌。结论:中药饮片微生物污染状况严重,饮片的微生物限度标准亟待完善,饮片生产加工过程控制亟待加强。

甘肃省道地药材黄芪、甘草、板蓝根中药饮片的微生物污染状况研究

目的考查3种中药饮片黄芪、甘草、板蓝根中微生物污染状况。方法参照《中国药典》2015年版,检查3种共90批中药饮片样品的需氧菌总数(TAMC)、霉菌和酵母菌总数(TYMC)、耐胆盐革兰阴性菌(BGB)及沙门菌。结果 90批饮片样品的lgTAMC值为2.021~5.989,lgTYMC值为0.699~4.161,耐胆盐革兰阴性菌检出率为48.9%,2批甘草饮片样品中检出了沙门菌。挑取典型菌落经16s rRNA鉴定,污染微生物主要为肠杆菌科和芽孢杆菌科。结论中药饮片微生物污染状况严重,饮片的微生物限度标准亟待完善,饮片生产加工过程控制亟待加强。

基于高通量测序的6种甘肃道地药材中药饮片污染微生物群落特征研究

目的研究6种甘肃道地药材中药饮片中污染微生物的群落特征,建立6种中药饮片负载微生物的种属及其丰度信息数据库,为6种中药饮片微生物限度标准制定提供依据。方法收集市售当归、党参、黄芪、甘草、板蓝根和半夏6种中药饮片各30批,合计180批,参照2020年版《中国药典》,检查180批中药饮片样品的需氧菌总数(total aerobic microbial count,TAMC)、霉菌和酵母菌总数(total combined yeasts andmolds count,TYMC)、耐胆盐革兰阴性菌(bile-tolerant gram-negitive bacteria,BGB)及沙门菌,并基于16S rDNA高通量测序方法研究中药饮片中污染微生物的群落特征。结果180批样品均检出需氧菌、酵母菌和霉菌。lg(TAMC)的均值为3.16,最小值为0.70,最大值为6.30。lg(TYMC)的均值为1.71,最小值为0.70,最大值为3.26。102批检出耐胆盐革兰阴性菌。检出沙门菌2批。通过16S rDNA高通量测序对每种中药饮片进行了微生物多样性分析,建立了6种中药饮片负载微生物的种属及其丰度信息数据库,污染微生物分布于38个门、935个已鉴定属,不同类别中药饮片中的优势菌属具有明显差异。植株自身和加工储存环节引入是饮片微生物群落的两种重要来源。结论研究表明,16S rRNA高通量测序方法比传统培养法能够获得更加全面的中药饮片中污染微生物群落信息,不同类别中药饮片中的优势菌属具有明显差异。中药饮片微生物污染具有一定的致病风险,饮片的微生物限度标准亟待完善,饮片生产加工过程控制亟待加强。

基于高通量测序考察甘肃黄芪种植区根际土壤微生物群落结构及多样性

采用高通量测序技术,考察分析甘肃6个不同黄芪种植区黄芪根际微生物菌群结构特征。结果表明,甘肃黄芪种植的六个地区其根际土壤细菌分属于31个门、97个纲、211个目、330个科、614个属、共1163个种,根际土壤真菌分属于13个门、46个纲、98个目、202个科、412个属、共656个种。细菌在门水平的群落结构特征主要为放线菌门(Actinobacteriota)和变形菌门(Proteobacteria),其中宕昌县采集的样本中以变形菌门为优势菌群,其余地区为放线菌门。真菌在门水平的群落结构主要为子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)和被孢霉门(Mortierellomycota),六个种植地区优势真菌均为子囊菌门(Ascomycota),相对丰度均在75%以上。6个黄芪种植区中,基于种水平的微生物群落进行主坐标分析,宕昌黄芪种植区的根际土壤细菌群落结构和渭源县种植区根际土壤真菌群落结构组成不同于其它地区。

甘肃黄芪种植区根际土壤固氮细菌群落结构特征及多样性考察

目的考察甘肃6个黄芪种植区黄芪根际土壤微生物固氮细菌群落结构特征。方法采用高通量测序技术对nifH基因进行测序,分析黄芪根际土壤固氮细菌群落结构及多样性。结果甘肃黄芪的6个种植区根际土壤固氮细菌分属于2个域、2个界、7个门、12个纲、20个目、28个科、36个属,共51个种,结构特征主要为变形菌门(Proteobacteria)和蓝藻菌门(Cyanobacteria),其中变形菌门为优势菌门,相对丰度在74.3%~98.3%。在纲分类水平上,陇西、漳县、渭源和通渭4个地区采集的样本中以α-变形菌纲为优势菌纲,相对丰度分别为93.0%、85.4%、71.2%和97.2%;靖远采集的样本为γ-变形菌纲和α-变形菌纲,相对丰度为56.6%和31.7%,宕昌采集的样本为Unclassified-p-Proteobacteria和δ-变形菌纲,相对丰度分别为44.4%和30.3%。结论甘肃6个黄芪种植区根际土壤中,靖远和宕昌根际土壤固氮细菌群落多样性和丰度与其他4个地区有明显的差异,宕昌的固氮细菌多样性和丰度差异性最大。

清咽利嗓保健茶的抗炎作用研究

目的:探讨清咽利嗓保健茶抗炎作用。方法:选取昆明种小鼠50只,随机分为5组,每组10只,分别为模型组,阳性对照组,清烟利嗓保健茶高、中、低剂量组,观察灌胃给予不同剂量(2.7g/kg、1.8g/kg、1.2g/kg)清咽利嗓保健茶后对二甲苯所致小鼠耳肿胀度的影响;SD雄性大鼠50只,随机分为5组,每组10只,分别为模型组、阳性对照组、清烟利嗓保健茶高、中、低组,灌胃给予不同剂量(1.35g/kg、0.9g/kg、0.6g/kg)清咽利嗓保健茶,观察对大鼠角叉菜胶所致足肿胀的影响。结果:二甲苯致小鼠耳肿胀模型中,与模型组比较,清烟利嗓保健茶高剂量组、中剂量组小鼠耳肿胀度均有显著性差异(P<0.05);角叉菜致大鼠急性足肿胀模型中,与模型对照组比较,在致炎后1h、2h、3h、4h,高剂量组和中剂量组足肿胀度均有显著性差异(P<0.05)。结论:清咽利嗓保健茶可显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀及角叉菜胶致大鼠足肿胀,具有良好的抗炎作用。

响应面法优化破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯提取工艺

目的:优化破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯的提取工艺。方法:利用超声波法提取破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯,以甘油三油酸酯提取率为响应值,在提取条件单因素试验的基础上,根据响应面Box-Behnken试验设计,优化壁灵芝孢子粉的提取工艺。结果:破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯最佳提取参数为料液比0.1:25(g·mL-1),超声功率560W,超声时间30min。在此最优提取条件下,破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯提取率为5.01%。结论:本方法利用超声波提取法可以有效提取破壁灵芝孢子粉中的甘油三油酸酯。

基于多种算法建立牡蛎及石决明的拉曼光谱鉴别模型

目的利用拉曼光谱建立多种算法的定性模型,用于贝壳类动物药牡蛎和石决明的鉴别分析。方法采集32批牡蛎和29批石决明共计366个样品的拉曼光谱,光谱在Matlab软件中作Savitzky-Golay平滑滤波、Scale Normalization for ImagePyramids基线校正、归一化预处理,并对全部及特征波段进行主成分分析降维。使用K最邻近法、决策树算法、判别分析法、集成学习法、支持向量机、人工神经网络6种分类算法建立鉴别模型,通过贝叶斯优化对前5种模型性能进行提升。结果预处理后拉曼信号峰明显,降维后牡蛎和石决明有聚类趋势。建立以200~310,670~740,1050~1100 cm^(-1)为特征波段的5种算法鉴别模型,相比于全波段模型,除集成学习法、支持向量机外,其他算法准确率均有一定的提高。贝叶斯优化后,有3种模型训练集准确率达到98%,测试集准确率达到100%。采用人工神经网络建模分类,训练集、验证集、测试集的正确率均达到100%,能够准确地区分牡蛎和石决明。结论基于多种算法或IP建立了牡蛎及石决明拉曼光谱鉴别模型,预测效果均较为理想,其中人工神经网络模型可实现牡蛎和石决明的百分百准确、快速鉴别。