MicroRNAs:过敏性疾病的潜在新靶点

过敏性疾病包括过敏性哮喘、过敏性皮炎、过敏性鼻炎等,是一种多基因病,涉及环境、基因及免疫之间的相互作用,在过去几十年中发病率明显上升,严重影响人们的生活质量。寻求防治过敏性疾病的新靶点及不良反应少的药物成为研究者关注的热点。MicroRNAs(miRNAs)是一类单链非编码小分子RNA,通过在转录后水平降解靶位基因或抑制蛋白的翻译来调控靶位基因的表达,广泛参与细胞的增殖、分化、免疫反应及肿瘤的发生等多种生物学过程。研究发现miRNAs可调控过敏性疾病的发生发展。深入探讨miRNAs在过敏性疾病中的作用,对进一步揭示其病理机制及发现新的药物治疗靶点具有重要意义。

卡泊三醇诱导小鼠特应性皮炎模型的最适条件探索

目的探讨卡泊三醇(MC903)致小鼠特应性皮炎模型的建立方法。方法诱导剂量探索实验:从d 0起,于各剂量组BALB/c小鼠右耳分别涂布0.33、1、3 nmol MC903,连续诱导7 d。每天观察小鼠耳肿胀程度并测量双耳耳厚,分别于d 3、7取材分析。诱导时间探索实验:从d 0起,于BALB/c小鼠右耳涂布2 nmol·ear-1MC903,连续诱导至d14。每天观察小鼠耳肿胀程度并测量双耳厚,分别于d 3、7、11、15获取小鼠右耳组织进行病理组织学检查。制备小鼠右耳耳组织匀浆,检测匀浆中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、IL-33、IL-4、IFN-γ表达水平以及外淋巴结中DC细胞表面标记分子CD40+、CD86+和ILC2细胞百分含量的变化。结果 1每耳1、3 nmol MC903诱导的小鼠耳肿胀度从d 3开始显著增加,TSLP、IL-4水平明显增加,每耳3 nmol MC903剂量组IL-33水平于d 7明显增加。2每耳2 nmol MC903诱导的特应性皮炎小鼠从d 3起,小鼠右耳耳肿胀明显,耳厚逐渐增加,并于d 14达到峰值;小鼠耳组织病理组织学检查显示,从d 7起,小鼠右耳耳组织红肿,毛细血管扩张,炎性细胞浸润明显,耳部炎性症状维持并逐渐加重至d15;与正常小鼠相比,MC903使右耳组织匀浆中TSLP水平于d 3明显升高,随后逐渐下降,IL-4、IL-33水平于d 7明显升高,随后逐渐降低。外淋巴结中DC的表面标记分子CD40+、CD86+和ILC2的含量在d 7和d 15均有上升。结论每耳2 nmol MC903诱导小鼠7 d可成功建立小鼠特应性皮炎模型,TSLP较适检测点为d 3,IL-4、IL-33较适检测点为 d 7。

升麻素在大鼠体内的药代动力学研究

目的建立升麻素（cimifugin）血药浓度的高效液相色谱（HPLC）测定方法,研究其在大鼠体内的药代动力学特点.方法大鼠灌胃给予升麻素,取各时间点大鼠血浆,采用乙腈蛋白沉淀法,运用内标法进行HPLC检测,并用DAS2.1软件计算药代动力学参数.结果升麻素血药浓度的回归方程为Y=0.187X-0.0236,R^2=0.9982,其中升麻素在1～70mg·L^-1范围内线性关系良好,药时曲线符合二室开放模型,主要药代动力学参数Tmax、Cmax、T1/2α、T1/2z、Vd、AUC（0-t）、AUC（0-∞）分别为80min、10.359mg·L^-1、47.597min、93.131min、2.179L·kg^-1、1946.085mg·L^-1·min、2138.57mg·L^-1·min.结论建立了升麻素血药浓度方法,该方法专属性强,灵敏度高,可用于该药的体内定量分析.升麻素在大鼠体内被快速吸收达最大浓度,并发挥作用。

小鼠变应性接触性皮炎模型各时期IL-33水平探索

IL-33通过与二型固有淋巴细胞（group 2 innate lymphoid cells，ILC2s）。上的ST2和IL-1受体辅助蛋白（IL-1 RAcP）结合，参与多种过敏性疾病发病机制，是引发过敏性疾病的关键因素。上皮细胞可经刺激产生IL-33，作用于ILC2s并使其产生Th2型细胞因子，促进Th2型过敏性疾病的发生，如过敏性皮炎吲、哮喘㈨、过敏性鼻炎等。

过敏性疾病关键启动因子在人角质形成细胞中表达的适宜刺激方法探索

目的研究不同刺激条件对人角质形成细胞Ha Ca T细胞中TSLP、IL-33表达水平的影响,探讨过敏性疾病中关键启动因子TSLP、IL-33体外表达细胞模型的最佳刺激方法。方法应用角质形成细胞无血清培养液(K-SFM)体外培养Ha Ca T细胞,给予不同刺激剂,筛选出明显促进Ha Ca T细胞中TSLP和IL-33表达的刺激剂。进而考察单独与联合刺激剂时的量效关系,最后对选出的刺激剂进行时效关系考察。TSLP和IL-33表达水平采用ELISA和免疫荧光法检测。结果 (1)Poly(I:C)与TNF-α两种刺激剂单独使用时均能明显刺激Ha Ca T细胞分泌TSLP和IL-33,其余刺激剂在本实验浓度范围内未见明显差异。(2)Poly(I:C)100 mg·L-1与TNF-α20μg·L-1联合刺激对Ha Ca T细胞表达TSLP和IL-33的促进作用最为明显。(3)对Poly(I:C)100 mg·L-1与TNF-α20μg·L-1联合刺激Ha Ca T细胞的时效关系考察发现,刺激12 h Ha Ca T细胞中TSLP和IL-33的表达水平最高。结论不同刺激剂和刺激时间对体外刺激Ha Ca T细胞表达细胞因子TSLP和IL-33的效应不同,其中以Poly(I:C)100 mg·L-1与TNF-α20μg·L-1联合刺激Ha Ca T细胞12 h后,TSLP和IL-33的表达水平升高最为明显。该结果为过敏性疾病的病理机制及药物作用研究提供了合适的方法。

动脉粥样硬化中DNA甲基化与微小RNA的相互作用

动脉粥样硬化是心脑血管病的重要发病机制,能侵袭全身血管,其发病机制至今尚未完全阐明。DNA甲基化和微小RNA都属于表观遗传的重要内容,两者在动脉粥样硬化中都有重要作用。目前在动脉粥样硬化中已发现多种微小RNA出现异常表达,可能受甲基化的调节。DNA甲基化可以通过对微小RNA启动子区Cp G岛的甲基化修饰,直接调控微小RNA的表达;或通过改变转录因子甲基化状态,间接调节与其相关的微小RNA表达。微小RNA也可以通过调节甲基转移酶的表达进而调节DNA甲基化。两者相互调节机制构成了基因表达的复杂网络,为动脉粥样硬化发病的分子机制研究提供了新思路。

上皮间质转化与哮喘气道重塑的研究进展

支气管哮喘是一类以气道重塑为病理基础的呼吸道疾病,反复的炎性浸润与组织损伤修复可导致气道重塑,目前有关气道重塑形成的机制尚不全面。研究表明,上皮间质转化在气道重塑的发生和发展过程中发挥重要作用。气道上皮可通过分泌多种因子及信号通路诱发间质转化,进而导致哮喘气道重塑。该文对上皮间质转化与哮喘气道重塑之间的研究进行综述,为临床后续哮喘治疗和研究提供参考。

麻黄-甘草药对抑制Th2型变应性接触性皮炎的作用及机制探讨

目的研究麻黄-甘草药对对Th2型变应性接触性皮炎(Allergic contact dermatitis,ACD)的影响及机制。方法采用不同浓度异硫氰酸荧光素(FITC)诱导BALB/c小鼠建立Th2型ACD模型及诱导初期ACD模型。HE染色观察小鼠耳组织病理学变化,测量小鼠耳肿胀,ELISA法检测小鼠耳组织Th2细胞因子水平及胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)蛋白水平,用qPCR检测小鼠耳组织TSLP mRNA水平,Poly(I∶C)和TNF-α联合刺激HaCaT细胞,检测细胞分泌的TSLP蛋白水平。结果 Th2型ACD模型中,与模型组小鼠比较,麻黄-甘草2.34g/kg和7.02g/kg组均明显抑制小鼠耳肿胀,减少耳组织炎性细胞浸润;麻黄-甘草2个剂量组均显著降低耳匀浆中IL-4水平,麻黄-甘草7.02g/kg组明显降低IL-13水平。诱导初期Th2型ACD模型中,与模型组比较,麻黄-甘草药对显著降低耳匀浆TSLP的基因及蛋白表达,体外麻黄-甘草药对及其主要单体成分同样抑制TSLP的分泌。结论麻黄-甘草药对具有抑制过敏性炎症的作用,其作用机制可能是通过减少TSLP的分泌。

异黄酮类植物雌激素防治过敏性疾病研究进展

异黄酮类植物雌激素是生物黄酮中的一种,其对于机体免疫系统具有调节作用。研究表明,异黄酮类植物雌激素能够维持Th1/Th2平衡,调节免疫细胞及增加宿主对食物致敏原耐受等作用,从而改善过敏症状。该文对异黄酮类植物雌激素对过敏性疾病的作用及其机制做一综述,以期促进其研发利用。

锌指蛋白A20在过敏性哮喘中的研究进展

锌指蛋白A20(也称TNFAIP3)是一种可在多种炎症条件,如LPS、IL-1、TNF-α等刺激下,被激活的具有去泛素化和泛素化双重功能的胞质蛋白。目前,A20被认为是NF-κB的负调控因子,具有免疫调节作用。最新研究表明,A20参与了过敏性哮喘的发生和发展。因此,该文对A20的起源、结构、生物学功能及其在过敏性哮喘中的作用进行综述,以期为过敏性哮喘的治疗和预防提供新的方法和思路。

升麻素通过调节2型细胞因子抑制过敏性炎症

目的:建立异硫氰酸荧光素(FITC)诱导的Th2型变应性接触性皮炎(Allergic contact dermatitis,ACD)模型,观察升麻素是否具有抑制过敏性炎症的作用并探讨初步的作用机制。方法:BALB/c小鼠在d1、d2天用FITC溶液腹部致敏皮肤2次,同时给药至d5天(诱导相),d6天用FITC溶液攻击小鼠右耳,24h后测定小鼠耳肿胀程度及小鼠两耳重量,取耳组织做耳病理学检查,同时部分耳组织制备匀浆,用ELISA方法检测IL-4、IL-9、IL-13及IFN-γ的水平。结果:升麻素25 mg/kg、50 mg/kg诱导相给药能显著抑制小鼠耳肿胀;耳组织病理学显示,给予升麻素组小鼠局部组织液的渗出、充血、淋巴细胞浸润等炎症状态明显减轻;同时能显著降低小鼠耳组织匀浆中2型细胞因子IL-4、IL-9、IL-13水平,而对IFN-γ水平未见明显影响。结论:升麻素诱导相给药对FITC诱导的小鼠Th2型变应性接触性皮炎有抑制作用,其作用机制可能与调节2型细胞因子有关。

从血清成分分析探寻玉屏风散的抗过敏效应物质

目的：探索玉屏风散（YPFS）诱导初期给药对Th2（Ⅱ型辅助性T细胞）型接触性超敏反应的效应，并利用HPLC-MS（液质联用）法测定玉屏风散含药血清中的成分。方法：Th2型接触性超敏反应造模采用Balb／c小鼠第1，2天用1．5％的异硫氰酸荧光素（FITC）溶液致敏腹部皮肤，第6天用0．6％的异硫氰酸荧光素（FITC）溶液攻击小鼠耳部皮肤，24h后测定小鼠耳厚和耳重。致敏前给予地塞米松ip剂量为0．67mg·kg-1，YPFS（3．25，6．5g·kg-1，ig），毛蕊异黄酮（0．5，5，10mg·kg-1，ip），芒柄花素（0．5，5，10mg·kg-1，ip）2d，并在致敏第1～3天继续给药3d，第4天停止给药（诱导初期给药）。含药血清检测采用ICR小鼠每天给予YPFS醇提物，连续给药3d，空白对照组给予等体积的生理盐水。最后1次给药后1h取血处死动物。血清经过乙酸乙酯萃取处理后，利用HPLC-MS法进行测定。结果：与正常组相比，模型组小鼠耳肿胀度及耳重显著增加（P〈0．01）。玉屏风散醇提物3．25，6．5g·kg-1诱导初期给药能显著抑制小鼠耳肿胀度（P〈0．01或P〈0．05），减轻过敏性炎症。玉屏风散醇提物含药血清经HPLC-MS测定出3个主要成分，经鉴定分别为升麻素、毛蕊异黄酮、芒柄花素。毛蕊异黄酮和芒柄花素5，10mg·kg-1诱导初期给药能显著抑制Th2型接触性超敏反应模型小鼠耳肿胀度，芒柄花素10mg·kg-1诱导初期给药显著降低耳重。结论：玉屏风散诱导初期给药能显著抑制FITC诱导的小鼠Th2型变应性接触性皮炎的耳肿胀度，含药血清测得的入血成分经过药效学实验验证，对Th2型过敏反应有抑制作用，表明血清中存在抗过敏作用的活性成分。

黄芪甲苷通过抑制Th2型细胞因子减轻变应性接触性皮炎

目的:应用异硫氰酸荧光素(FITC)诱导的Th2型小鼠变应性接触性皮炎的模型,评价黄芪甲苷(AS-IV)对Th2过敏性皮炎的作用。方法:BALB/c小鼠在day 1,day 2用1.5%的FITC溶液致敏腹部皮肤2次,同时给予地塞米松ip剂量为0.67 mg·kg-1,AS-IV(6.25,12.5,25,50 mg·kg-1,ig)至day 5(诱导相给药),day 6用0.5%FITC溶液攻击小鼠耳部皮肤,24 h后测定小鼠耳肿胀程度,耳组织HE染色,同时部分耳组织制匀浆以ELISA方法检测白介素(IL)-4,IL-13,IL-9水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠耳肿胀明显,耳组织真皮层明显水肿,炎症细胞大量浸润,Th2型细胞因子IL-4,IL-13,IL-9水平显著升高;黄芪甲苷25,50 mg·kg-1诱导相给药能显著抑制模型的耳肿胀度;病理组织学检查亦显示与模型组比较,给予黄芪甲苷小鼠的耳炎症反应减轻,炎细胞浸润明显减少;同时能显著降低耳组织匀浆中IL-4,IL-13,IL-9水平。结论:黄芪甲苷诱导相给药对FITC诱导的小鼠Th2型变应性接触性皮炎有显著的抑制作用,该作用与抑制Th2型细胞因子的产生有关。

癃闭通颗粒对大鼠慢性前列腺炎模型的影响

目的:研究癃闭通颗粒对慢性前列腺炎模型大鼠的治疗作用以及对正常大鼠的利尿作用。方法:采用消痔灵致雄性Wistar大鼠慢性前列腺炎模型,观察癃闭通颗粒对前列腺液内白细胞数、卵磷脂小体密度、前列腺组织匀浆中IL-8、TNF-α、IL-1β等的影响。采用给予一定水负荷方法,观察癃闭通颗粒对正常大鼠的利尿作用。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型和大鼠棉球肉芽肿模型,观察该药的抗炎作用。结果:癃闭通颗粒0.27g/kg～2.40g/kg均可降低前列腺液中白细胞数;0.80g/kg起能升高卵磷脂小体密度;0.80g/kg起能降低前列腺组织匀浆中IL-8、TNF-α、IL-1β的水平。癃闭通颗粒0.80g/kg起对正常大鼠具有利尿作用。癃闭通颗粒2.40g/kg能抑制二甲苯引起的耳廓肿胀;0.27g/kg起抑制模型大鼠的棉球肉芽肿肿胀度。提示癃闭通颗粒主要的效应剂量范围为0.80～2.40g/kg。结论:癃闭通颗粒能抑制大鼠慢性前列腺炎的炎细胞浸润,提高卵磷脂小体密度,降低前列腺组织炎性细胞因子的水平。同时具有利尿作用和抗炎作用,有利于前列腺炎的症状缓解和炎症消除。