基于MRI技术定量测量单侧肾动脉狭窄动物模型肾脏氧摄取分数的初步研究

目的:验证基于血氧水平依赖(BOLD)的多回波梯度自旋回波(MEGSE)序列无创定量测量肾脏氧摄取分数(OEF)等氧代谢指标参数的可行性。方法:15只健康新西兰大白兔入组研究。对每只兔子施行左肾动脉部分结扎手术以造成单侧肾动脉狭窄(RAS)动物模型。行MRI扫描采集3个不同时刻的MEGSE数据,分别为基础状态、RAS术后30min(RAS-30min)和RAS术后60min(RAS-60min),以获得肾脏动脉狭窄造模前后的肾脏OEF值。结果:15只兔子均造模成功。在RAS术前测得的肾脏基础状态下OEF值为(0.36±0.08)(皮质)和(0.39±0.11)(髓质)。RAS术后30min和60min测得的OEF显著增大分别为(0.46±0.14)(皮质,RAS-30min,P<0.05)、(0.51±0.12)(髓质,RAS-30min,P<0.05)、(0.46±0.13)(皮质,RAS-60min,P<0.05)、(0.56±0.09)(髓质,RAS-60min,P<0.05)。结论:本研究验证了MEGSE序列可以无创、定量测量肾缺血状态下的OEF改变,为将来进一步应用于人类肾脏氧摄取分数的测量奠定了基础。

5-羟色胺在胆管上皮细胞与门管成纤维细胞自分泌/旁分泌中的作用

目的探讨5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)在胆管上皮细胞(biliary epithelia cells,BECs)与门管区成纤维细胞(portal fibroblasts,PFs)之间自分泌/旁分泌效应中的意义,阐述两种细胞之间的相互作用。方法体外细胞培养分为6组:1)BECs组单独培养;2)BECs+TGF-β1组,BECs单独培养,用2 ng/ml重组TGF-β1干预24 h后更换培养液;3)BECs+5-HT组,BECs单独培养,以60 ng/ml的5-HT干预48 h后更换培养液;4)PFs组单独培养;5)PFs+5-HT组,PFs单独培养,以60 ng/ml的5-HT干预48 h后更换培养液;6)BECs+PFs,共同培养。各组均在培养72 h后,以酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测培养介质内5-HT、TGF-β1含量;实时荧光定量多聚酶链反应(QRT-PCR)检测BECs内色氨酸羟化酶(TPH1、TPH2)和5-HT受体1A、1B表达;以BrdU、α-SMA分别作为BECs增殖及PFs转化为肌纤维母细胞(myofibroblasts,MFs)的标志,免疫细胞化学检测。结果单独培养的BECs表达5-HT合成限速酶TPH1、TPH2及5-HTR1A、5-HTR 1B,5-HT分泌较高而BECs增殖不明显;经TGF-β1处理或与PFs共培养后,TPH1、TPH2表达各减少80%和87%,5-HTR1A、5-HTR1B表达分别减少75%和85%,BECs增殖明显。单独培养的PFs分泌TGF-β1,部分呈α-SMA阳性的MFs;经5-HT处理或与BECs共培养后,TGF-β1表达及MFs显著增加。结论 BECs来源的5-HT以及PFs来源的TGF-β1介导BECs与PFs之间的自分泌与旁分泌效应,维持BECs增殖和PFs向MFs的转化,在胆管病发病机制中可能具有重要意义。

新法规体系下全自动化学发光免疫分析仪注册申报重点内容解析

目的:探讨新法规体系下全自动化学发光免疫分析仪注册申报的重点内容,为相关企业及申报单位提供参考。方法:根据全自动化学发光免疫分析仪的特点,结合新发布的《医疗器械注册管理办法》的注册申报资料要求,通过查阅相关文献,对综述资料、研究资料、产品技术要求和产品说明书等重点文件的资料要求进行解析。结果:对注册申报资料中的重点内容,提出了诸如根据申报产品的特点按照反应步骤写明工作原理,重点对免疫反应部分及光检测装置部分进行详细描述等指导性建议。结论:文中解析均为目前仪器评价过程中常用的方法,可以指导相关企业或注册申报单位准备注册申报资料,企业应当依据拟申报产品的具体特点选择适用的内容。

5-羟色胺受体2A在大鼠肝移植术后胆管纤维化中的作用

目的探讨5-羟色胺受体2A亚型（5-HT2A）在大鼠肝移植术后胆管纤维化中的作用及意义。方法建立再动脉化大鼠原位肝移植模型，分以下4组。对照Ⅰ组和对照Ⅱ组，供肝分别冷保存1和12h后行原位肝移植术；实验组：在对照Ⅱ组基础上，于术后24h起腹腔注射选择性5-HT2A拮抗剂Ketanserin 5 mg·kg^-1·d^-1，直至术后4周观察期结束；假手术组（大鼠仅行开腹和关腹操作，不行肝移植）。术后1d、3d、1周、2周和4周，检测胆道酶系血清碱性磷酸酶、谷氨酰转肽酶、胆红素总量含量以评价胆道功能，采用酶联免疫吸附试验检测肝组织5-HT的含量，以增殖细胞核抗原免疫组织化学染色评价胆管上皮细胞（BEC）的增殖情况。术后4周采用Masson三色染色法观察胆管周围胶原纤维的分布；以α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）作为门管区成纤维细胞（PF）转化为肌纤维母细胞（MF）的标志，进行免疫组织化学染色。术后1、2和4周，采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测肝组织内基质金属蛋白酶2（MMP2）和前胶原α1 mRNA的表达。结果与假手术组相比，对照Ⅰ组仅术后1d胆道酶系及5-HT含量升高，术后3d少量BEC增殖，各时点肝组织MMP2和前胶原α1 mRNA的表达无显著增加；术后4周门管区未见或仅见少量胶原纤维及MF。与此相反，对照Ⅱ组和实验组术后1d胆道酶系显著升高，随后下降，术后2周时接近假手术组水平，但术后4周又显著升高，且对照Ⅱ组显著高于实验组，差异有统计学意义（P〈0．05）；两组术后各时点5-HT的含量均显著高于对照Ⅰ组，峰值出现于术后1d，实验组含量有低于对照Ⅱ组的变化趋势，并在术后4周时差异有统计学意义（P〈0．05）。对照Ⅱ组术后3d直至观察期结束可见BEC活跃增殖；术后2周和4周肝组织MMP2和前胶原α1 mRNA的表达显著增加；术后4周门管区可见大量胶原纤维和MF。实验组BEC增殖低于对照Ⅱ组，至术后2周和4周时差异有统计学意义（P〈0．05）；术后2周和4周时肝组织MMP2和前胶原α1 mRNA的表达显著低于对照Ⅱ组，术后4周门管区胶原纤维和MF较对照Ⅱ组明显减少（P〈0．05）。结论选择性5-HT2A拮抗剂Ketanserin可延缓冷缺血时间延长引起的大鼠移植肝胆管纤维化，5-HT2A可能是潜在的肝移植后缺血性胆道疾病的干预靶点。