重组血型抗原结合黏附素的免疫原性初步探讨

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)血型抗原结合黏附素(blood group antigen-binding adhesin,babA)基因,表达纯化重组BabA蛋白;初步探索口服免疫BabA配伍双突变大肠埃希菌(E.coli)热不稳定毒素(double mutant heat-labile toxin,dmLT)佐剂在BALB/c小鼠中的免疫保护作用。方法从Hp SS1株基因组DNA中扩增babA编码基因,构建原核表达质粒pET28a-babA,转化入E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,His标签纯化。将纯化的BabA蛋白配伍dmLT免疫佐剂口服免疫BALB/c小鼠,生理盐水对照;末次免疫后2周小鼠眼眶静脉采血分离血清,分析特异性体液免疫应答;然后进行Hp胃部活菌感染,感染27周采集脾淋巴细胞进行细胞免疫分析并对小鼠胃部细菌定植量进行检测。结果重组质粒pET28a-babA基因序列正确;重组蛋白BabA以包涵体形式表达,相对分子质量56000,纯度为95.9%;重组BabA蛋白配伍dmLT佐剂口服免疫小鼠可诱导产生针对BabA的血清IgG抗体,抗体水平明显高于对照组(P=0.0018,P<0.05)。活菌感染后27周检测到分泌IL-4和IL-17细胞因子的脾淋巴细胞数量明显高于对照组(P=0.0022和0.0043,P均<0.05),小鼠胃部Hp定植量有降低趋势。结论重组BabA蛋白经原核表达镍柱纯化,配伍dmLT佐剂口服免疫BALB/c小鼠,其体液免疫和细胞免疫应答效果明显,对小鼠胃部Hp定植量有降低作用,可作为Hp蛋白疫苗的潜在候选抗原。