幽门螺杆菌在BALB/c小鼠中的定植及初步评价

目的 建立长期、稳定定植于小鼠胃部的幽门螺杆菌动物模型,并进行免疫反应检测分析。方法 用灌胃针灌喂小鼠幽门螺杆菌3次后,定期处死并进行胃组织幽门螺杆菌培养试验、PCR鉴定、组织切片染色、快速尿素酶试验、胃组织病理学检查、血清抗幽门螺杆菌抗体检测及细胞免疫分析。结果 6周龄小鼠观察至32周,3周龄小鼠观察至12周时,幽门螺杆菌定植量均稳定在约104个CFU/g胃组织;诱导产生的血清抗幽门螺杆菌IgG抗体水平均在10周时到达峰值,并一直维持较高水平;粪便中均未检测到特异性sIgA抗体;3周龄小鼠感染幽门螺杆菌2周时的流式细胞术检测结果显示,肠道上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes,IELs)IL-17和IFNγ反应较未感染对照组小鼠均有降低趋势;胃组织切片染色分析显示,定植小鼠从感染后第6周胃部开始出现病理变化。结论 获得了幽门螺杆菌在BALB/c小鼠中的长期稳定定植模型,观察到组织病理变化和显著的血清IgG抗体反应,粪便中未观察到特异性sIgA反应,3周龄小鼠观察到Th1及Th17反应有降低趋势,为治疗性疫苗候选抗原的评价奠定了基础。

BALB/c小鼠口服幽门螺杆菌裂解物配伍dmLT佐剂诱导黏膜局部及系统性免疫应答

目的观察口服免疫幽门螺杆菌(Hp)裂解物配伍黏膜佐剂双突变大肠埃希菌热不稳定毒素(double mutant heat-labile toxin,dmLT)在BALB/c小鼠中诱导抗Hp免疫保护效果,分析相关免疫应答特点。方法将SS1(Sydney strain 1)株Hp裂解物配伍佐剂dmLT经口服免疫BALB/c小鼠后,进行幽门螺杆菌胃部活菌接种。对照组小鼠给予口服生理盐水,每只200μl。感染后6周检测幽门螺杆菌胃部定植量,采集血清、脾脏、肠系膜淋巴结、小肠、盲肠、粪便等样本进行相关免疫应答分析。结果抗原配伍佐剂免疫组小鼠与对照组相比较胃部幽门螺杆菌定植量降低;血清中检测到比对照组更强的特异性IgG抗体反应,IgG亚型主要以IgG1为主,且IgG1/IgG2a比值显著高于对照组;小肠、盲肠、粪便中均检测到较高的sIgA,小肠中最为显著,而对照组中均未有明显sIgA反应;脾和肠系膜淋巴结中IL-17+CD4+T比例与对照组相比较显著升高。结论口服免疫Hp裂解物配伍佐剂dmLT诱导黏膜局部及系统性免疫应答,增强BALB/c小鼠抗幽门螺杆菌感染,与显著增强的Th17免疫应答,以及Th细胞中Th2的极化相关,该结果为进一步评价dmLT作为黏膜佐剂用于幽门螺杆菌重组蛋白疫苗提供了实验资料。

cGAMP可显著增强BALB/c小鼠对幽门螺杆菌蛋白抗原的免疫应答

目的评价环鸟-腺二核苷酸(cGAMP)在非口服幽门螺杆菌蛋白类疫苗研发中作为佐剂的免疫增强效果。方法以cGAMP为佐剂,与幽门螺杆菌蛋白抗原,包括UreA、UreB和NapA混合,通过皮下途径注射免疫BLAB/c小鼠,同时设置单独抗原组和佐剂组对照,以间接ELISA法测定免疫前后血清中抗原特异性IgG抗体和盲肠灌洗液中IgA抗体;流式细胞术分析脾及腹腔淋巴结(MLN)中T淋巴细胞IFN-γ分泌水平;酶联免疫斑点(ELISpot)分析脾淋巴细胞中抗原特异性IFN-γ的分泌水平。结果cGAMP可促进小鼠抗幽门螺杆菌蛋白抗原的特异性IgG抗体应答;流式细胞术及ELISpot技术检测结果显示cGAMP可促进淋巴细胞抗原特异性IFN-γ的分泌。结论cGAMP作为一种稳定的小分子化合物佐剂,通过皮下免疫途径,虽然不能诱导较强的黏膜sIgA抗体反应,但是可诱导较强的特异性T淋巴细胞反应和血清特异性IgG抗体应答,显著减少疫苗中抗原用量,为非口服幽门螺杆菌疫苗研发提供了一种新思路。