关于中国生物技术股份有限公司加强企业文化建设的思考

面对迅猛发展的生物医药浪潮和中生股份改革改制走向纵深的新形势,企业必须高度重视企业文化建设,将企业文化作为企业核心竞争力的重要组成部分,加快构建富有时代精神和生物医药行业特点的企业文化。

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离恶性疟原虫pfs25膜蛋白的免疫原性研究

目的:研究聚丙烯酰胺凝胶电泳法纯化的pfs25蛋白的免疫原性变化。方法:利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分离了毕赤酵母表达的恶性疟原虫pfs25膜蛋白,按照常规程序将分离的pfs25膜蛋白免疫小鼠,以验证其免疫原性。通过荧光光谱分析、酶联免疫吸附实验,分析了聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中pfs25蛋白质免疫原性的变化情况。结果:SDS-PAGE方法成功分离了pfs25蛋白,免疫小鼠后不能产生特异性抗体;与pfs25标准品相比,纯化的pfs25蛋白的荧光光谱发生了改变,但是ELISA结果均为阳性。结论:聚丙烯酰胺凝胶电泳法纯化的pfs25蛋白保留了其免疫反应性,丧失了免疫原性。

略论中国生物技术股份有限公司责任文化建设

生物医药的行业特点决定了责任文化是企业文化建设的核心。加快构建和完善以责任文化为核心的企业文化建设体系,加强责任文化建设的组织与实施,能够有效提高企业竞争力,推进企业全面可持续发展。

肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体定量ELISA检测及质量控制要求

检测肺炎链球菌荚膜多糖(PPS)特异性抗体的酶联免疫吸附试验多年来经历了两次主要改进。介绍了WHO推荐的人血清抗肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)荚膜多糖抗体IgG定量ELISA(Pn PS ELISA)检测方法、关键试剂、局限性以及方法验证等内容。ELISA定量检测法,为预防肺炎链球菌的婴幼儿侵袭性疾病提供准确的抗体水平,并对肺炎链球菌疫苗的临床评价提供血清学证据。人血清中肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG是判断肺炎链球菌疫苗效力的重要指标。

国有企业法律风险防范及控制分析

市场竞争日益激烈,而作为市场主体的国有企业面临的风险也会不断增加。本文重点分析了兰州公司在生产经营管理流程中存在的主要法律风险,分别对识别出的重点风险提出应对及处置措施,防范法律风险的发生,化解法律风险给兰州公司发展带来的威胁,可以为国有企业健康持续的发展保驾护航。

恶性疟原虫Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达策略的研究

目的:探索Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达策略,提高Pfs25蛋白的表达量。方法:本研究主要通过4个方面深入研究Pfs25蛋白的高效表达策略。①构建Pfs25蛋白的诱导型表达重组株pPICZαA-Pfs25/GS115和组成型表达重组株pGAPZαA-Pfs25/GS115,并比较两酵母菌株的表达量差异。②从培养基、pH值、表达时间等方面入手,分别对诱导型和组成型分泌表达条件进行研究,寻找适合Pfs25蛋白表达的最佳条件。③利用pAO815表达载体构建Pfs25多拷贝重组酵母菌株pAO815-(α-Pfs25)n/GS115,通过提高pfs25基因拷贝数来提高表达量。④将毕赤酵母中蛋白二硫键异构酶(PDI)基因引入Pfs25重组酵母中,以提高Pfs25蛋白的分泌表达。结果:本研究成功构建了Pfs25诱导型和组成型表达重组酵母菌株,实现了Pfs25的诱导型和组成型表达,组成型表达量略高于诱导型。并通过对各种表达条件的比较研究,找到了适合Pfs25蛋白在毕赤酵母中高效分泌表达的条件。结论:通过对Pfs25蛋白高效表达策略的研究,显著提高了Pfs25蛋白在毕赤酵母中的分泌表达水平,使其表达量提高了约5倍。

国有企业招标工作问题研究

招标是一种规范化竞争手段的交易方式,国有企业在工程基建、设备采购等工作中通过招投标方式,选择成本、质量综合相对优势的、在行业内有优良业绩的供应商、承包商,以达到降低成本、提高经济效益,实现公司利益最大化。目前法律对国有企业招投标工作规定不是很完善,规范力度不够,导致国有企业在招投标管理中存在一定的困难。本文在总结多年招评标工作经验基础上,对招评标管理进行一定程度的分析和研究,总结了国有企业在招评标工作中存在的问题和相应对策。

恶性疟原虫pfs25多拷贝基因在毕赤酵母中的表达分析

目的:对恶性疟原虫pfs25的多拷贝基因重组菌株在毕赤酵母中进行表达分析,研究基因拷贝数对Pfs25蛋白表达量的影响。方法:构建重组质粒pAO815-αpfs25,利用BglⅡ-BamHⅠ同尾酶的特点,将基因表达框AOX1-αpfs25-AOX1(TT)插入到单拷贝表达质粒,依次重复,构建多拷贝重组质粒pAO815-(αpfs25)n,线性化后电转化毕赤酵母GS115,用MD平板筛选并进行表达分析。结果:构建得到1、2、3、4、5、6、7、8、10、12和14个pfs25基因拷贝的重组菌株,8拷贝pfs25基因的重组菌株表达量最高。结论:成功得到了pfs25基因的多拷贝表达重组菌株,经分析,多拷贝pfs25基因的目的蛋白表达量与其拷贝数并不呈线性正相关。

构建真核表达载体实现恶性疟原虫膜蛋白pfs25在CHO细胞中的重组表达

构建一种可实现外源基因高效的、适用于中华仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞的质粒表达系统,并成功实现了恶性疟原虫膜蛋白pfs25基因在CHO细胞中的表达。新构建的真核表达载体是在pBudCE4.1质粒载体上改造获得的,被命名为pCMV-WD,包含了人工合成的、完整的弱化SV40启动子与二氢叶酸还原酶(DHFR)基因组成的顺式表达元件和全新设计的多克隆位点,该载体属于CHO细胞通用载体,理论上可以实现任何外源基因在CHO细胞中的表达。基于该载体,采用定向克隆策略插入了恶性疟原虫膜蛋白pfs25基因,构建的重组表达质粒为pfs25/pCMV-WD。经zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+基因阳性的细胞克隆。对表达量最高的克隆株进行亚克隆,并经MTX加压筛选以获得高表达pfs25蛋白的CHO细胞株。ELISA和Western Blot结果表明,重组pfs25蛋白具有良好的免疫学反应性,且表达量为0.1 mg/mL。该研究首次获得了可分泌重组pfs25蛋白的CHO细胞株。

人脑膜炎球菌参考血清 Men10的制备及其抗A、C、Y、W135群脑膜炎血清群荚膜多糖抗体IgG含量和体外杀菌试验滴度

目的：制备人脑膜炎球菌参考血清，对其中A、C、Y、W135血清群的抗荚膜多糖抗体IgG含量和体外杀菌试验（ serum bactericidal assay ， SBA）滴度进行定值。方法用4价A、C、Y、W135群脑膜炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人，采集免疫后的血浆进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干，得到人脑膜炎球菌参考血清Men10。在兰州生物制品研究所有限责任公司（ LIBP ）实验室，用标准检测人血清中抗脑膜炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法，以国际标准血清CDC1992为标准，对其中4个血清群抗荚膜多糖抗体IgG含量定值；以临时定值的Men10和CDC1992分别为标准检测12份美国疾病预防控制中心（ CDC）的校正血清、56份4价多糖疫苗免疫后的血清，通过比较对定值的准确性进一步验证。同时以体外杀菌试验测定针对4个血清群的SBA滴度。结果制备了4000支（0．5 ml/支）冻干人脑膜炎球菌参考血清Men10。该血清HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋体检测均阴性，残留水分含量2．3％。以Men10为标准检测的12份CDC校正血清和56份4价多糖疫苗免疫后的血清群抗荚膜多糖抗体结果，与以CDC1992为标准检测的结果均具有良好的直线相关关系（ r＝0．99，P＜0．05）；以Men10为标准检测的CDC1992的4个血清群抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较，各血清型的误差均＜10％。同时确立了Men10中各血清群的体外杀菌试验滴度。结论 LIBP成功制备了人脑膜炎球菌参考血清Men10并完成了对其中的4个血清群抗荚膜多糖抗体IgG含量的准确定值，并确定了其中各群别抗体的体外杀菌试验滴度。

恶性疟原虫Pfs25基因在毕赤酵母中三拷贝串联分泌表达

目的:Pfs25蛋白是传播阻断型疟疾疫苗重要的候选抗原,然而,I期临床研究显示该蛋白在人体内只能激发较弱的免疫应答,如何提高Pfs25蛋白质的免疫原性成为研究重点。已有的研究表明:体外通过化学偶联方法获得的Pfs25蛋白聚合物,能显著提高其免疫原性。方法:本文从基因水平,利用同尾酶的特性构建串联的Pfs25基因三拷贝融合基因(Pfs25)3,每个单拷贝基因由连接臂(linker)连接,以保证每个单体Pfs25蛋白的活性不受影响。构建重组质粒(Pfs25)3/pPICZαA[或(Pfs25)3/pGAPZaA]电转毕赤酵母菌,获得酵母重组体。在三角瓶规模表达重组菌并初步纯化了目的蛋白(Pfs25)3。结果:ELISA和SDS-PAGE检测表达上清,显示有弱阳性表达。获得了纯度为83%的纯品蛋白。结论:在毕赤酵母中实现了Pfs25基因的三拷贝串联表达,为恶性疟疾疫苗的研发奠定了基础。

成人免疫ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后血清中抗体水平的动态分析

目的：从血清抗体体外杀菌功能和IgG含量角度观察健康成人接种一剂ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗后不同时间体内抗体的动态水平，探讨抗体功能和含量的相关性和疫苗的保护期限。方法对20名健康成人接种一剂四价脑膜炎多糖疫苗，分别采集免疫前和免疫后不同时期的血清。采用血清杀菌试验（SBA）和标准定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中杀菌抗体滴度和抗荚膜多糖IgG抗体含量。结果成人免疫前血清中存在一定水平的抗A、C、Y和W135群荚膜多糖抗体，并且除C群外，血清中针对A、Y和W135群球菌的杀菌抗体滴度都较高。免疫15d后，各群荚膜多糖抗体的含量和血清杀菌抗体滴度都较免疫前有了明显的升高（P＜0．05），并且在30～160d维持在较高的水平；免疫后近3年时杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度降至免疫前水平。血清杀菌抗体滴度和IgG抗体浓度之间相关关系较弱（r＜0．3，P＞0．05），但免疫前后不同时间的受试者的血清杀菌抗体几何均数滴度（GMTs）和IgG抗体几何均数浓度（GMCs）之间具有良好的相关关系（r＞0．7，P＜0．05）。结论受试者免疫前后不同时间血清杀菌抗体GMTs和IgG抗体GMCs，在评价疫苗效果时具有一致性。接种ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗有效期大约3年。

从疫苗生产企业视角解读《疫苗管理法》

《疫苗管理法》是针对疫苗特点制定的一部特别法律,对疫苗各环节、各相关部门、相关人员责任进行规定,并用最严厉的法律责任制约疫苗生产企业及从业人员。同时督促疫苗生产企业依法建立相关制度,改进措施,保障疫苗的安全性和质量可控性,维护广大人民的身体健康。