不同直径层析柱纯化人凝血因子Ⅷ效果的比较

目的通过比较RJ300型和GE450型层析柱对人凝血因子Ⅷ(human coagulation factor Ⅷ, F Ⅷ)的纯化效果, 探究GE450型层析柱纯化FⅧ的适用性。方法分别采用2种层析柱各制备3批FⅧ制品, 按照中国药典2020年版三部的要求对制品进行检测, 比较2种层析柱制备的FⅧ原液的回收率、比活性、洗脱峰的峰形差异、杂蛋白去除效果以及成品的检定结果, 并进行产品稳定性考察。结果 RJ300型和GE450型层析柱纯化后的FⅧ原液回收率分别为(63.8±4.8)%和(61.0±4.3)%, 相对标准偏差分别为7.5%和7.0%, 原液比活性分别为(100.7±5.8)和(114.0±12.2)国际单位(international unit, IU)/mg, 2种层析柱洗脱峰的峰形差异无统计学意义(F=0.42, P>0.05), 2种层析柱均能有效去除杂蛋白, 成品检定结果均合格, 成品比活性分别为(38.6±5.5)和(39.4±6.2) IU/mg。2种层析柱制备的FⅧ的稳定性研究结果均符合中国药典规定。结论 GE450型层析柱能实现较好的FⅧ纯化效果, 成品安全有效、稳定性良好, 适合商业规模化生产。

应用ACL-TOP300全自动凝血仪测定人凝血因子Ⅷ效价的方法建立和验证

目的应用ACL-TOP300全自动凝血仪建立人凝血因子Ⅷ效价测定方法并验证.方法根据基于人凝血因子Ⅷ国家标准拟修订中国药典2020年版三部一期法要求,应用ACL-TOP300全自动凝血仪建立符合修订要求的人凝血因子Ⅷ效价测定方法,并与同类型设备比较置信区间、可信限率、误差项和平行管重复性.结果建立的方法准确度和精密度良好;方法回收率为91.0%-96.4%,重复性和精密度的相对标准偏差均<5%;与主流检测设备相比,ACL-TOP300具有平行管差异小、误差项小和置信区间窄的特点.结论用ACL-TOP300全自动凝血仪建立的人凝血因子Ⅷ效价测定方法的准确度、精密度、置信区间和可靠性均满足中国药典2020年版三部修订稿和国家标准要求.

聚乙二醇沉淀法和离子交换层析法纯化人凝血因子Ⅷ效果的比较

目的 比较聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）沉淀法和离子交换层析法纯化人凝血因子Ⅷ（human coagulation factor Ⅷ，FⅧ）制品的效果。方法 分别采用PEG沉淀法和离子交换层析法纯化工艺制备各3批FⅧ，按照中国药典2015年版三部的要求检测各项质量指标，比较两种纯化工艺生产的FⅧ的回收率以及相关质量指标。结果 离子交换层析法和PEG沉淀法纯化的FⅧ的回收率分别为68.25%和29.90%，成品比活分别为61.8和3.8 IU/mg，成品磷酸三丁酯残留量分别为0.8和4.0μg/ml。结论 以离子交换层析法纯化FⅧ能有效提高制品质量，且更适合规模化生产。

层析法分离纯化冷沉淀中人纤维蛋白原

目的采用离子交换层析技术从人血浆冷沉淀中分离纯化人纤维蛋白原(human fibrinogen,Fg)。方法采用离子交换层析技术从人血浆冷沉淀中连续制备3批次Fg制品,并根据《中华人民共和国药典》2020版(三部)(简称《中国药典》)的要求检测相关质量指标,首先对Fg制品进行了S/D病毒灭活前后蛋白含量、Fg含量和纯度指标差异性的测定,然后计算层析、超滤、除菌过滤和干热病毒灭活后各级的回收率,再进行干热病毒灭活前后蛋白含量、Fg含量、纯度和凝固活力指标差异性的检测,最后对成品进行物理检查和化学检定分析,并与国内同类产品进行比较。结果3批次实验结果显示,S/D处理对Fg无显著性影响(P>0.05);Fg各级回收率均值分别为69.0%、59.1%、54.4%和49.0%;干热病毒灭活处理对Fg无显著性影响(P>0.05);Fg物理检查(成品外观、复溶时间、可见异物和渗透压摩尔浓度)结果均合格;化学检定结果均在《中国药典》规定范围内,其中,水分含量为(1.6±0.1)%,TNBP和Tween-80残留量分别为(0.1±0.0)μg/mL和(8.0±2.6)μg/mL,成品的纯度为(83.4±1.3)%,盐酸精氨酸、枸橼酸离子和氯离子含量分别为(35.7±1.5)g/L、(28.0±1.0)mmol/L和(294.7±2.3)mmol/L,HBsAg检测结果均为阴性。Fg成品的关键质量指标与国内同类产品比较均能满足《中国药典》的要求。结论离子交换层析技术能从人血浆冷沉淀中分离纯化出安全、稳定和可靠的Fg制品。

不同过滤条件对去除血浆组分Ⅱ溶解液中IgA的效果初探

目的初步筛选去除血浆组分Ⅱ溶解液中IgA效果最佳的pH条件和滤膜载量。方法以不同pH组分Ⅱ溶解液进行过滤,比较浊度、IgA含量、分子大小分布、纯度。结果 pH7.25~7.90,滤膜载量300~400 L/m^(2)时,组分Ⅱ溶解液经滤膜组合过滤后滤液浊度下降45.8%~60.5%、IgA含量下降68%~80%、分子大小分布为100%、纯度为100%。结论组分Ⅱ溶解液在pH7.25~7.90,载量≤400 L/m^(2)条件下,经滤膜过滤后不仅能有效去除IgA,而且其他质量指标保持不变,可为规模化生产工艺改进提供参考。