不同直径层析柱纯化人凝血因子Ⅷ效果的比较

目的通过比较RJ300型和GE450型层析柱对人凝血因子Ⅷ(human coagulation factor Ⅷ, F Ⅷ)的纯化效果, 探究GE450型层析柱纯化FⅧ的适用性。方法分别采用2种层析柱各制备3批FⅧ制品, 按照中国药典2020年版三部的要求对制品进行检测, 比较2种层析柱制备的FⅧ原液的回收率、比活性、洗脱峰的峰形差异、杂蛋白去除效果以及成品的检定结果, 并进行产品稳定性考察。结果 RJ300型和GE450型层析柱纯化后的FⅧ原液回收率分别为(63.8±4.8)%和(61.0±4.3)%, 相对标准偏差分别为7.5%和7.0%, 原液比活性分别为(100.7±5.8)和(114.0±12.2)国际单位(international unit, IU)/mg, 2种层析柱洗脱峰的峰形差异无统计学意义(F=0.42, P>0.05), 2种层析柱均能有效去除杂蛋白, 成品检定结果均合格, 成品比活性分别为(38.6±5.5)和(39.4±6.2) IU/mg。2种层析柱制备的FⅧ的稳定性研究结果均符合中国药典规定。结论 GE450型层析柱能实现较好的FⅧ纯化效果, 成品安全有效、稳定性良好, 适合商业规模化生产。

层析法分离纯化冷沉淀中人纤维蛋白原

目的采用离子交换层析技术从人血浆冷沉淀中分离纯化人纤维蛋白原(human fibrinogen,Fg)。方法采用离子交换层析技术从人血浆冷沉淀中连续制备3批次Fg制品,并根据《中华人民共和国药典》2020版(三部)(简称《中国药典》)的要求检测相关质量指标,首先对Fg制品进行了S/D病毒灭活前后蛋白含量、Fg含量和纯度指标差异性的测定,然后计算层析、超滤、除菌过滤和干热病毒灭活后各级的回收率,再进行干热病毒灭活前后蛋白含量、Fg含量、纯度和凝固活力指标差异性的检测,最后对成品进行物理检查和化学检定分析,并与国内同类产品进行比较。结果3批次实验结果显示,S/D处理对Fg无显著性影响(P>0.05);Fg各级回收率均值分别为69.0%、59.1%、54.4%和49.0%;干热病毒灭活处理对Fg无显著性影响(P>0.05);Fg物理检查(成品外观、复溶时间、可见异物和渗透压摩尔浓度)结果均合格;化学检定结果均在《中国药典》规定范围内,其中,水分含量为(1.6±0.1)%,TNBP和Tween-80残留量分别为(0.1±0.0)μg/mL和(8.0±2.6)μg/mL,成品的纯度为(83.4±1.3)%,盐酸精氨酸、枸橼酸离子和氯离子含量分别为(35.7±1.5)g/L、(28.0±1.0)mmol/L和(294.7±2.3)mmol/L,HBsAg检测结果均为阴性。Fg成品的关键质量指标与国内同类产品比较均能满足《中国药典》的要求。结论离子交换层析技术能从人血浆冷沉淀中分离纯化出安全、稳定和可靠的Fg制品。