少棘蜈蚣候选杀虫肽κ-SLPTX-Ssm2e的原核表达与纯化

κ-SLPTX-Ssm2e是一条通过生物信息学同源序列分析获得的与已知具有杀虫活性的毒素κ-SLPTX-Ssm2a高度同源的少棘蜈蚣毒素,由31个氨基酸残基组成,且含有3对二硫键。为了后续便于对其结构和功能进行研究,现采用原核表达与纯化的方法来获取较高产量的毒素多肽。文中首先利用大肠杆菌自动诱导表达系统,在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中表达融合蛋白GST-SUMO-κ-SLPTX-Ssm2e,将其通过GST亲和层析纯化后,采用Ulp1激酶酶切,以释放毒素分子。随后,通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)进一步纯化。最后,利用MALDI-TOF/TOF质谱仪鉴定目的多肽峰的相对分子质量为3 475.732,与κ-SLPTX-Ssm2e的理论相对分子质量3 475.07基本一致,说明κ-SLPTX-Ssm2e很有可能被成功表达。上述结果为进一步研究κ-SLPTX-Ssm2e的杀虫活性奠定了基础。

少棘蜈蚣候选杀虫肽κ-SLPTX-Ssm2b的原核表达与纯化

通过搜索NCBI数据库,获得了与具有昆虫毒性的少棘蜈蚣毒素κ-SLPTX-Ssm2a高度同源的毒素分子κ-SLPTX-Ssm2b.通过密码子优化并全基因合成获得了其DNA序列,利用RF-cloning技术将κ-SLPTXSsm2b插入到表达载体pet-HIS-SUMO,通过自动诱导表达技术在大肠杆菌BL21(DE3)诱导融合蛋白表达,通过镍柱纯化并用Ulp1激酶切割sumo标签并释放毒素分子,通过MALDI-TOF质谱鉴定其分子量为3 390.4658Da.研究结果表明获得了与理论分子量(3391.04Da)一致的κ-SLPTX-Ssm2b目的毒素分子,其表达产量为2.1mg/L,为进一步研究该候选杀虫肽分子的生理活性奠定了基础.

少棘蜈蚣候选毒素多肽κ-SLPTX-Ssm1b的原核表达与纯化

κ-SLPTX-Ssm1b是从少棘蜈蚣的c DNA文库中获得的一类功能未知的毒素,它与钾通道抑制剂κ-SLPTX-Ssm1a高度同源,由50个氨基酸残基构成,含有3对二硫键的多肽分子.利用p ET-43-His-SUMO原核表达载体,通过E.coli SHuffleTM菌种自动诱导表达,随后利用镍柱和RP-HPLC纯化,并通过MALDI-TOF质谱鉴定其分子量为5532.1870 Da,与理论值5532.3 Da相符.其产量为1 mg/L,为进一步鉴定其电生理活性奠定了基础.