丙型肝炎病毒基因定量的临床应用研究进展

本文简要介绍了HCV RNA定量方法及其在临床发病机理研究和抗病毒疗效评价中的应用情况。

丙型肝炎病毒基因分型的临床应用研究进展

本文扼要介绍了丙型肝炎病毒(HCV)基因型别,并就HCV不同基因型的致病性及与干扰素治疗的关系作了综述。

HIV/AIDS与肝炎病毒感染者CD4^+、CD8^+淋巴细胞数的比较

探讨ＨＩＶ携带者或ＡＩＤＳ病人（简称ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）与肝炎病毒感染者的ＣＤ４＋、ＣＤ８＋淋巴细胞变化，并进行比较。方法：用免疫磁珠法（ＤＹＮＡｂｅａｄｓ）检测ＣＤ４＋、ＣＤ８＋淋巴细胞数，用双侧ｔ检验进行统计学处理。结果：全部ＨＩＶ／ＡＩＤＳ的ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞降低，且幅度大，８３．４％低于５００细胞／ｕｌ。在病毒性肝炎中降低的百分比和幅度均明显低于前者，只有２８．８％低于５５细胞／ｕｌ，且２４．２％大于８００细胞／ｕｌ。与同一水平ＣＤ４＋细胞相对应的ＨＩＶ／ＡＩＤＳＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞水平显著高于病毒性肝炎，ＣＤ８＋细胞水平随ＣＤ４＋Ｔ细胞增加而升高。ＣＤ４＋细胞平均水平较高的ＨＩＶ感染者自觉症状与ＣＤ４＋Ｔ细胞数之间无直接相关关系，说明只用ＣＤ４＋Ｔ细胞数来估计病人机体状态或只根据病人症状估计机体免疫状态是不太准确的。结论：ＨＩＶ／ＡＩＤＳ与病毒性肝炎存在不同程度的ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞异常；ＣＤ４＋Ｔ细胞是ＨＩＶ／ＡＩＤＳ的重要指标，但不是绝对指标；ＣＤ８＋Ｔ细胞与病人病情的变化及预后之间可能存在着很重要的关系，需进一步研究。

C型乙型肝炎病毒的全基因组序列分析

目的 探索乙型肝炎病毒 (HBV)全基因组的结构特点。方法 应用直接PCR基因分型法确定HBV基因型 ,然后随机选择 1例单纯HBVC基因型感染的患者血清 ,分 3个相互重叠片段扩增HBV基因并分别克隆测序。利用VectorNTISuite 7 0软件包、GeneDoc 2 6和TreeView 1 5,将该 3个基因片段拼接为全基因组序列 ,命名为BD HB1,并进行基因进化树分析和同源性比较。结果 HBVC基因型序列全长为 3 2 15bp ,其中A占 2 2 2 % ,G占2 2 4% ,C占 2 6 8% ,T占 2 8 6% ;有S、C、P和X区 4个开放读码框架 (ORFs) ;HBsAg亚型为adr ;HBVRT区 549～552aa为YMDD ,未发生变异 ;未发现前C区nt1896G变异 :BCP区nt1762、1764发生双突变。对HBV分段序列及全基因组序列进行基因进化树分析显示 ,BDHB1与HBVVC基因型的同源性最高。结论 BDHB1基因组符合HBVC基因型结构特点 ,在BCP区存在双突变。

应用流式细胞仪研究HIV/AIDS患者的免疫状况

目的 探讨人类免疫缺陷病毒 ( human immunodeficiency virus,HIV)感染者和艾滋病 ( acquired immunodefi-ciency syndrome,AIDS)患者的免疫状况。方法 应用流式细胞仪 ( flow cytometer,FCM)四色荧光计数 ( CD4 5 +、CD3+、CD4 + 、CD8+ )检测 2 0例正常人、38例 HIV无症状感染者、2 4例 HIV有症状感染者和 2 1例 AIDS患者的外周血 CD4 + 、CD8+ 淋巴细胞 ,结合临床进行分析。 结果 HIV无症状感染者、HIV有症状感染者和 AIDS患者的外周血 CD4 + 细胞数( 45 6± 99.8、2 87± 85 .3、4 5± 4 1 .9)及 CD4 + / CD8+比值 ( 0 .4 6± 0 .1 4、0 .39± 0 .1 5、0 .1 1± 0 .0 9)均明显低于正常人群的CD4 + 细胞数 ( 84 2± 2 64.1 ) ( P<0 .0 1 )及 CD4 + / CD8+ 比值 ( 1 .79± 0 .5 1 ) ( P<0 .0 1 ) ;二者随病程进展不断下降 ,且不同病程间差异明显。结论 CD4 +细胞绝对数和 CD4 + / CD8+比值可作为检测

乙型肝炎患者HBV复制水平的定量PCR研究

本文采用定量ＰＣＲ方法观察了慢性乙型肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ的复制水平。结果表明在ＨＢｅＡｇ阳性患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率和水平显著高于ＨＢｅＡｇ阴性患者（Ｐ＜０．０１）；血清ＨＢＶ－ＤＮＡ水平的高低与ＡＬＴ异常情况未发现有相关性。

立克次体遗传学研究进展

立克次体遗传学研究进展庄合安，范明远（北京地坛医院病毒研究室，北京１０００１１）１引言立克次体通常是指包括立克次体（Ｒｉｃｋｅｔｔ－ｓｉａ）、罗沙利马体（Ｒｏｃｈａｌｉｍａｅａ）和柯克斯体（Ｃｏｘｉｅｌｌａ）三个属的一大类细菌，除罗沙利马体外均为专性...

SARS病人外周血T淋巴细胞的动态变化及其在发病进程和发病机理中的意义

目的 :通过研究严重急性呼吸综合征 (SevereAcuteRespiratorySyndrome,SARS)患者外周血免疫细胞的动态变化 ,探讨外周血免疫细胞在SARS发病进程中的意义 ,初步探讨SARS的发病机理 ,并为SARS的诊断和治疗提供有力的实验室依据。方法 :回顾性动态观察我院收治的已治愈SARS病例和SARS死亡病例外周血CD4 + 和CD8+ T淋巴细胞 ,评估外周血免疫细胞在SARS发病进程及预后中的作用。实验方法为流式细胞术检测和分析免疫细胞表面特异性荧光抗体标记 ,T细胞表面标志组合为CD3 CD8 CD4 5 CD4。结果 :所有治愈的SARS病人的CD4 + 和CD8+ T淋巴细胞都有不同程度的可逆性下降 ,而所有的死亡病例有不可逆性显著下降 ,直至死亡。T细胞下降程度和维持的时间与病情密切相关。普通型SARS病例最低CD4 + T淋巴细胞数为 30 5± 15 0cells μl(P <0 .0 0 1)、重型为 139± 6 9cells μl(P <0 .0 0 1) ,普通型SARS病例最低CD8+ T淋巴细胞数为 2 2 3± 89cells μl(P <0 .0 0 1)、重型为 171± 92cells μl(P <0 .0 0 1)。所有普通型病例和大部分重型病例T淋巴细胞恢复正常 ,个别重型病例低于正常或接近正常 ,恢复后普通型平均为 991± 2 86cells μl,重型平均为 5 4 5± 2 2 5cells μl。恢复时间有所不同 ,普通型平均为 17±

SARS病人外周血NK细胞和B淋巴细胞的动态变化及发病机理初探

目的 :初步探讨外周血NK细胞和B细胞在严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)发病进程及发病机理中的意义。方法 :应用流式细胞仪检测和分析SARS病人外周血B淋巴细胞、NK细胞动态变化 ,使用的NK细胞表面标志为CD16 + CD5 6、B细胞表面标志为CD19。结果分析用BD公司的MultiSet自动分析软件。结果 :随着病程的进展92 %的SARS病人B细胞先降后升或持续升高 ,少部分病人B细胞无改变或下降。NK细胞显示不同的个体差异 ,73.7%的病人显示典型的抗病毒免疫现象 ,即发病初期NK细胞数升高 ,恢复期NK细胞数下降 ,也有部分病人NK细胞无变化 (15 .8% )或升高 (10 5 % )。结论 :在SARS发病进程中B淋巴细胞介导的体液免疫可能起一定的作用。

中国北方5城市慢性乙型肝炎患者的基因分型

目的 了解中国慢性乙型肝炎 (CHB)患者中的基因分型情况。方法 根据GenBank中 18株HBVS基因核苷酸序列 ,设计共同的外引物及其因型特异性内引物 ,对中国北方 5个城市 5 95例CHB患者血清进行基因分型 ,并对A、B、C及B、C混合型各一株进行测序。结果 5 95例血清标本中 ,A型 8例 ,占 1 4 % ;B型 5 3例 ,占 8 9% ;C型 36 0例 ,占 6 0 5 % ;B、混合型 112例 ,占 18 8% ;A、C混合型 14例 ,占 2 4 % ;A、B混合型 15例 ,占 2 5 % ;A、B、C混合型 6例 ,占 1 0 % ;未分型者 2 7例 ,占 4 5 %。 5城市间在B、C及B、C混合型的分布上有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,4份测序结果与PCR基因分型法一致。结论 在 5个城市CHB患者中HBV基因型以C型为主 ,B型次之 ,并见各种混合基因型感染 ,各地区在主要基因型分布上存在显著性差异。

ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtN236T变异

目的:建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV) 阿德福韦(ADV)耐药变异-rtN236T变异的快速检测方法. 方法:根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt236N)PCR产物中含有DraI酶切位点(5’TTTAAA3’),而变异株(rt236T)无此限制性酶切位点.同时PCR扩增2份已行HBVRT区基因测序证实未出现rtN236T 变异的慢性乙型肝炎患者血清及自行构建的对照质粒,扩增产物经DraI酶切,30 g/L琼脂糖凝胶电泳后,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析. 结果:所建立的ntPCtk-RFLP方法灵敏度高,可以检测到106copies/L的HBV DNA;特异性强,其RFLP分析结果与DNA测序结果一致. 结论:ntPCR-RFLP方法灵敏、特异、简便、实用,适用于ADV耐药变异的临床监测工作.

人源抗HBsAg抗体Fd段和L链高效表达菌株的筛选

目的 :选用高效表达载体分别高效表达人源抗HBsAg抗体的Fd段和L链 ,经包涵体纯化和变性复性使Fd段和L链之间形成二硫键 ,最终制备有活性、高产量的人源抗HBsAg基因工程抗体Fab。方法 :用PCR法从可溶性表达重组质粒抗HBsAgFadComb3扩增Fd段和L链后分别构建高效表达载体PQE32 Fd和PQE32 L ,并分别导入大肠杆菌M15中进行表达 ,用SDS PAGE筛选出高效表达克隆。结果 :SDS PAGE筛选的高效表达克隆M15 PQE32 Fd和M15 PQE32 L经IPTG诱导后以包涵体形式表达 ,其表达量很高。从高效表达克隆重新扩增Fd段和L链后进行测序鉴定发现所得的序列与已报道的抗HBsAg抗体Fab基因吻合率为 97%。结论 :虽然已有表达可溶性人源抗HBsAg基因工程抗体Fab的报道 ,但因其表达量低而不能实际应用。筛选出高效表达人源抗HBsAg抗体Fd段和L链的克隆 ,因为包涵体形式表达需经变性复性 ,虽然变性复性后其产量会受影响 ,但因表达量很高 ,所以还是有很高的实际应用价值。其包涵体变性复性条件仍需进一步探讨。

抗HGV NS_5区重组抗原单克隆抗体的制备及鉴定

ＨＧＶ是１９９５年新报道的一种肝炎病毒，学者们在较短的时间内对ＨＧＶ的分子生物学、流行病学和临床特点有了一定的了解，但ＨＧＶ感染的致病机理还有待于更多的实验研究和探索，如ＨＧＶ在肝组织中的表达与分布等。本文报道了抗ＨＧＶＮＳ５区重组抗原ＭｃＡｂ的制备...

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA荧光定量聚合酶链反应法的建立及应用

乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）是HBV基因组复制中间体mRNA和前基因组RNA的合成模板，是HBV持续感染的关键。近期研究表明，cccDNA也是抗病毒治疗结束后乙型肝炎复发的主要原因。本研究旨在建立和应用荧光定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）检测慢性乙型肝炎患者血清HBV cccDNA水平。

中国北方5城市慢性乙型肝炎患者中SEN病毒检测

目的 了解SEN病毒D和H(SENV D H)在中国慢性乙型肝炎患者 (CHB)中的感染情况。方法 应用巢式聚合酶链反应法 (nPCR) ,对中国北方 5城市 5 95例CHB患者和北京市 96名正常人血清检测SENV D HDNA ,并用PCR产物直接测序法对 7株SENV进行了序列分析。结果CHB患者SENV感染率为 61.3 % ,正常人为 62 .5 % ,两者差异无显著性 ( χ2 =0 .0 47,P =0 .82 9)。但不同城市CHB患者中SENV感染率存在一定差异。从不同城市分离的SENV的核苷酸序列同源性较高 ,4株SENV D同源性为 91%～ 98% ,3株SENV H同源性为 95 %～ 98%。结论 在 5城市CHB患者中存在SENV D H感染 ,其感染率与正常人群相似 ,提示SENV D

SARS患者血浆中炎性及抗炎细胞因子的检测及其临床意义评估

目的 观察严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome ,SARS)患者体内炎性细胞因子 (IL 12P70、IL 1β、TNF α、IL 6、IL 8)和抗炎因子 (IL 10 )在疾病进程中的反应及探讨其临床意义。方法 将处于一系列年龄段的 4 7个SARS患者分为 2组 :治愈组 (n =2 7) ,死亡组 (n =2 0 ) ,另设正常对照组 (n =10 ) ;用BDCBA(Cytometricbeadarray)的方法对上述 6种细胞因子进行分析检测 ,用统计学分析软件SPSS10 .0进行统计分析。结果 所有 4 7名患者炎性因子 (IL 12P70、IL 1β、TNF α、IL 6、IL 8)和抗炎细胞因子 (IL 10 )较正常对照组均显著升高 (P <0 .0 5 ) ;死亡组IL 12P70、IL 1β、TNF α、IL 6、IL 8和IL 10较治愈组显著升高 (P <0 .0 5 )。对治愈组而言 ,IL 6在发病 2～ 12d(中位数 7d)达到峰值 ,之后呈显著下降趋势 (P <0 .0 5 ) ;而IL 8则在发病后 8～ 19d(中位数 13d)达到最高 ,之后显著下降 (P <0 .0 5 ) ;相应地 ,IL 6 IL 10在发病后 2～ 12d(中位数 7d)显著高于发病后 8～ 19d(中位数 13d)和恢复期比值。结论 高浓度的血浆炎性因子 (IL 12P70、IL 1β、TNF α、IL 6、IL 8)和抗炎因子 (IL 10 )提示发生在SARS患者的严重炎性和抗炎反应 ;IL 6是早期炎性反应中的主要炎性因子 ,可能对?

肝纤维化中星状细胞信号转导通路

肝星状细胞活化增殖是肝纤维化发生的关键。肝星状细胞在活化增殖过程中受多种细胞因子或蛋白的调控,通过表面受体激活信号转导网络系统,促使肝纤维化的发生发展。这些表面受体和信号转导通路成为研究的靶向,为纤维化的发生和逆转提供理论依据。