高效液相色谱法测定盐酸达泊西汀中9种杂质

建立了高效液相色谱法测定盐酸达泊西汀中9种工艺杂质和降解杂质的含量。采用飞诺美Gemini C_(18)色谱柱,以0.04%(体积分数)二乙胺-10 mmol/L碳酸氢钠水溶液作为流动相A,乙腈作为流动相B,进行梯度洗脱,柱温为40℃,检测波长为210 nm和293 nm,流量为1.0 mL/min,进样体积为20μL。结果表明,9种杂质的质量浓度在0.013~2.107μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数均大于0.9990,定量限为0.013~0.079 mg/kg。按加校正因子的自身对照法计算,样品的平均加标回收率为95.0%~103.0%,测定结果的相对标准偏差为0.5%~2.2%(n=9),各杂质分离度良好。该方法专属性强、精密度好、准确度高,可作为盐酸达泊西汀中工艺杂质和降解杂质的控制和质量评价方法。

HPLC法测定1-氟萘中工艺杂质和遗传毒性杂质含量

建立了1-氟萘中的2种工艺杂质和1种遗传毒性杂质含量检测的HPLC方法。采用Phenomenex Gemini色谱柱(C18250×4.6mm,5µm);流动相为10mM碳酸氢钠+6mM三乙胺∶乙腈=55∶45,等度洗脱,采集时间为主峰的2倍保留时间;柱温为40℃;检测波长为220nm;流速为1.0mL/min;进样量为20μL。采用加校正因子的主成分自身对照法对各杂质进行计算,各杂质分离度良好,定量限为0.005~0.008μg/ml,线性关系良好,精密度和高中低三浓度准确度符合要求。实验结果表明该方法专属性强、灵敏度高、操作简便、重复性好、结果准确可靠,可用于1-氟萘中杂质控制。

制药车间的除尘处理

该文根据暖通空调的相关规范和生产质量管理规范(GMP)认证要求,介绍了制药车间对除尘系统的要求。

关于制药企业空调净化系统的验证

结合空调净化系统的相关规范和GMP认证要求,介绍了空调净化系统的验证内容和方法。空调净化系统验证合格才能投入正常运行。

黄芩中黄芩苷的亚临界水提取及高效液相色谱分析

建立了黄芩药材中黄芩苷的亚临界水提取 高效液相色谱测定方法。分别考察了温度、压力、提取时间、提取物颗粒度、溶剂比等因素对提取量的影响,并与有机溶剂提取法比较。结果表明,当两者具有相同的提取效果时,亚临界水提取法的提取时间及提取溶剂的消耗量大大减少,避免了使用有机溶剂造成的污染。黄芩苷提取最佳条件为:样品颗粒度80～100目,溶剂比0 2mL/mg,5MPa,130℃保持10min。并通过提取 高效液相色谱联机分析实现了对提取物的实时监测。该技术有望成为从中药材中提取脂溶性成分的有效方法。

4-(3-(4-羟基苯基)-3-氧代-1-芳基丙氨基)-N-(5-甲基异唑-3-基)苯磺酰胺的合成及其抗糖尿病活性

由磺胺甲唑、对羟基苯乙酮和芳香醛反应直接合成了13个未见报道的β-氨基酮,反应选择性发生在羰基α位。产物结构通过1HNMR、13CNMR、MS进行了表征。生物活性试验显示,低浓度范围,所得化合物不仅对蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)和α-葡萄糖苷酶有一定抑制活性,而且对过氧化物酶体增殖物激活受体反应元件(PPRE)具有中等强度的激动活性,8个化合物的激动活性超过40%,其中化合物11的活性达到72.7%。

4-[3-(4-溴苯基)-3-氧代-1-芳基丙氨基]-N-(嘧啶-2-基)苯磺酰胺的合成及其α-葡萄糖苷酶抑制活性初步研究

为了寻求新颖的抗糖尿病药物,我们将芳香醛、对溴苯乙酮和磺胺嘧啶通过一步反应直接合成了16个未见报道的含有磺胺嘧啶结构的β-氨基酮化合物,制备方法简便、反应条件温和,收率为10.0%～80.1%.所制备的化合物通过1HNMR,13CNMR,MS和HRMS进行结构表征与确证.对这些化合物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性初步检测,结果表明部分化合物在低浓度范围(8.1～9.3nmol·mL-1)具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性.

恶性肿瘤住院患者伴发抑郁的调查

目的:了解恶性肿瘤住院患者抑郁的发生率,探讨其发生的相关因素,为在病房中开展恶性肿瘤患者抑郁的防治提供理论依据。方法:采用自评和访谈调查方法,应用Zung抑郁自评量表(SDS)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、数字疼痛分级法(NRS)、一般状况评定量表以及有关恶性肿瘤患者疾病和社会信息的一般状况调查表进行调查。结果:407例恶性肿瘤住院患者有206例被诊断出抑郁,检出率为50·6%。单因素分析显示:性别、文化水平、既往化疗史、知情、慢性持续性疼痛、KPS评分、经济压力及社会支持的8项因素与抑郁发生显著相关(P<0·05)。经Logistic回归分析,性别、既往化疗史、知情、慢性持续性疼痛、KPS评分、社会支持6个自变量进入回归方程。结论:恶性肿瘤住院患者抑郁的发生率目前较高,对女性、既往有化疗史、知情、有慢性持续性疼痛、KPS评分低、社会支持不足者,应及早给予心理干预、必要的社会支持和治疗,以提高患者的治疗效果及改善生存质量。

发酵中药——拓展中药新药研究开发的新空间

发酵中药是现代生物技术和中药研究的完美结合 ,依靠微生物发酵来生产发酵中药近来正逐渐成为研究的热点 ,并为中药的发展开辟了新空间。本文综述了发酵中药的应用历史及现况、作用机理、优势特色和发展方向。

包载反义RNA重组腺病毒微球的制备及逆转肝癌的体内外效果

目的:构建携带反义多药耐药相关蛋白(MRP)基因的重组腺病毒微球,了解包载反义RNA重组腺病毒微球逆转肝细胞癌MRP的治疗效果. 方法:采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇(PELA) 包被携带反义MRP基因的重组腺病毒制成微球,体外测定微球的粒径、载病毒量、包封率及释放规律,并用其转染人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM,48 h及120 h后检测转染细胞荧光强度.MTT法检测耐药细胞的阿霉素半数致死量(IC50);流式细胞仪检测细胞内红色荧光强度;以β-actin为内参照,以RT-PCR法观察转染后MRPmRNA表达量的高低.观察经肝动脉注射rAdV微球后肿瘤体积大小、生长率及平均生存时间. 结果:成功构建了携带反义MRP基因的重组腺病毒微球,直径约1.765 μm,包封率为52.4%,载病毒率为5.5×1011efu/g,在120 h内释放病毒量接近50%, 总的释放时间长于240 h.释放出的病毒保持活性, 10 mg微球48 h对HepG2/ADM耐药细胞株转导效率可达90%以上.HepG2/ADM细胞48 h及120 h阿霉素IC50为9.72,4.15 ug;以HepG2细胞内DNR的荧光强度为对照,rAdv微球组转染后120 h与HepG2/ ADM及rAdv组比较,细胞内DNR浓度有所升高(168.6±6.97 vs 98.39±6.17;168.6±6.97 vs 112.52±9.21,t=13.68及9.69,P=0.001及0.001<0.01).诱导后HepG 2/ADM MKP高表达,转染Adv微球后48 h及120 h,MRPmRNA的表达强度较转染前明显降低,以120 h表达最弱.转染Adv微球后120 h与48 h相比,MRPmRNA/β-actin的比值分别较转染前降低16.7% 及63.6%;120 h较转染AdV48 h表达降低26.25%. 治疗组vs对照组,生理盐水组,空白微球组及rAdv 组(n=4),肿瘤生长率显著降低(0.96±0.25 vs 8.79±0.34;4.82±0.30;4.67±0.67;2.97±0.29,t=36.10, 24.43.12.28及13.81,P=0.0001,0.0009, 0.001及0.001<0.05).平均生存时间显著延长(43.6±7.4 vs 23.4±3.2;25.3±3.7;26.5±4.1;33.7±2.9, t=5.521,4.599,4.522,2.796,P=0.005,0.007, 0.007及0.049<0.05). 结论:聚乳酸-聚乙烯醇共聚物(PELA)包载反义RNA 重组腺病毒制备的微球,可有效抑制MRP的表达提高耐药细胞对化疗药物的敏感性,这为高分子化学与基因治疗的结合提供了临床应用的理论基础.

携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒载体的构建

目的 构建携带反义多药耐药相关蛋白 (MRP)的重组腺病毒载体以用于肝癌耐药的基因治疗研究。方法 将 MRP基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒 p Ad Track- CMV上 ,与骨架质粒在大肠杆菌 BJ5 183胞内进行同源重组 ,经 2 93细胞包装、扩增后得到携带反义 MRP的重组腺病毒 Ad Easy- GFP- ASmrp。结果 成功地构建了携带反义 MRP的重组腺病毒载体系统 ,经测定病毒滴度可达 2 .5× 10 9。结论 构建的重组腺病毒 Ad Easy- GFP-ASm rp可望有效地将反义 MRP导入人肝癌耐药细胞株 。

膜荚黄芪与蒙古黄芪化学成分的高效液相色谱-质谱研究

采用高效液相色谱-质谱联用技术对膜荚黄芪及蒙古黄芪药材的甲醇提取物进行了对比分析。选用Inertsil ODS C18不锈钢柱,以乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 mL/m in,柱温25℃,二级管阵列(PDA)和电喷雾电离质谱(ESI-MS)同时在线检测。通过与标准品对照、紫外光谱及多级质谱分析并与文献对照鉴定了14个成分,分别是:毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、芒柄花苷(2)、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、2′-羟基-3,′4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、毛蕊异黄酮(5)、黄芪甲苷(6)、黄芪皂苷Ⅱ(7)、异黄芪皂苷Ⅱ(8)、芒柄花素(9)、黄芪皂苷Ⅰ(10)、异黄芪皂苷Ⅰ(11)、蔗糖(12)、毛蕊异黄酮(7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-6″-O-丙二酸酯(13)、乙酰黄芪皂苷Ⅰ(14)。经对比发现,膜荚黄芪和蒙古黄芪的主要化学成分相似但也存在一些差异。对黄芪主要成分的电喷雾质谱裂解规律进行了归纳总结。

靶向肝癌细胞的重组腺相关病毒载体的构建

目的 构建以甲胎蛋白增强子(AFP E)和白蛋白启动子(ALB P)联合转录调控序列(AFPenh+ALBprom, EP)为启动子的重组腺相关病毒基因治疗载体,用于肝细胞肝癌(HCC)的靶向基因治疗研究。方法 用PCR方法扩增EP基因片段,将EP基因片段顺义克隆至重组腺相关病毒载体系统(AAV Helper Free System)中表达质粒 pAAV IRES hrGFP的启动子位点,并替换其原有的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建出以 EP为启动子的表达质粒 pAAV IRES hrGFP EP; 再将 pAAV IRES hrGFP EP与 AAV Helper Free System中的控制质粒pAAV RC和辅助质粒 pHelper用脂质体转染法共转染人胚肾细胞(293 细胞),生成以 EP 为启动子的、可用于HCC靶向基因治疗的重组腺相关病毒载体(rAAV EP)。结果 成功构建并包装出以 EP为启动子的重组腺相关病毒载体 rAAV2 EP,病毒滴度达1.2×105/ml。结论 构建的以腺相关病毒为载体、受 AFP E和 ALB P联合转录调控序列驱动的重组腺相关病毒载体 rAAV2 EP,可望能用于HCC靶向基因治疗研究,并为肝脏疾病的靶向基因治疗提供先进载体系统。

番茄红素对小鼠辐射损伤的防护作用

目的观察番茄红素对小鼠辐射损伤的防护作用。方法ICR小鼠接受γ射线辐照,同时给予番茄红素(剂量分别为0·27g/kg bw、0·53g/kg bw和0·80g/kg bw),检测指标为外周血白细胞数、骨髓有核细胞数、骨髓细胞微核、血清超氧化物歧化酶活性和血清溶血素。结果3个剂量番茄红素实验组小鼠白细胞数均显著高于辐射对照组(P<0·01);0·27g/kg bw番茄红素实验组小鼠骨髓有核细胞数显著高于辐射对照组(P<0·01);各剂量番茄红素实验组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核数显著低于辐射对照组(P<0·01);各剂量番茄红素实验组小鼠血清SOD活力与辐射对照组比较差异无显著性;0·27g/kg bw番茄红素实验组小鼠血清溶血素显著高于辐射对照组(P<0·05)。结论番茄红素对小鼠辐射损伤具有一定的防护作用。

人受精促进肽受体TCP11a蛋白在精细胞和睾丸组织中的定位分布

利用PCR扩增人TCP11a基因，将其插入pBV220载体，首次成功在大肠杆菌DHSα中表达，表达产物以包涵体形式存在。通过制备人TGP11a抗体，对人TCP11蛋白在人精细胞和鼠睾丸组织中的分布状态进行了研究，结果证实了人TCP11蛋白在精细胞上的分布与鼠TCP11在鼠精子上的分布基本一致；鼠睾丸组织切片显示TCP11蛋白出现在精细胞的表面和细胞质中，证实了我们前期工作的结果。这些结果为我们进一步了解人TCP11基因在人精子发生和发育中的作用提供了信息，也为研究人TCP11蛋白和研制男性避孕疫苗工作打下了基础。

多药耐药真核表达载体的构建及其在人肝癌细胞HepG2中表达

目的 构建携带多药耐药mdr1全长基因的真核表达载体并研究其在人肝癌细胞HepG2 中的表达。方法 双酶切质粒pHaMDR1,获取含mdr1全长cDNA片断,将此片段定向克隆到真核表达载体PCI neo多克隆位点,经脂质体法转染HepG2细胞,G418筛选稳定的细胞系HepG2/mdr1,PCR检测mdr1 特异片段,RT PCR 检测HepG2/mdr1细胞mdr1 mRNA表达,流式细胞仪检测HepG2/mdr1 细胞P gp的含量。结果 成功构建携带mdr1全长基因的真核表达载体,并在HepG2 细胞中表达,形成稳定的细胞系HepG2/mdr1,其mdr1 mRNA及P gp的含量较未转染该载体的HepG2细胞显著增加。结论 用真核表达载体将mdr1 全长基因导入人肝癌细胞HepG2能够建立高效、稳定的多药耐药细胞系,为进一步研究多药耐药机理提供理想的细胞模型。