低密度脂蛋白受体/报告基因系统建立及中药降脂药物的筛选

为了从中药中筛选降脂药物,本文构建了低密度脂蛋白受体/荧光素酶(LDLR/Luc)报告基因系统。将LDLR/Luc报告质粒转染至HepG2细胞,并优化细胞接种密度、细胞培养时间以及检测底物浓度等条件,获得较高荧光素酶活性;进一步选择普伐他汀作为阳性对照药物,可明显提高LDLR/Luc转录活性,表明成功地建立了靶向ldlr转录活性的报告基因筛选体系。应用该体系对500余种中药提取物进行了筛选,决明子、泽泻、穿龙薯蓣等提取物显示阳性,与过去报道采用动物模型研究的结果一致。

山茱萸糖蛋白的纯化及部分理化性质研究

α- 淀粉酶抑制剂广泛存在于高等植物中,能抑制糖类在消化道内的吸收,是一种潜在的治疗糖尿病、肥胖和高血脂的药物。本文采用D10 1大孔吸附树脂,从山茱萸干果中提取得到粗提物,再经SPSepharose和SephacrylS 30 0柱层析,得到一种具有抑制α淀粉酶活性的糖蛋白(CoGP)。SephacrylS 30 0柱层析,PAGE电泳均证明该糖蛋白为单一组分;在还原条件下的SDS PAGE电泳中呈现两条蛋白带,其分子量分别是6 2 .OkD和5 6 .8kD ,利用SephacrylS 30 0柱层析测定表观分子量为15 8.9kD ,表明CoGP由两个亚基组成;利用苯酚 硫酸法测得其糖含量约为5 1% ;在α淀粉酶的抑制实验中,山茱萸糖蛋白表现出反竞争的抑制特性。

雷公藤多苷诱导大鼠肾细胞凋亡的NF-кB信号转导通路机制研究

目的:通过给予不同剂量的雷公藤多苷,观察在使用雷公藤多苷后不同时间点,大鼠肾脏损伤的情况,从"时—效"、"量—效"角度研究其对肾毒性的作用,并探讨雷公藤多苷的肾毒性毒理机制。方法:SD大鼠灌胃不同剂量的雷公藤多苷,连续给药5周,动态处死大鼠,检测大鼠体重变化、肾功、肾病理,研究雷公藤多苷对大鼠肾的毒性作用;并检测肾凋亡相关基因Fas、Bcl-2、p53等的表达;流式细胞术检测大鼠肾细胞凋亡百分率;Western Blot检测NF-κB在肾组织中的表达情况,探讨雷公藤多苷对大鼠肾的免疫毒理机制。结果:雷公藤多苷对大鼠体重、脏器指数、肾功和肾病理形态学结果表明,雷公藤具有确定的肾毒性作用,且以剂量依赖的方式上调肾细胞表面膜分子Fas、p53、NF-κB蛋白表达;下调bcl-2表达;并可使肾细胞凋亡数增多。结论:雷公藤多苷给药剂量在6.25 mg/kg～56.25 mg/kg范围内,表现出明显的量效关系,给药剂量越高,其肾毒性越大,雷公藤多苷可诱导肾细胞凋亡,且*诱导肾细胞凋亡与NF-κB蛋白表达有关,通过NF-κB这条信号转导通路诱导肾细胞凋亡是其毒性作用的可能机制之一。

新基因GIDRP88编码蛋白质电泳异常迁移的研究

通过制备GIDRP88蛋白质特异的多克隆抗体对GIDRP88基因体外翻译的样品进行检测,结果观察到GIDRP88蛋白质的电泳迁移率随凝胶中丙稀酰胺浓度的改变而发生改变,表明其存在异常迁移.生物信息学分析发现GIDRP88蛋白质一级结构电荷分布不均.为进一步研究电荷分布对其迁移率的影响,分别克隆了GIDRP88基因中电荷分布相对均匀的C端区段A(编码222个氨基酸残基),以及有多余负电荷的中部区段B(编码182个氨基酸残基),在大肠杆菌中诱导表达后,发现A区段表达肽段迁移正常而B区段表达肽段表观分子量比预期偏大32.9%.表明电荷分布不均影响了GIDRP88蛋白质在SDS PAGE上的迁移.

非诺贝特酯防治大鼠非酒精性脂肪肝的实验研究

目的:观察非诺贝特酯对非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响.方法 :高脂乳液造成SD大鼠非酒精性脂肪肝模型,随机分为模型对照组、非诺贝特酯组和易善复组,预防治疗8周后进行肝组织生化和病理学检测.结论 :非诺贝特酯能明显降低非酒精性脂肪肝大鼠模型肝脂的水平,改善脂肪变性.结论 :非诺贝特酯对非酒精性脂肪肝大鼠有较好的治疗作用.

藏药烈洗的减肥和促进LDLR表达的作用研究

目的:探讨藏药烈洗对高脂饮食诱导的肥胖大鼠的治疗作用以及烈洗所含化学成分对低密度脂蛋白受体(LDLR)的影响。方法:采用高脂饮食喂养诱导建立大鼠肥胖模型,检测药物对肥胖大鼠体重、体脂重、脂／体比的影响;建立低密度脂蛋白受体荧光素酶报告基因系统,检测烈洗所含化学成分对荧光素酶活性的影响。结果:烈洗提取物能够明显减轻高脂饮食诱导的肥胖大鼠的体重及体脂重,使脂／体比降低;其所含部分化学成分使荧光素酶活性增强。结论:烈洗对高脂饮食诱导的肥胖具有明显的治疗作用,其所含化学成分具有促进低密度脂蛋白受体表达的作用。

薯蓣皂甙元氨基酸酯的合成及其动物实验——薯蓣皂甙元衍生物的研究Ⅱ

以薯蓣皂甙元为原料,经过与氨基酸缩合,合成了6个新化合物,甘氨酸薯蓣皂甙元酯(1),DL-组氨酸薯蓣皂甙元酯醋酸盐(2),L-赖氨酸薯蓣皂甙元酯(3),N-L-赖氨酰基甘氨酸薯蓣皂甙元酯醋酸盐(4),N-L-精氨酰基甘氨酸薯蓣皂甙元酯醋酸盐(5),N-DL-组氨酰基甘氨酸薯蓣皂甙元酯醋酸盐(6),并对结构进行了鉴定。同时发现这6个化合物具有抗大鼠实验性心肌梗死作用。

薯蓣皂甙元丁二酸单酯氨基酸盐的合成及其动物实验——薯蓣皂甙元衍生物的研究I

以薯蓣皂甙元丁二酸单酯为原料 ,经过与氨基酸缩合 ,合成了 5个新化合物 ,4 L (N 丁二酸 2 基 )胺基 4 氧代丁酸薯蓣皂甙元酯二钠盐 (1) ,4 (N 乙酸 2 基 )胺基 4 氧代丁酸薯蓣皂甙元酯钠盐(2 ) ,4 L (N (5 胍基 )戊酸 2 基 )胺基 4 氧代丁酸薯蓣皂甙元酯醋酸盐 (3) ,4 (N (3 咪唑 4 基 )丙酸 2 基 )胺基 4 氧代丁酸薯蓣皂甙元酯醋酸盐 (4) ,4 (N 戊二酸 2 基 )胺基 4 氧代丁酸薯蓣皂甙元酯二钠盐(5 ) ,并对其进行了结构鉴定 ,同时发现这 5个化合物对大鼠都具有抗心肌梗死活性。

非诺贝特酯防治大鼠非酒精性脂肪肝实验研究

目的观察非诺贝特酯对非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响。方法以高脂乳液灌胃制备SD大鼠非酒精性脂肪肝模型,随机分为模型对照组、非诺贝特酯组和阳性对照(易善复)组,预防治疗8周后行血清、肝组织生化检测和病理学检查。结果非诺贝特酯能明显降低非酒精性脂肪肝大鼠模型肝组织中甘油三酯的水平,改善脂肪变性。结论非诺贝特酯对非酒精性脂肪肝大鼠有较好的治疗作用。

必需磷脂防治大鼠肝纤维化的实验研究

目的：复制大鼠酒精及ccl4致大鼠肝纤维化模型，观察必需磷脂对其的防治作用。方法：健康雄性wist—ar大鼠60只，随机分为6组，实验持续4周。A组（空白对照组）：生理盐水灌胃，每天1ml／100g体重。B组（模型组）：白酒灌胃，每天1ml／100g体重，同时cct4腹腔内每次注射0．025mg／100g体重，每周2次。C、D、E组（必需磷脂小、中、大剂量组）：在B组基础上预先灌胃必需磷脂相应剂量。F组（阳性对照组）：在B组基础上凯西莱预先腹腔注射。第4周末取血检测ALT、AST、SOD、MDA、GSH—Px等项目。实验结束处死动物，取肝组织行病理检验。结果：酒精及四氯化碳可引起大鼠肝功能损害、脂质过氧化加重，组织学出现肝纤维化表现。给予必需磷脂可明显减轻这些改变。结论：必需磷脂对大鼠酒精及四氯化碳致肝纤维化有明显防治作用。

葛根对地塞米松诱导的胰岛素抵抗的影响

目的 :探讨葛根提取物对地塞米松造成的胰岛素抵抗的影响及其作用机理。方法 :采用地塞米松诱导 3T3 L1脂肪细胞胰岛素抵抗 ,检测药物对细胞培养基中葡萄糖浓度的影响 ;采用肌肉注射地塞米松 ( 1mg·kg-1,隔日 1次 )的方法建立胰岛素抵抗动物模型 ,测定空腹血糖 (FBG)、血清胰岛素 (FINS) ,并计算胰岛素抵抗指数 (IRI)与胰岛素敏感指数 (ISI)。结果 :葛根提取物能够明显降低胰岛素抵抗 3T3 L1脂肪细胞培养基中的葡萄糖水平 ,增强细胞对胰岛素的敏感性 ;葛根提取物显著降低胰岛素抵抗大鼠空腹血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数 ,有效改善了大鼠的胰岛素抵抗状态。结论

人精子中芳香化酶表达与精子功能的关系

目的:研究精子细胞色素P450芳香化酶(P450arom)的表达及其与精子功能状态和受精力的关系。方法:以人精子穿透去透明带金黄地鼠卵异种体外受精试验(SPA)检测精子受精力;以三色法染色观察精子顶体反应(AR)的发生率。采用RT-PCR,用P450arom/GAPDH光密度值的比值代表P450arom的表达水平。结果:精子P450arom表达水平与受精率有一定的相关性(生育组r=0.5622;不育组r=0.6071)。正常男性与不明原因不育症患者精子P450arom/GAPDH比值分别为0.60±0.29,0.39±0.16,有显著差异(P<0.02)。P450arom表达水平与精子AR的发生率也有一定相关性(生育组r=0.5817;不育组r=0.5535)。结论:人精子中存在着P450arom表达产物;P450arom可能与精子功能有一定关系;P450arom表达异常可能与一些不明原因不育有关。

苯氧异丁酸类化合物的合成及其体外抗糖尿病活性(英文)

目的设计及合成新型苯氧异丁酸类抗糖尿病化合物。方法关键步骤采用亲核取代反应或M itsunobu缩合反应把亲脂性片段和酸性片段连接成一体,共合成了8个新目标物。用核磁共振、红外、质谱进行结构确认。结果体外胰岛素增敏活性测试(3T3-L1脂肪细胞)结果显示,分别将罗格列酮、吡格列酮、目标物A和B加入已经存在胰岛素抵抗脂肪细胞培养液中,用GOD-POD方法分析得到上清液葡萄糖浓度分别为5.942,6.339,6.226和6.512mmol.L-1。结论目标物A在胰岛素抵抗实验(3T3-L1脂肪细胞)中抗糖尿病活性介于市售PPARγ激动剂罗格列酮和吡格列酮之间,而目标物B的活性略低于吡格列酮。

分子佐剂小鼠补体C3d基因的克隆与序列分析

目的 构建 C3d的真核表达质粒 ,以期将其作为分子佐剂 ,提高核酸疫苗的免疫效能。方法 采用PCR技术扩增小鼠补体 C3d基因 (897bp) ,并将其克隆至 p GEM- T载体上 ;经鉴定其 DNA序列正确 ;再将其亚克隆至真核表达载体 p VAX1上。结果 经 DNA测序证实了该克隆片段为小鼠补体 C3d基因 ,可进一步用于基因表达和基因治疗的研究。结论 构建了 C3d真核表达质粒 。

蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂高通量筛选模型建立和应用

本文以蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase,PTP1B)作为靶点,采用分子克隆GST融合蛋白的方法,重组表达获得PTP1B,结合自动化操作技术和比色分析,建立了一种PTP1B抑制剂的高通量筛选模型。经在96孔板优化各种反应条件并对17940个样品的筛选结果表明,靶向PTP1B建立的高通量筛选模型具有微量、快速、特异、灵敏等特点,平均日筛选量可达15000样次以上,为寻找新的抗糖尿病药物和先导化合物提供了一种先进的手段。

一种非同位素5α-还原酶抑制剂体外筛选模型的建立和应用

目的建立一种非同位素5α-还原酶抑制剂体外筛选模型。方法从大鼠前列腺组织中提取物5α-还原酶,与底物睾酮(T)以及供氢体NADPH共同组成了一种微量反应体系。反应产物二氢睾酮(DHT)用酶免技术(EIA)测定,以产物生成量确定酶活性;对反应底物、NADPH、酶浓度以及反应最佳温度和时间进行了优化。结果当底物、NADPH、酶提取物浓度分别为0.25μM、1mM和0.3mg,37℃反应60分钟可获最大酶活性。特异性5α-还原酶抑制剂非那雄胺显著降低5α-还原酶催化产物DHT的生成。进一步对24种中药进行筛选,姜黄、夏枯草等中药提取物具有5α-还原酶抑制剂作用。结论本文建立的非同位素方法有效、可行,可作为一种体外模型筛选和研究5α-还原酶抑制剂。

P-gp蛋白功能抑制剂高通量筛选模型的建立与应用

目的建立高通量筛选模型,寻找疗效好、毒副作用小的肿瘤多药耐药逆转剂。方法以罗丹明123荧光染料胞内积累实验为基础,建立基于细胞水平的高通量筛选模型,对480个中药样品进行了高通量筛选,并采用剂量—活性依赖实验和抗性增敏实验验证阳性样品。结果模型Z′因子为0.72,筛选得到2个中药样品。结论建立的P-gp蛋白功能抑制剂高通量筛选模型稳定性好,灵敏度高,筛选得到的2种中药样品具有较好的P-gp蛋白功能抑制活性。

HPLC—ELSD法测定两种薯蓣属植物中薯蓣皂苷的含量

建立两种薯蓣属植物根茎中薯蓣皂苷的含量测定方法，采用ZORBAX SB-C18（4．6×250mm，5μm）色谱柱，以乙腈-水（47：53）为流动相，蒸发光散射检测器检测。药材粉末经甲醇超声波提取后，直接进样测定。薯蓣皂苷与其它成分分离良好，线性范围：0．13～1．30mg/mL，平均回收率为95．6％。

硫酸葡萄糖胺氯化钾含量测定方法的改进

目的 改进硫酸葡萄糖胺氯化钾的含量测定方法。方法 以乙酰丙酮、无醛乙醇和对二甲氨基苯甲醛溶液为显色剂,用比色法测定。结果 样品在5.6-16.8μg·ml-1浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9992);方法精密度(重复性)的RSD=0.46％;平均回收率=99.4％,RSD=0.34％。结论 改进后的测定法准确、重复性好,适用于含量测定。