HIF-1基因C1772T、G1790A多态性与藏族人群高原低氧适应关系的研究

采集西藏登山队和西藏登山运动学校藏族登山队员(共86人)以及广东汉族健康个体(共90人)的外周静脉血样,提取白细胞基因组DNA,利用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术检测缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因(HIF-1α)外显子12的C1772T、G1790A的单核苷酸多态性等位基因频率及其组合基因型分布特征,以探讨其与高原低氧适应的相关性。结果显示,C1772T的CC、CT和TT基因型分布频率在藏族组与汉族对照组分别为13.95%和16.67%、38.37%和41.11%、47.68%和42.22%,各基因型频率在两组间比较无显著性差异;G1790A的GG、GA和AA基因型分布频率在藏族组与汉族对照组分别为60.47%和75.56%、36.05%和21.11%、3.48%和3.33%,藏族组的GG基因型频率较汉族对照组的低(P<0.05),而GA基因型频率较汉族对照组高(P<0.05)。表明G1790A的GA基因型可能与藏族人群适应高原低氧有关,值得进一步深入探讨。

SARS病毒全基因组芯片在临床检测中的应用

目的 利用冠状病毒全基因组芯片检测SARS患者血、便和痰标本中的冠状病毒核酸 ,为SARS病毒核酸的诊断提供线索。方法 提取SARS患者血、便和痰样本中的冠状病毒RNA ,经全基因组随机反转录和PCR扩增标记成荧光探针 ,与SARS病毒全基因组芯片进行杂交 ,同时用体外培养的病毒RNA和从健康人分离的白细胞的RNA分别做阳性和阴性对照 ,杂交后的芯片用Axon4 10 0A扫描仪扫描和分析。结果 SARS患者的 3种标本中都能检测到冠状病毒核酸的存在 ,与整个病毒基因组比较大都为一些不连续的片断。其中痰和便标本中的基因谱较为相似 ,并且发现编码S1蛋白的核酸在多数痰和便标本中是连续的。结论 冠状病毒全基因组芯片能够检测出SARS患者血、便和痰标本中的冠状病毒核酸 ,同时能够监测不同样本中该病毒全基因组变化的特点 。

乙醛脱氢酶2基因多态性与早发冠心病的相关性研究

目的探讨中国汉族人群中,乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与早发冠心病之间的关系。方法本研究共纳入505例患者,根据冠脉造影结果确诊冠心病患者375例及非冠心病患者130例,其中冠心病患者又分为早发冠心病组150例(男<55岁,女<65岁)和晚发冠心病组225例(男≥55岁,女≥65岁)。另外,将505例患者根据饮酒后是否面红分为面红组135例和非面红组370例,根据是否有习惯性饮酒分为饮酒习惯组189例和无饮酒习惯组316例。通过Sanger测序的方法对ALDH2基因的多态性进行分析。结果 ALDH2基因型分布在早发冠心病组与晚发冠心病组间,以及冠心病组与非冠心病组间差异均无统计学意义(P>0.05),logistics回归校正性别、年龄、抽烟、饮酒、体重指数(BMI)、高血压、糖尿病、高脂血症、冠心病家族史等因素后,ALDH2基因不是早发冠心病和冠心病的易感因素(P=0.729,OR=1.098,95%CI 0.648~1.859;P=0.581,OR=1.156,95%CI 0.692~1.930)。ALDH2突变型(GA+AA)发生率在饮酒面红组中(67.4%)明显高于非面红组(10.5%,P<0.01),在无饮酒习惯组中(29.7%)高于有饮酒习惯组(19.1%,P<0.01)。结论 ALDH2基因多态性不是中国汉族人群中早发冠心病及冠心病发病的危险因素,饮酒面红与ALDH2突变型基因有关。

乙醛脱氢酶2基因多态性与冠心病严重程度的相关性研究

目的探讨中国北方汉族人群中,乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与冠心病严重程度之间的关系。方法本研究共纳入505例患者,包括375例冠心病患者及明确排除的130例非冠心病患者,通过Sanger测序法对ALDH2基因的多态性进行分析,比较冠心病组与非冠心病组间ALDH2基因型的分布;同时,将以上患者分为非冠心病组、单支病变组、多支病变组,比较三组之间ALDH2各基因型别的分布;并对野生型和突变型的所有病变血管进行Gensini评分,比较Gensini评分有无差异。结果 ALDH2基因型的分布在冠心病和非冠心病组中,差异无统计学意义;在不同病变支数之间的ALDH2基因型分布以及野生型、突变型两组的Gensini评分,均差异无统计学意义。结论 ALDH2基因多态性与中国北方汉族人群冠心病严重程度之间无明显相关性。

人resistin基因原核表达载体构建和表达

【目的】构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础。【方法】酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒。重组表达质粒转化大肠杆菌JM109,经1mmol/LIPTG在32℃诱导表达2h,裂解细菌,进行PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达。【结果】RT-PCR扩增产物分子大小为327bp,序列分析表明为人resistin基因完整编码区。PCR产物与T载体连接、转化大肠杆菌后,从细菌质粒中酶切回收了目的片段。重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327bp、4980bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5kD的融合蛋白。【结论】成功构建了人resistin基因原核表达载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打下了实验基础。

大鼠骨髓增生异常综合征基因治疗及其机制研究

目的应用反基因V—erbB寡核苷酸（ODN）产品时大鼠骨髓增生异常综合征（MDS）动物模型进行基因治疗，观察其疗效和可能的毒性反应。方法尾静脉注射或口服治疗。对42只动物应用不同给药方法和剂量进仃治疗。（1）尾静脉注射给药，以常规剂量（D）0．56mg／kg和0．5×D两个剂量对17只大鼠MDS进行治疗。并以8只未经任何治疗的MDS为对照。在2～3个月的观察期，17只大鼠MDS均有骨髓原始和早幼粒细胞百分比（％）的下降，其中，94．1％（16／17）大鼠骨髓象恢复正常或接近正常；对照组8只MDS，3只从RA发展为RAEB，4只死于内脏出血，末见逆转为正常者。（2）口服用药14只动物，分别以1×D、0．5×D和0．25×D3种不同剂量。结果仅1×D有效，其余2种剂量均无效。（3）将反基因V—erbB寡核苷酸与CpG寡核苷酸联合应用，埘MDS、AEL和AML进行尾静脉注射治疗，发现此2种寡核苷酸治疗，显效时间明显缩短。但上述方案仅对MDS和AEL有效，而时AML则无效。（4）疗效原理研究证明，反基因V—erbBODN能抑制大鼠MDS中白血病的发展，而中心错配的反基因V—erbBODN和正基因V—erbBODN则不能。结论在0．56mg／kg剂量下，此产品对大鼠MDS，不论静脉注射或口服用约均有明显的疗效，且毒性不显。治疗恢复期间大鼠平均体重增加98g且生育能力完好，说明此产品具有临床应用价值；反基因V—erbB ODN通过形成巩固三链DNA结构，抑制内源性V—erbB表达和扩增，从而显示疗效。

创伤反应早期BALB/C和C57BL/6小鼠肝组织基因表达谱比较研究

目的 :探讨BALB/C和C5 7BL/6小鼠创伤反应差异性的分子遗传学机制。方法 :利用基因芯片技术对BALB/C和C5 7BL/6小鼠在创伤后 1h和 6h肝组织基因表达谱进行比较研究 ,对在两种小鼠创伤反应早期差异表达的基因进行聚类分析。结果 :对 132 7条差异表达的基因进行聚类分析后发现有两大族基因的表达在BALB/C小鼠和C5 7BL/6小鼠创伤后早期存在明显差异。BALB/C小鼠糖类代谢、脂类代谢和激素代谢活跃 ,细胞信号转导以G蛋白信号通路和Ca2 + 信号通路激活为主 ,而且与组织损伤相关的基因也出现高表达。而C5 7BL/6小鼠急性时相反应和免疫反应被激活 ,细胞凋亡途径被抑制 ,细胞信号转导以酪氨酸蛋白激酶系统激活为主要特征。结论 :BALB/C和C5 7BL/6小鼠的创伤反应差异性可能与它们在创伤后基因组的表达方式不同相关。

骨髓增生异常综合征(MDS)基因诊断研究

目的根据Southern印迹杂交结果设计并合成适当引物。方法以32例MDS、13例可疑MDS、53例其他血液病和8例正常人骨髓细胞DNA为模板进行PCR。根据PCR结果和用于上述Southern印迹杂交的限制性酶切位点,设计并合成2个寡核苷酸(Oligos)经地高辛标记,对33例MDS(包括转白血病者),3例可疑MDS和19例其他血液病患者骨髓细胞涂片作原位杂交(ISH)。结果 MDS有共同的PCR产物电池带型。MDS原位杂交均呈阳性反应。对照组19例中仅有1例AA阳性反应,可疑MDS 3例中有2例阳性反应,且杂交信号的增强与MDS转白血病相关(P<0.01),也与SCD阴性相关(P<0.01)。结论建立起MDS PCR基因诊断法,笔者设计的两条Oligos所包含的限制性酶切位点的确是MDS C-erbB重排位置和重排/扩增位置,为MDS基因治疗提供了靶基因的靶位置。

叶酸敏感型染色体脆性部位表达和癌症致病基因调控

所谓染色体脆性部位（Fragile Site,FS）是指外周血淋巴细胞染色体存在着非随机的且容易发生断裂或裂隙的部位。它们常常在一定培养条件下或接受某些化学物质的刺激之后发生断裂,

乙醛脱氢酶2基因多态性与急性冠状动脉综合征的相关性研究

目的探讨中国汉族人群中乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2, ALDH2)基因多态性与急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)之间的关系。方法本研究共入选468例患者,包括338例ACS患者(ACS组)和明确排除冠心病的130例非冠心病患者(非冠心病组)为研究对象,通过sanger测序的方法对ALDH2基因的多态性进行分析,比较ALDH2各基因型别在ACS组与非冠心病组中的分布,并对研究对象进行多种亚组分析。结果在所有研究对象中,ALDH2基因型的分布在ACS组与非冠心病组中差异均无统计学意义(P=0.43),在多组亚组分析中,ALDH2基因型的分布在ACS和非冠心病组中差异均无统计学意义(P>0.05)。结论中国汉族人群中,ALDH2基因多态性与ACS发病之间无明显相关性。

晚期癌症的治疗策略:从靶向治疗到基因治疗

本文作者基于对白血病等恶性肿瘤发病原理和病因的系统认识和国外最新成果,在对早中期癌症基因治疗成功的基础上,提出晚期癌症的治疗策略,即从癌蛋白和癌基因两个层面上采用两种方案即:①靶向三个癌基因(V-erbB,TS和C-Met),它们分别是癌症致病基因,癌变基因和晚期癌基因)产物的小分子抑制剂和5-氟脲嘧啶核苷(5-Fu);②反基因V-erbB+CpG双寡核苷酸组合方案,相结合。首先采用:①方案消灭大量癌细胞,再用②方案,针对癌干细胞和残余癌细胞进行综合治疗。继续使用第二方案,直到完全缓解5年以上。上述治疗可称为基因产物治疗和基因治疗。希望医者在实践中加以优化和完善。

氮素添加对典型草原区割草场植物群落结构及草场质量指数的影响

养分添加对维持割草场养分平衡具有重要意义,本研究通过不同割草制度下添加氮素试验,探讨了氮素添加对割草地产量、群落物种多样性及草群质量指数的影响。结果表明,1)氮素添加对一年割1次草地的增产效果显著。添加氮素当年N3(64.4kg/hm2)、N4(78.2kg/hm2)较对照显著增产,幅度近50%,且次年也表现出明显的肥料残效;对一年割2次,仅在N4梯度上有显著的增产效果,表现出肥料施用量不足。对不割草处理区,添加氮素未达到显著增产(P<0.05)。2)割草处理下,物种多样性指数随氮素添加梯度的增加呈波动状增长趋势;而均匀性指数呈下降走势。3)添加氮素后羊草和大针茅在一年割1次和不割草处理中都表现出等补偿和超补偿,但在一年割2次中均为不足补偿;糙隐子草则相反,在不割草处理中仅为等补偿而在割草处理后刈割频度越高超补偿现象越明显。添加氮素后3种群的氮含量都明显提高,但在不割草处理中的糙隐子草在N2(50.6kg/hm2)梯度达到最高之后,基本保持该水平。4)氮素添加对不同轮割制度下草地质量有明显的提高作用。施用N4梯度的试验区在2年的综合效果中表现最佳,草地质量维持的最好。

人血清白蛋白和人干扰素α2b的融合蛋白在毕赤酵母中的表达

为了延长IFNα2b在血浆中的半衰期,构建了编码HSA和hIFNα2b的融合基因并在毕赤酵母中获得高效表达,工程菌经5L发酵罐培养后获得的含融合蛋白的培养液经超滤浓缩、蓝色葡聚糖凝胶层析、疏水柱层析以及阴离子柱层析,融合蛋白的纯度达到95%以上。该融合蛋白能与干扰素抗体和人血清白蛋白抗体结合,并表现出与重组干扰素α2b相似的抗病毒活性。以猕猴为动物模型,分别从静脉和皮下单剂量给药,给药浓度为90μg/kg时,在336h后血浆中仍可检测到融合蛋白。其静脉注射的血浆半衰期为101h,皮下注射的半衰期为68.2h。皮下注射的生物利用度为67.9%。IFNα2b与HSA融合后,明显的延长了血浆半衰期,显现了其良好的临床应用前景。

EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌细胞中通过ERK介导Ets-1表达

为了探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)对核转录因子Ets 1表达和活化的影响 ,并证实细胞外信号调节激酶 1/ 2 (ERK1/ 2 )参与了该过程 ,选用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系L7,应用蛋白质印迹法检测Ets 1、p ERK蛋白质表达 ,免疫共沉淀 蛋白质印迹法检测Ets 1磷酸化状态 ,使用ERK1/ 2特异性小分子阻断物PD980 5 9作用后 ,蛋白质印迹法检测 p ERK、Ets 1表达及磷酸化变化 .结果显示 :在L7细胞中诱导性LMP1可促进p ERK、Ets 1蛋白质表达及其苏氨酸残基磷酸化 ,在一定范围呈时间和剂量效应 ;通过PD980 5 9对诱导性LMP1作用的干预发现 ,p ERK大部分表达被阻断 ,而Ets 1表达及其苏氨酸磷酸化也被部分阻断 ,以上结果提示ERK部分介导了LMP1诱导Ets

单克隆抗体制剂的最新进展

杂交瘤技术建立以来,单抗研究走过了漫长而又曲折的历程,分子生物学的发展使单抗从诊断工具变为有效的治疗药物.近时期,单抗作为治疗制品有了迅速的发展,其在生物技术治疗药物的研究开发中占有重要地位.主要阐述了单克隆抗体人源化、核素耦联特异性抗肿瘤抗体、单克隆抗体导向药物、单克隆抗体生产技术、治疗用单抗制剂等5个方面的最新进展.

Ephrin-A5在脑梗死大鼠脑组织中的分布和动态表达

目的:研究发育期的轴突导向分子ephrin-A5在成年大鼠缺血性脑梗死皮层内的分布以及梗死灶周围不同时点的表达变化,探讨ephrin-A5基因在缺血性脑梗死后对神经再生的作用。方法:建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,采用免疫组化技术检测ephrin-A5的分布、细胞定位,并于脑梗死后1、2、4周用荧光定量PCR法检测梗死灶周ephrin-A5表达量的变化。结果:免疫组化结果显示:大脑中动脉皮层支梗塞后ephrin-A5主要表达于梗死灶侧皮层的V2MM(第二视皮质内侧内区)、V2ML(第二视皮质内侧外区)、V2L(第二视皮质外侧区)、Au1(第一听皮质)、AuV(第二听皮质,腹侧区),分布在神经元胞体、树突中,轴突亦有少量分布。荧光定量PCR结果显示:ephrin-A5mRNA在脑梗死后表达量上升,1周达到高峰,第2、4周保持第1周水平。结论:脑梗死后eph-rin-A5在梗死灶周神经元胞体、树突中持续高水平表达,它可能是造成成年哺乳动物中枢神经系统损伤后神经轴突再投射障碍的重要原因之一。

间日疟原虫荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立

目的 建立间日疟原虫荧光定量聚合酶链式反应 (FQ -PCR)检测方法 ,为快速、准确定量检测间日疟原虫奠定基础。方法 根据间日疟原虫SSURNA基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针 ,将PCR扩增的间日疟原虫SSURNA基因片段克隆入载体 ,对重组质粒进行筛选、鉴定后 ,作为阳性模板 ,用于标准曲线的判定和样品检测。结果 应用重组质粒制作的定量曲线 ,循环阈值与模板浓度具有良好的线形关系 ,12 7份疟区血样和 30份正常血样的检测 ,显示此法有较高的灵敏度和特异度 ,定量检测结果与镜检感染率呈直线相关 ,相关系数为 0 95 9。

抵抗素(resistin)与2型糖尿病及肥胖症相关研究进展

A Review Resistin, a new hormone found in the year 2001 and secreted by adipocytes, is related to type 2 diabetes and obesity. It brings some hope to solve the medical hamper of insulin resistance. The resistin discovery, molecule structure, function and expression, secretion regulation as well as gene polymorphism are reviewed in the article. [

依托泊苷通过蛋白酶体通路诱导白血病细胞凋亡

目的研究拓扑异构酶Ⅱ抑制剂依托泊苷诱导白血病细胞HL-60凋亡的分子机制。方法细胞增殖和凋亡采用四唑氮盐(MTT)法和流式细胞仪测定,基因芯片技术检测依托泊苷作用于HL-60细胞2 h后基因表达谱的变化。应用Gen-MAPP分析软件分析细胞内反应通路。结果依托泊苷半数抑制浓度(IC50)为(30.17±0.26)μmol/L。依托泊苷促进HL-60细胞凋亡,凋亡百分率由对照组4.38%增加到药物处理组的53.96%,能显著抑制细胞内蛋白酶体降解通路(Z≥3.8),抑制蛋白酶体通路中的PSMB5、PSMB7、PSMB8、PSMC3、PSMC5、RPN1和HLA-A表达。结论依托泊苷抑制DNA拓扑异构酶II可通过抑制细胞内蛋白酶体相关基因表达导致细胞凋亡。

野生型stathmin 1及其C末端突变体的功能研究

目的:研究stathmin1过表达对黑色素细胞的生长和功能的作用;探讨C末端7个氨基酸残基的突变对stathmin1生物功能的影响。方法:构建stathmin1克隆载体及其C末端定点突变载体。转染载体到黑色素细胞中,MTT、流式细胞仪、分光光度法等研究野生型以及突变型stathmin1对于黑色素细胞生长以及细胞特异性功能的影响。结果:成功构建含有野生型stathmin1的克隆载体pAdTrack-stathmin1及其定点突变载体pAdTrack-stathmin 1-mut;MTT法和流式细胞仪检测到突变型和野生型stathmin 1都能有效抑制黑色素细胞生长、诱导细胞凋亡;分光光度法检测黑色素细胞特异性功能黑色素产量以及酪氨酸酶活性因stathmin 1的转染而受到明显影响。结论:Stathmin 1稳定表达对于黑色素细胞的生长有重要意义,高表达可以抑制细胞生长以及细胞特异性功能,C末端模序结构的破坏并不能影响stathmin 1的生物学功能。