染色体嵌合体在基因检测中的研究进展

染色体嵌合体是指个体中存在两个或多个染色体不同的细胞系,这些细胞系来源于单个受精卵。染色体嵌合体标本来源困难、临床结局多样导致临床结果解释和检测困难,是基因研究的难点之一。本文将对嵌合体的形成机制、致病性以及基因检测技术等进行综述,为临床治疗和产前遗传咨询提供更好的诊疗依据。

不同基因突变对于急性髓系白血病预后的影响

目的:探究急性髓系白血病(AML)患者基因突变谱及其与预后的关系。方法:回顾性收集2018年1月至2021年12月初诊于中山大学附属第三医院血液内科的AML患者的临床资料,进行靶向深度测序(NGS 175-Panel)检测患者基因突变,绘制基因突变谱,分析基因突变间的共存与互斥关系以及与临床特征之间的关系;使用Kaplan-Meier生存曲线和Cox风险比例模型进行基因突变相关的预后分析,包括总生存期(OS)与无事件生存期(EFS)。结果:140例初诊AML病例共发生了433个突变,FLT3、CEBPA、NPM1、WT1、IDH2是突变频率最高的5个基因,而本研究中WT1、CEBPA、NPM1、DNMT3A等基因的突变频率显著高于西方人群,同时发现了22对基因共存与互斥关系以及不同基因突变与临床特征的相关性(均P<0.05)。此外,生存分析显示,FLT3-ITD(OS:P=0.047,EFS:P=0.097),NRAS(OS:P=0.003,EFS:P=0.300)和WT1(OS:P=0.110,EFS:P=0.004)与较差的OS或EFS相关,FLT3-ITD阳性伴WT1突变患者的OS与EFS显著差于双阴性或单一阳性的AML患者(OS:P<0.001,EFS P=0.005)。同时FLT3-ITD插入位置与临床特征以及预后的相关性分析显示,当FLT3-ITD插入位置仅发生在近膜结构域(JMDsole)时,OS显著差于插入位置发生在近膜结构域与酪氨酸结构域之间(JMD/TKD1)(P=0.007)。结论:不同人群的AML基因突变谱存在显著差异,NRAS和WT1基因突变以及FLT3-ITD和WT1共突变提示预后不良。

非诺贝特干预超氧化物歧化酶2转基因C57BL/6J小鼠的神经保护机制

背景:氧化损伤被认为是脑缺血再灌注损伤的重要因素之一,超氧化物歧化酶2是关键的线粒体抗氧化分子,非诺贝特可通过激活的PPARα调节超氧化物歧化酶2的表达。目的:验证非诺贝特治疗脑缺血再灌注损伤的机制是依赖超氧化物歧化酶2的表达。方法:用TALENs系统构建超氧化物歧化酶2转基因C57BL/6J小鼠,通过PCR和DNA测序技术鉴定转基因小鼠进行基因分型,免疫印迹法检测超氧化物歧化酶2蛋白在转基因小鼠体内表达情况。将野生型和超氧化物歧化酶2转基因小鼠随机分为4组,野生型对照组(6只)、野生型非诺贝特组(6只)、转基因对照组(超氧化物歧化酶2转基因型)(5只)、转基因非诺贝特组(5只)。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞小鼠模型,90 min后拔出栓线,使脑血流再灌注30 min。使用脑血流监测仪监测局部脑血流;取脑组织切片,使用TTC染色分析各组脑梗死情况。结果与结论:①经PCR和DNA测序分析,成功构建超氧化物歧化酶2^(+/+)转基因小鼠9只。②缺血再灌注后,野生型非诺贝特组较野生型对照组的脑血流部分恢复、脑梗死体积明显缩小(P<0.001);转基因非诺贝特组与转基因对照组在脑血流与脑梗死体积方面无显著差异;转基因对照组在脑血流及脑梗死改善方面优于野生型对照组(P<0.001);野生型非诺贝特组与转基因对照组和转基因非诺贝特组在脑血流、脑梗死体积上均无显著差异。③结果说明,超氧化物歧化酶2的表达是非诺贝特治疗脑缺血再灌注损伤的机制之一。

TSHR基因变异所致先天性甲状腺功能减退症患儿1例

先天性甲状腺功能减退症(congenital hypothyroidism,CH)是最常见的内分泌发育障碍疾病,如果不及早发现,可能导致严重和不可逆的神经和发育异常[1]。我国新生儿CH患病率约为1/2000[2]。有报道发现,遗传因素在CH发病机制中起重要作用,目前已发现CH与20多个基因相关[3]。促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)是被广泛研究的基因之一,存在于甲状腺滤泡细胞表面,具有调节促甲状腺素活性的作用。TSHR基因突变会影响甲状腺细胞对促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)的应答进而引发CH。TSHR基因突变在我国报道的病例不多见[2],本文报告1例TSHR基因变异所致CH患儿,并结合相关文献分析患儿的遗传学特点,以提高对本病的认识。

PSD-95基因DNA甲基化在睡眠剥夺相关疾病的作用研究进展

睡眠剥夺(SD)已成为世界各地普遍存在的问题,许多疾病的发生与睡眠不足有关。已经发现表观遗传机制与SD及相关疾病的发生发展密切相关,其中,DNA甲基化是最常见的表观遗传修饰,可影响基因表达。突触后密度蛋白-95(PSD-95)被认为是兴奋性信号传递过程中重要的调节因子,SD后,PSD-95表达降低,表现出情绪改变和认知障碍等精神疾病症状。在慢性应激小鼠中,观察到血清素1A受体启动子区DNA甲基化水平增加,与抑郁症患者前额叶皮层PSD-95表达水平降低有关。然而,PSD-95基因的DNA甲基化水平与抑郁症表型无关。在精神分裂症患者中,SD的长度会加重疾病程度,且PSD-95基因DNA甲基化与精神分裂症有关。此外,结直肠癌的发病风险与SD或昼夜节律紊乱有关,而PSD-95基因DNA甲基化也可能成为治疗结直肠肿瘤的靶点。未来仍需要进一步深入探索PSD-95基因DNA甲基化在SD相关疾病中的作用及调节机制。

长春地区2051例女性人乳头瘤病毒检测基因类型及感染人群特征分析

目的观察人乳头瘤病毒在吉林省长春地区女性人群的感染状况及感染人群特征,为本地区HPV感染引发的疾病的防治提供理论依据。方法应用聚合酶链式反应(PCR)-膜斑点杂交技术对2020年10月至2021年11月在医院体检和就诊的2051例不同年龄的女性患者采集的宫颈脱落细胞标本进行6种低危型和15种高危型HPV检测。结果2051例受检者检出HPV阳性为329例,总阳性率为16.05%。检出20种HPV亚型,HPV42基因型未被检出,其中高危型为310例(占15.12%),低危型为19例(占0.93%)。高危HPV优势亚型阳性率居前5位的是HPV16(3.61%)、HPV52(2.93%)、HPV58(2.10%)、HPV53(1.76%)和HPV31(1.22%);单一HPV基因型别感染率为12.48%,双重感染率为2.09%,三重及以上感染率为0.54%。高危HPV阳性率最高是60岁以上人群(占21.54%),其次为15~30年龄段人群(占19.33%)。结论长春地区女性HPV感染率低于国内平均感染率,感染HPV以单一型别感染为主,其中高危型HPV16、52及58亚型为主要感染型别;感染年龄段以60岁以上人群及年轻人(小于30岁)为主,需要针对不同年龄段易感人群定期进行HPV核酸检测及基因分型筛查。

纤维支气管镜刷检细胞H－ras基因检测对肺癌的诊断价值

为探讨纤维支气管镜直视下毛刷脱落细胞中Ｈ－ｒａｓ基因突变在肺癌中的诊断价值，采用在纤维支气管镜毛刷脱落细胞中应用ＰＣＲ－ＲＦＩＰ方法（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）检测Ｈ－ｒａｓ基因，人突变。对５０例肺癌及２０例肺部炎症患者支气管上皮脱落细胞进行了检测，结果肺癌中Ｎ－ｒａｓ基因突变为５４％（２７／５０）．鳞癌为５９．１％（１３／２２）．腺癌为５３．８％（７／１３），小细胞肺癌为３３．３％（２／６），肺透明细胞癌１００％（２／２），未能分型的肺癌４２．９％（３／７），肺炎组１０％（２／２０）。肺癌组的Ｈ－ｒａｓ基因突变明显高于肺炎组，二者有明显的差异（Ｐ＜０．０１）。研究肺癌Ｈ－ｒａｓ基因突变有较高的阳性，在肺癌与非肺癌组中有明显的差别，有希望成为肺癌诊断标记物。

2017年中科基因对我国猪群常发疫病检测结果统计与分析

2017年中科基因对河南、湖南、四川等主要养殖地区送检的猪群样品进行了猪瘟（CSF）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）、猪伪狂犬（PR）和猪O型口蹄疫（FMD-O）等常发疫病的免疫效果评估、感染状况监测和（或）疫病检测诊断。结果显示,除PR外,其它几种病原的抗体阳性率均在70%以上;

EB病毒基因检测诊断鼻咽癌的初步探讨

有关资料表明,EB病毒感染与鼻咽癌的发生有密切关系。鼻咽癌患者体内都有较高水平的抗EB病毒抗EB病毒抗体。长期以来,免疫酶法已做为鼻咽癌的重要血清学检测指标之一,但它是一种间接辅助的检测手段,有一定局限性。本实验用PCR法检测71例IgA/VCA抗体阳性患者的鼻咽部脱落细胞中的EB病毒DNA。

2017年中科基因对我国家禽常发疫病检测结果统计与分析

2017年，中科基因对来自山东、河南、湖北等主要养殖地区的家禽样品进行了新城疫（NDV）、禽流感（AIV）和传染性支气管炎（IBV）等常发疫病的免疫效果评估、感染状况监测和（或）疫病检测诊断。

急性髓系白血病基因突变谱及其与首次诱导疗效的关系

目的:探讨急性髓系白血病(AML)基因突变谱及其与首次诱导疗效的关系。方法:回顾性收集2018年1月至2021年12月中山大学附属第三医院收治的AML患者的临床资料,使用二代测序(NGS)技术检测基因突变情况,绘制基因突变谱,分析突变基因之间的共存与互斥关系,探讨基因突变与AML首次诱导疗效的相关性。结果:AML患者140例共检出451个基因突变,突变频率最高的基因分别为CEBPA(20.0%),NPM1(20.0%)和WT1(15.0%)。突变基因的共存与互斥分析显示,NPM1与DNMT3A、TET2、IDH2存在显著的共现关系,且RUNX1与BCOR、CSF3R也存在显著的共存关系。AML首次诱导疗效的影响因素分析显示,患者初诊时血小板计数和TET2突变频率存在显著组间差异(均P<0.05),未缓解组(NR)血小板计数高于完全缓解(CR)组和部分缓解(PR)组,NR组TET2突变频率显著高于CR组。AML伴NPM1突变亚型中发生TET2突变患者CR率显著降低。结论:TET2突变会降低AML伴NPM1突变亚型患者的首次诱导疗效,对于后续治疗方案的选择及长期预后评估具有一定的临床价值。

生命说明书——基因检测的奥妙

家住上海的黄先生在某电商平台上花费499元购买了一份基因检测产品,他用收到的唾液采集仪器采集了样本后寄回给检测中心,不到两周就收到了一本厚厚的检测报告,其中包括他的人类学祖源信息、天赋技能分析、情绪和性格偏好以及患病风险概率等。报告提示,与他祖源最相似的是中国华北地区人。他还有一些基因标签:偶尔赖床、较早进入更年期、酒瘾最小、烟瘾最小、易长痘、敏感性较高、记性较好、反应超快、患帕金森病风险较高、躁郁倾向略高、较难感知幸福、容易失眠、可能感觉孤独、共情较弱、恋爱超难,等等。

单分子实时测序技术在1例21-羟化酶缺陷症患儿基因检测中的临床应用

目的应用单分子实时测序(single molecular real-time sequencing,SMRT)技术明确1例21-羟化酶缺陷症患儿的分子病因,并探讨SMRT用于临床基因检测的可行性。方法应用SMRT技术对先证者先天性肾上腺皮质增生症候选基因进行长读长测序,检测结果与多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)和Sanger测序检测的家系结果进行比较。结果SMRT结果提示,先证者CYP21A2基因存在3个致病变异,先证者的一条染色体上串联排列两个重复的基因拷贝,分别为包含c.955C>T变异的CYP21A2基因和包含c.1069C>T变异的CYP21A2/CYP21A1P嵌合基因;另一染色体上的CYP21A2基因缺失。检测结果与家系MLPA+Sanger测序的结果相同,并明确了CYP21A2/CYP21A1P嵌合基因的排列方式。结论SMRT技术能够明确基因拷贝数变异、结构变异及嵌合基因的排列方式,可为21-羟化酶缺陷症遗传学诊断和携带者筛查提供更有价值的信息,具有较大的临床应用前景。

羊水产前诊断胎儿性染色体异常362例分析

目的分析产前诊断胎儿性染色体异常结果,探讨无创产前检测(NIPT)、荧光原位杂交技术(FISH)、染色体核型分析、微阵列芯片技术(CMA)等联合应用的优势。方法收集2018-2022年于我中心行孕中期羊膜腔穿刺术的孕妇资料,对性染色体异常的结果进行统计分析。结果行羊水分析15224例,检出性染色体异常362例(2.4%),包括非整倍体异常305例(84.3%)与结构异常(含嵌合异常)57例(15.7%)。不同产前诊断指征孕妇染色体异常检出率差异具有统计学意义(P<0.001),其中NIPT提示性染色体异常孕妇的检出率为48.37%。47,XXY的检出率在不同年龄组间的差异有统计学意义(χ^(2)=4.97,P<0.05)。多种技术联合应用将复杂异常检出率由2.1%提高到了2.4%。结论NIPT检测对于筛查胎儿性染色体异常具有显著意义。羊水产前诊断性染色体异常主要为数目及嵌合体异常,其中47,XXY与年龄因素显著相关。染色体核型分析联合FISH及CMA检测有助于复杂性染色体异常的明确诊断。

大豆深加工产品两种荧光定量PCR检测方法的比较研究

以内源基因Lectin作为内参照,根据RR大豆中外源基因CP4-EPSPS和内源基因Lectin设计TaqMan和SYBR GreenⅠ引物和荧光探针,使用定量PCR仪对大豆深加工产品中RR大豆的含量使用两种FQ-PCR方法进行定量检测,建立了RR大豆标准品CP4-EPSPS和Lectin之间的△Ct与样品中RR大豆含量百分比之间的校正曲线和线性回归方程,并对5种未知大豆深加工样品进行检测,同时比较二者的检测结果。结果表明,说明TaqMan和SYBR GreenⅠ两种FQ-PCR检测技术的检测结果可靠,且均可用于转基因深加工产品的检测。

假肥大型肌营养不良症产前基因诊断的临床应用

目的 建立规范的假肥大型肌营养不良症 (DMD/BMD)产前基因诊断程序。方法 利用DMD基因内 18个缺失热点的PCR引物 ,6个DMD基因内 (CA)n短重复序列 (STR)引物以及性别决定基因SRY引物 ,多重聚合酶链反应检测羊水胎儿脱落细胞、先证者和双亲外周血有核细胞基因组DMD基因 ,通过胎儿性别确定、基因缺失检测和基因连锁分析确定胎儿DMD基因状态。结果 在 4例先证者基因缺失家系的产前诊断中 ,2例男胎DMD基因缺失与先证者相同 ,1例女胎为基因缺失携带者 ,1例男胎未发现缺失 ;在 4例有 2个或 2个以上患者且先证者未检出缺失的家系产前诊断中 ,发现获得风险染色体的男胎与女胎各 1例 ,余1例女胎和 1例男胎均未携带风险染色体。检测结果的可靠性经流产胚胎和已出生胎儿DNA分析、DMD临床症状监测得到部分证实。结论 胎儿性别基因诊断、DMD基因缺失检测结合基因连锁分析的方法 ,在严格控制检测范围、规范的检测程序和有效的质量控制下 ,能准确地对DMD/BMD进行产前基因诊断 。

肺癌患者外周血淋巴细胞亚群计数水平的比较分析

目的探究肺癌患者外周血淋巴细胞亚群计数水平变化及临床意义。方法收集长春肿瘤医院2021年1月至2021年12月收治的190例肺癌患者,并选择同期体检的24例健康人作为对照组。应用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群细胞(包括CD3^(+)、CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、CD3-CD19^(+)与CD3-CD56^(+))绝对计数与百分比,分析肺癌患者与健康人群之间,不同病理类型、不同临床分期肺癌患者的淋巴细胞亚群计数水平的差异。结果肺癌患者淋巴细胞各亚群绝对计数均低于健康人群(P<0.05),CD3^(+)细胞与CD3^(+)CD4^(+)T细胞百分比低于健康人群,而CD3^(+)CD8^(+)T细胞百分比高于健康人群(P<0.05)。非小细胞肺癌患者淋巴各亚群绝对计数水平明显高于小细胞肺癌患者(P<0.05),CD3^(+)细胞百分比低于健康人群和小细胞肺癌患者而CD3-CD56^(+)细胞百分比高于健康人群和小细胞肺癌患者(P<0.05)。随临床分期的进展,在非小细胞肺癌CD3^(+)细胞与CD3^(+)CD4^(+)T细胞百分比呈现递减趋势(P<0.05),在小细胞肺癌无差异。结论肺癌患者的免疫功能较健康人群减弱,且随着肺癌分期的进展其免疫功能减弱的程度递增,非小细胞肺癌患者的免疫功能减弱以T淋巴细胞主导的细胞免疫功能低下为主,而小细胞肺癌患者免疫功能减弱以NK自然杀伤细胞功能低下更为显著。

与老龄相关的豚鼠线粒体基因组缺失的定位研究

目的 准确定位与老龄相关的豚鼠 m t DNA大片段缺失位点。方法 参照人类和大鼠线粒体 DNA大片段缺失的共同规律 ,运用计算机软件寻找豚鼠 m t DNA可能的缺失位点 ,采用聚合酶链反应 (PCR)、套式 PCR技术与 DNA测序技术 ,扩增豚鼠 m t DNA基因组可能的缺失区 ,并进行序列分析。检测耳蜗螺旋器组织、蜗神经组织、大脑颞叶组织中 mt DNA缺失的位点和片段大小 ,及 mt DNA大片段缺失的发生率。结果 首次发现豚鼠 mt D-NA在 nt86 36～ nt132 0 3位点之间存在 4 5 6 8个碱基的大片段缺失 ;老年豚鼠各组织中 mt DNA缺失率与青年组比较均有显著差异 ,前者 mt DNA缺失率明显高于后者。结论 豚鼠 mt DNA CO 与 ND5基因间有 4 5 6 8个碱基片段缺失。 mt DNA4 56

基于网络药理学和分子对接研究蒙药额尔敦-乌日勒对帕金森病的作用机制

目的:基于网络药理学方法挖掘蒙药额尔敦-乌日勒治疗帕金森病的主要活性成分和药物靶点,揭示其潜在的可能作用机制,并运用分子对接研究药物与靶点蛋白结合能力。方法:依据中药系统药理学分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSCP)挖掘额尔敦-乌日勒的活性成分及对应靶点,以药动参数生物利用度(oral bioavailability,OB)≥30%、类药性(drug-likeness,DL)≥0.18:为条件进行筛选,运用GeneCards、OMIM和TTD数据库筛选出额尔敦-乌日勒活性成分治疗帕金森病的可能靶点,运用Cytoscape 3.9.1绘制Venn图,借助STRING数据库绘制蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络图;应用微生信在线软件及Metascape数据库查找蒙药额尔敦-乌日勒潜在的活性成分及治疗帕金森病的潜在作用靶点,并将靶点进行基因本体(gene ontology,GO)及京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,并将药物小分子和靶点蛋白进行分子对接。结果:蒙药额尔敦-乌日勒中筛选出DL及OB值好的活性成分118种,预测治疗帕金森病的靶点207个,GO功能富集分析及KEGG富集分析显示,蒙药额尔敦-乌日勒治疗帕金森病的机制主要涉及RNA聚合酶启动子转录的正调控、正调控DNA模板转录和调控基因表达等生物过程,其涉及的通路包括AKT1、TP53、TNF、VEGFA、CASP3等。结论:蒙药额尔敦-乌日勒治疗帕金森病是多成分、多靶点、多通路的作用结果,为蒙药额尔敦-乌日勒治疗帕金森病的进一步研究提供了理论依据。