山莨菪硷及川芎嗪预防大鼠肺水肿的实验研究——肺血管壁通透性变化

山莨菪硷及川芎嗪对大鼠肺水肿有明显的预防作用,在肺水肿发生机理中,肺泡一毛细血管通透性增高是中心环节之一。静脉注射Evans蓝后,先注射肾上腺素造成肺水肿,用山莨菪硷或川芎嗪进行预防,应用本实验方法测定肺脏浸泡液中Evans蓝含量及肺泡支气管洗涤液中Evans蓝含量并算出通透指数。按正常组、肺水肿组、山莨菪硷组、川芎嗪组次序结果为:肺脏浸泡液中Evans蓝含量为6.3±2.6、23.6±7.5、11.3±9.3、15.8±11.0(pg/ml);支气管肺泡洗涤液中Evans蓝通透指数为0.26±0.06、19.1±3.8、1.46±0.56、1.66±1.40,肺水肿组与其他三组均有非常显著性差异,P<0.01。结果说明,肺水肿时肺—毛细血管及肺泡上皮通透性增高,山莨菪硷和川芎嗪能抑制这种增高。

全脑缺血预处理诱导大鼠海马缺血耐受的实验研究

目的和方法 :采用大鼠四血管闭塞全脑缺血模型 (4 vesselocclusion ,4VO)及组织病理学方法 ,观察预缺血的持续时间 ,和预缺血与其后的损伤性缺血之间的间隔时间对海马缺血耐受形成的影响。结果 :缺血 6min即可导致海马组织明显的神经元延迟性死亡 (delayedneurondeath ,DND) ,而缺血 3min不足以引起海马组织明显的DND。经过 3min缺血预处理 ,可对间隔 1d和 3d后 6min缺血引起的大鼠海马DND产生明显的保护作用 (P <0 .0 1)。但是 ,1min缺血预处理对间隔 1d后 6min缺血引起的DND不产生明显影响 ;5min缺血预处理对间隔 1d后 6min缺血 ,以及 3min缺血预处理对间隔 1h后 6min缺血引起的DND不但没有保护作用 ,反而有使海马组织损伤累积加重的趋势。结论 :在 4VO大鼠模型中 ,全脑缺血预处理确能诱导海马对缺血性损伤产生耐受 ,诱导海马缺血耐受所需缺血预处理的适宜期间为 3min左右 ,预缺血与后续损伤性缺血之间需要间隔足够的时间 ,适宜间隔在 1～3d左右。

高碘地方性甲状腺肿发病机理的实验研究

本实验历时360天分六批观察了小鼠甲状腺形态、功能及超微结构的改变,结果表明:在低碘甲状腺肿形成的整个过程中,血清 T_4处于低水平,TSH 水平较高,光镜和电镜下组织象呈现活跃增生状态,与以往报告结果一致。而在高碘甲状腺肿形成的整个过程中,血清 T_4从未降低,TSH 与对照组相近,组织象处于相对稳定状态,从未观察到受 TSH 刺激而出现的组织活跃增生现象。故高碘地甲肿是在高碘情况下,甲状腺合成了较多的甲状腺激素,通过机体自动调节,将合成的大量激素贮存积滞在甲状腺滤泡腔中,最终形成了胶质性甲状腺肿。

蝎毒多肽提取物联合5-氟尿嘧啶对H_(22)肝癌血管生成拟态形成的作用及机制研究

目的观察蝎毒多肽提取物(polypeptide extract from scorpion venom,PESV)联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对小鼠H22肝癌移植瘤血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成的抑制作用并探讨其可能的作用机制。方法 60只昆明小鼠,皮下接种H22肝癌细胞悬液建立荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-氟尿嘧啶组(5-Fu组)、联合组(PESV+5-Fu),每组20只,连续干预14天,隔日测量肿瘤体积,绘制肿瘤体积增殖曲线,并计算抑瘤率;HE染色法观察肿瘤组织的形态学改变;免疫组织化学法和过碘酸雪夫氏染色(PAS)双标法检测各组肿瘤组织VM密度;免疫组织化学法检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的蛋白表达水平,用LeicaQwin V3图像分析软件进行灰度值半定量分析。结果联合组和5-Fu组H22肝癌移植瘤的生长较荷瘤对照组均受到明显抑制(P<0.05),且联合组和5-Fu组瘤重和肿瘤体积亦存在显著差异(P<0.05);免疫组织化学法和PAS双标法检测显示,联合组VM密度明显低于荷瘤对照组和5-Fu组(P<0.01);与荷瘤对照组比较,联合组HIF-1α和MMP-2的蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论 PESV联合5-Fu可抑制小鼠H22肝癌移植瘤VM形成,其机制可能与抑制肿瘤微环境中HIF-1α和MMP-2的表达有关。

不同剂量乙醇对小鼠早期肝纤维化的影响及机制研究

目的:探讨2种不同剂量乙醇诱导的小鼠早期肝纤维化过程中的病理改变以及相关机制的异同。方法:24只雄性昆明种小鼠随机分为正常对照组及高、低剂量乙醇诱导组。诱导组小鼠分别给予8g·kg-1·d-1,3g·kg-1·d-1乙醇经口灌胃30d,留取肝组织。苏木素伊红(HE)染色、Masson染色进行形态学观察,炎症活动度分级、纤维化程度分期并计算每高倍视野胶原纤维面积;免疫组织化学染色、免疫印迹(Western blotting)分别检测肝组织内Toll样受体4(TLR-4)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,转化生长因子β(TGF-β)、核因子-κB(NF-кB)蛋白浓度;实时荧光定量PCR检测骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂(Bambi)mRNA含量;原位末端标记(TUNEL)法标记肝组织凋亡细胞并计数。结果:乙醇诱导组均出现不同程度纤维组织增生(P<0.01),肝星形细胞(HSCs)活化,凋亡细胞数增多(P<0.01);高剂量组较低剂量组小鼠肝纤维化趋势更为明显,该组凋亡细胞数也较低剂量组明显增高,但BambimRNA含量较低剂量组显著降低(P<0.05);TLR-4蛋白在低剂量组表达明显上调但在高剂量组表达受到抑制(P<0.01)。结论:2种剂量乙醇诱导的小鼠肝早期纤维化的机制存在差异。高剂量乙醇所致肝纤维化过程中,凋亡机制可能较TLR-4通路具有更重要的作用,同时Bambi的下调存在不依赖于TLR-4的信号途径,这可能也是该组纤维化程度更高的原因之一。

人鼻咽癌细胞胞质内骨架系统的观察和维胺酸作用后对其影响的研究

用原位包埋法、细胞质骨架生物化学抽提、免疫组织化学和组织化学等方法，对正常人胚肺成纤维细胞、非洲绿恒河猴肾上皮细胞和人鼻咽癌细胞胞质骨架的形态学特征作了比较观察，并就维胺酸对人鼻咽癌细胞胞质骨架的形态分布、角蛋白、波形纤维蛋白等骨架成分的影响进行了研究。结果表明，与正常细胞相比，人鼻咽癌细胞胞质内骨架系统发育不良。维胺酸作用后，癌细胞中细丝状骨架纤维增多，并出现应力纤维束样排列，角蛋白增加。

蝮蛇毒抗栓酶的促纤溶和抗凝血作用的实验研究

本工作利用大鼠衄管灌流及异丙肾上腺素(ISP)性AMI模型,以体外纤维蛋白溶解活性、纤溶酶原激活剂(PA)活性,血浆纤溶酶(PL)活性、凝血酶原时间(PT)、白陶土部分凝血活酶时间(KPTT)等变化,观察蛇毒抗栓酶(SVATE)的促纤溶、抗凝血和心肌保护作用。结果表明,SVATE有缴活纤溶怍用,它能逆转ISP性AMI大鼠PL活性的降低,这种作用是由于激活PA导致PL生成增加。同时对内源凝血系统有一定抑制作用。此外保护心肌、降低死亡率。

胸腺素对中老年小鼠自发肿瘤影响的研究

实验用中老年BALB/C纯系小鼠,皮下注射猪胸腺素(PT)。实验10个月时(即20个月龄)时,生理盐水(NS)对照组和维生素E(VE)组的胸腺重量明显小于PT组和PT+VE组。经连续喂养,PT组、PT+VE组与NS组、VE组比较,前者小鼠的存活时间明显延长,其肺癌和脾脏淋巴瘤发生率明显降低。实验表明,胸腺素具有较长期保持机体免疫功能,延长生存期及抗自发瘤的作用。

纤溶系统激活的实验研究—儿茶酚胺对纤溶活性的影响

用不同浓度儿茶酚胺灌流大鼠下肢血管床,观察它们对血管内皮细胞释放纤溶酶原激活剂(PA)的作用。结果显示,同样浓度(25μM)儿茶酚胺所引起的PA释放效应以肾上腺素为最强,去甲肾上腺素次之,异丙基肾上腺素作用最弱,PA活性分别是0.202±0.038,0.117±0.006,0.097±0.007(U/ml,(?)±SE)。β肾上腺素能受体阻断剂心得安完全拮抗异丙基肾上腺素诱导PAL活性升高,部分抑制去甲肾上腺素、肾上腺素的作用。α、β肾上腺素能受体阻断剂(酚妥拉明+心得安)协同作用时,肾上腺素、去甲肾上腺素的这种PA活性升高效应基本抑制。本文还发现,剧烈运动产生应激反应时血浆去甲肾上腺素含量明显升高,为2.45±0.45(ng/ml,(?)±SE),与对照值(0.88±0.20)比P<0.01。与此同时伴随纤溶活性显著增加。实验结果提示:外源性儿茶酚胺诱导PA释放效应主要经由β肾上腺素能受体介导,α肾上腺素能受体涉及部分作用,内源性儿茶酚胺水平升高可引起纤溶活性增加。

缺氧性肺血管收缩机制的研究进展

一、钙离子与缺氧性肺血管收缩已有证据表明缺氧性肺血管收缩(HPVC)与血管平滑肌细胞的Ca^(2+)跨膜流入量增多有关。

大肠杆菌L型对小鼠致病性的研究

本文应用人工诱导的大肠杆菌L型经血行和膀胱感染小鼠,通过细菌学和病理学检查发现,大肠杆菌L型直接感染可引起小鼠多个脏器的间质性炎症,并观察到注射免疫抑制剂的小鼠较正常小鼠发病率高、病变重;血行感染较膀胱感染发病率高。

用PCR技术研究缺氧时大鼠肺肾上腺素能β_2受体及其mRNA的变化

本文观察常压缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织β和β＿２受体以及β受体ｍＲＮＡ含量的变化。动物分对照组，缺氧２周及４周组。用放射性配基结合法测定β和β＿２受体，用反转录一聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和液体闪烁计数测定β＿２受体ｍＲＮＡ的变化。结果表明，缺氧２及４周大鼠肺组织β受体从对照组的２２４．９±２３．７ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白分别下降到１４７．０±１９．４和１４２．７±３．１ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，（均Ｐ＜０．００１）。β＿２受体从对照组的１７３．８±２１．４ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白分别降至６７，１±１１．８和３８．１±４．０ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，（与对照比及缺氧组间比均Ｐ＜０．００１）。缺氧２周时β＿２受体ｍＲＮＡ水平与对照相比无变化，缺氧４周时明显下降（为对照的４２％，Ｐ＜０．００１）。缺氧４周β＿２受体下降可能与此有关。揭示缺氧后肺β＿２受体下降的分子生物学基础。对肺动脉高压发生发展机制提供新的认识。

酒精性肝纤维化中主要信号转导通路的研究

在酒精性肝病的进展过程中,乙醇在体内代谢通过多个环节诱导肝星状细胞(HSC)活化增殖,导致肝纤维化的发生,这个过程是向酒精性肝硬化进展的病理阶段,早期具有可逆转的特点。了解参与HSC活化增殖的相关细胞因子介导的信号转导通路可为逆转酒精性肝纤维化提供有效的靶向。目前研究较多的信号途径包括TGF-β/Smads通路、Wnt/β-catenin通路和NF-κB通路等。

脑预缺血引起大鼠海马细胞膜腺苷受体数量和亲和力升高及其对神经元的保护作用

采用放射性配基结合法 ,测定大鼠全脑缺血后海马细胞膜腺苷 (adenosine,ADO)受体数量及亲和力的变化 ,以探讨其与脑缺血耐受形成之间的关系。发现缺血 6min即可导致海马组织明显的神经元延迟性死亡 (de layedneurondeath ,DND) ,缺血 3min不足以引起海马组织明显的DND ;而经过 3min预缺血处理 ,可明显减轻间隔1d后 6min缺血引起的海马DND (P <0 0 1)。与此相对应 ,缺血 3min再灌 1和 3d时 ,ADO受体数量及亲和力明显高于sham组 (P <0 0 5 ) ,而缺血 6min再灌 1和 3d时 ,ADO受体数量明显低于sham组 (P <0 0 5 ) ,但亲和力高于sham组 (P <0 0 5 )。与单纯 6min缺血再灌 4h、1和 3d时相比 ,3min预缺血 + 6min缺血 (间隔 1d)再灌后 ,ADO受体数量及亲和力均显著升高 (P <0 0 5 )。这些结果表明 ,脑预缺血处理可使大鼠海马细胞膜ADO受体数量增多 ,亲和力增强 ,并能对抗损伤性缺血引起的ADO受体数量减少 ,提示腺苷受体数量及亲和力的变化在脑缺血耐受形成过程中发挥了重要的作用。

大鼠肺纤维化形成中肺巨噬细胞增殖和凋亡的变化

目的:观察肺纤维化形成过程中,肺泡巨噬细胞数量、增殖和凋亡的变化。方法:气管内滴注平阳霉素(BLMA_5)(5mg/kg),观察注后14d和30d组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞数量、增殖和凋亡的变化以及细胞的MTT活力。结果:(1)BLMA_5 14d组和30d组大鼠BALF中巨噬细胞数分别多于sham 14d和30d组,(分别P<0.01,P<0.05);但BLMA_5 30d组的细胞数明显少于BLMA_5 14d组(P<0.05);(2)BLMA_5 14d组巨噬细胞增殖指数高于sham 14d组(P<0.05),而BLMA_5 30d组增殖指数低于sham 30d组(P<0.05);(3)BLMA_5 14d和30d组凋亡细胞数分别多于sham 14d和30d组(P<0.01),但BLMA_5 14d组少于BLMA_5 30d组(P<0.05);(4)BLMA_5 14d和30d组大鼠BALF中巨噬细胞数MTT活力分别高于sham 14d和30d组,分别P<0.01,P<0.05。结论:在肺纤维化形成过程中,肺巨噬细胞增殖能力先增强后减弱;而肺巨噬细胞凋亡始终增加,上述变化是导致肺巨噬细胞数量和功能变化的因素之一。

缺氧诱导因子-1α在缺氧预处理预防心肌细胞损伤中的作用

本工作旨在研究缺氧预处理(hypoxic preconditioning, HPC)对于心肌细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulatedprotein kinases, ERK)活性、缺氧诱导因子 -1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)表达的影响,及其在缺氧复氧诱导心肌细胞损伤中的作用。通过在培养的SD 乳鼠心肌细胞缺氧/ 复氧(H/R)模型上, 观察HPC 对于24 h 后H/R 诱导心肌细胞损伤的影响, 以台盼蓝排斥实验检测心肌细胞存活率、以 TUNEL 法检测细胞凋亡、并用荧光素染料 Hoechst33258 测定心肌细胞凋亡率; 制备心肌细胞蛋白提取物,以磷酸化的 ERK1/2 抗体测定 ERK1/2 活性, 以抗HIF-1α 抗体检测 HIF-1α 的表达,并观察ERKs 的上游激酶(MEK1/2)抑制剂PD98059 对于HPC 诱导的ERKs 磷酸化、HIF-1α 表达以及心肌细胞保护作用的影响,并分析细胞损伤与 ERK1/2 活性、HIF-1α 表达量之间的相互关系。结果显示缺氧复氧造成心肌细胞损伤, HPC 可以增加心肌细胞 H/R 后存活率,降低凋亡率,并激活 ERK1/2,诱导 HIF-1α 表达;细胞凋亡与 ERKs 活性、HIF-1α 表达量之间存在负相关,即 ERKs 活化、HIF-1α 表达与预防细胞损伤有关;而 ERKs 活性与 HIF-1α 表达量之间存在正相关,ERKs 的上游激酶MEK抑制剂PD98059 可以消除HPC

山茛菪硷及川芎嗪对肺水肿大鼠的生存率、肺指数及形态学观察

静脉注射肾上腺素可造成大鼠剧烈的致死性肺水肿,动物于5分钟内全部死亡,类似于临床上中枢性肺水肿,属混合性肺水肿。用中药山茛菪硷及川芎嗪进行预防,效果十分明显。以正常组、肺水肿组、山茛菪组、川芎嗪组为序,存活率为100%、0%、96%、80%。生存时间为30分、4分5秒±27秒、28分43秒±4分36秒、25分12秒±9分36秒。((?)+SD,生存时间计算,正常组30分钟处死,预防组30分钟不死者亦处死,均算30分钟。)肺指数为0.48±0.06、1.70±0.47、0.74±0.39、0.83±0.55。上述指标各组与肺水肿组相比,均P<0.01。病理镜检见肺水肿组肺组织的正常结构破坏,间质及肺泡充满大片水肿液,充血、出血,间质增宽、两预防组均接近正常组。结果表明两种药对大鼠肺水肿有明显预防作用。

黄芩苷对博莱霉素诱导的肺纤维化的影响

目的:观察黄芩苷(Bai)对博莱霉素(BLM)诱导的肺纤维化的影响,并探讨了可能的机制。方法:68只雄性SD大鼠,随机分为以下4组:BLM+Bai组、BLM+生理盐水(NS)组、NS+Bai组和NS+NS组。气管内一次性滴注BLM(5 mg.kg-1bw)或等体积NS的当天腹腔注射Bai(12.5 mg.kg-1.d-1,×28 d)或等体积NS。检测肺羟脯氨酸含量、肺胶原纤维阳性面积、肺Ⅰ型前胶原[ColⅠ(α)]mRNA表达、肺间质肌成纤维细胞数量。结果:与对照大鼠相比,气管内滴注BLM后第28 d,大鼠的肺组织羟脯氨酸含量增高;肺间质胶原纤维阳性面积增大;肺内ColⅠ(α)mRNA含量增高;肺间质肌成纤维细胞数量增多(均P<0.01)。上述指标的异常变化均在腹腔注射Bai后有所改善(均P<0.05)。结论:Bai有阻止BLM诱导肺纤维化的作用;Bai的上述作用与其阻止肺内Ⅰ型胶原异常合成和阻止肺间质肌成纤维细胞数量增多有关。

黄曲霉毒素G_1对体外原代培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响

目的进一步研究黄曲霉毒素G1(AFG1)对可能作用的靶细胞SD大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)损伤的生物学作用。方法以酶消化法原代培养SD大鼠AT-Ⅱ,纯化后培养36h,分别给予不同浓度(0.5,1.0和2.0mg.L-1)的AFG1处理。AFG1作用24h后,收集细胞和培养基上清液及细胞爬片,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率、生物化学方法检测细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)和碱性磷酸酶(AKP)活力、透射电镜方法观察AT-Ⅱ超微结构的改变、激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)检测Fluo-3/AM负载细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)、免疫细胞化学、CLSM及流式细胞术(FCM)方法检测AT-Ⅱ特异分化标志物肺表面分泌蛋白C(SP-C)表达情况。结果给予不同浓度AFG1处理后,体外培养AT-Ⅱ细胞存活率分别为(88±3)%,(80±9)%和(72±8)%,明显低于溶剂对照组(101±2)%(n=6,P<0.01);培养上清液中LDH和AKP活力明显增高;透射电镜观察可见上皮细胞板层小体出现空化,线粒体肿胀、空泡化等损伤性变化。CLSM结果显示,AFG10.5,1.0和2.0mg.L-1处理组,AT-Ⅱ细胞内平均钙离子荧光强度分别为200±21,225±14和229±12,明显高于溶剂对照组161±28(n=6,P<0.01),有明显浓度依赖关系(r=0.849);免疫细胞化学、CLSM及FCM检测结果显示AFG1处理组AT-ⅡSP-C蛋白表达明显低于溶剂对照组。结论AFG1对体外培养的大鼠AT-Ⅱ具有明显致损伤作用,同时增加细胞[Ca2+]i、降低SP-C蛋白的表达。