家兔中性粒细胞防御素的纯化及其对念珠菌抗菌活性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化兔中性粒细胞防御素，兔中性粒细胞防御素ＮＰ２具有抗白念珠菌Ｍ１０１２Ｒ，ＮＩＨ Ａ－２０７，乳酒念珠菌，热带念珠菌和高里氏念珠菌等菌的活性，且抗菌活性随防御素浓度的升高而增强．

榄香烯乳胸腔灌注对恶性胸水渗出液相关淋巴细胞(EAL)增殖及其LAK活性的增强作用实验研究

作者研究了榄香烯乳胸腔灌注对恶性胸水中渗出液相关淋巴细胞（EAL）的增殖和LAK活性的影响。结果显示，榄香烯乳能够明显促进EAL细胞增殖共产生显著的LAK活性，榄香烯乳还具有增强IL－2诱导的EAL细胞增殖效应及其LAK活性的作用，提示榄香烯乳与IL－2联合应用有可能产生增效作用。榄香烯乳的抗肿瘤免疫机制可能是通过作用于IL－2R／IL－2系统激活EAL细胞而发挥其抗肿瘤作用。结果提示，榄香烯乳有希望成为一种新型免疫增强剂而扩大应用于恶性肿瘤的免疫治疗。

新型结核病疫苗研究进展

本文从蛋白质亚单位疫苗、DNA疫苗、重组卡介苗、新型减毒活疫苗和以非致病性分枝杆菌为载体的重组疫苗几方面概括地介绍了目前新型结核病疫苗研制的现状。

cAMP对lac基因启动子体外转录影响的研究

目的：研究ｃＡＭＰ对ｌａｃ基因启动子体外转录的影响作用。方法：以含ｌａｃ基因启动子及其Ｚ结构基因的线性ｐＵＲ２２２ＤＮＡ为模板，观察Ｅ．ｃｏｌｉＲＮＡ聚合酶受ｃＡＭＰ作用后的转录强度。结果：０．１０～０．８０ｍｍｏｌ／Ｌ的ｃＡＭＰ对ｌａｃ基因启动子体外转录有明显的促进作用，低于０．１０ｍｍｏｌ／Ｌ对体外非特异性转录有促进作用；浓度进一步增高对转录起抑制作用。ｃＡＭＰ作用下特异性与非特异性转录产物放射活性间无相关性。结论：ｃＡＭＰ对转录有双重作用，这种作用可能与启动子区的构象特点及ＲＮＡ聚合酶与启动子的特异结合有关。

表面带活性羧基的新型长循环脂质体的制备和组织分布研究

合成和纯化了一个带末端羧基的新的磷脂酰乙醇胺的聚乙二醇衍生物－DPPE－PEG3000－COOH。将这个化合物掺入脂质体后，脂质体在网状内皮系统（肝，脾）的聚集减少，在血中的循环时间明显延长，并表现为一级对数线性消除。脂质体表面的活性羧基可以和其它活性分子反应，这可能为脂质体带来新的功能。

精脒促进E.coli非特异性转录的研究

本文以ＥｃｏＲＩ酶切的质粒ｐＢＲ３２２为模板，在体外转录系统中研究了精脒对Ｅ．ｃｏｌｉＲＮＡ聚合酶非特异性转录活性的作用。结果表明：０．５０—１０．００ｍＭ精脒对转录有明显促进作用，２．５０ｍＭ作用最强；精脒的对数浓度与转录产物相对放射活性间呈正态分布曲线。

乌贼墨抗肿瘤活性的实验研究

用乌贼墨致敏小鼠后采集血清。体外试验证明，乌贼墨致敏血清对Ｌ＿（９２９）细胞有杀伤作用。致敏血清粗提液，经局部和静脉注射荷ＭｅｔｈＡ瘤鼠体内，２４ｈ后见肿瘤组织有出血、坏死，细胞核溶解等现象。乌贼墨的抗肿瘤活性可能是乌贼墨诱生了肿瘤坏死因子。

人胚胎胰岛分泌白细胞介素6的动力学研究

目的：阐述ＩＬ－６与胰岛功能或胰岛病变的可能关系。方法：采用常规消化方法分离人胚胎胰岛并进行原代培养，培养上清进行ＩＬ－６、胰岛素、胰高血糖素活性测定和ＩＬ－６ＭｃＡｂ中和实验，同时对胚胎胰岛进行体外葡萄糖刺激实现。结果：原代培养的胚胎胰岛在４０ｈ内ＩＬ－６分泌呈上升趋势（３７～１５３ｍＵ／胰岛），每２４ｈ重新换取新培养液作为一个分泌周期，ＩＬ－６分泌以第１周期最高（１０６ｍＵ／胰岛），体外连续培养ＩＬ－６的分泌以１ｄ最高（１４５ｍＵ／胰岛），用ＩＬ－６ＭｃＡｂ可以阻断胰岛培养上清中ＩＬ－６的活性；胰岛素、胰高血糖素的分泌周期与ＩＬ－６不同；葡萄糖刺激明显促进ＩＬ－６的分泌，其分泌趋势与胰岛素分泌一致。结论：原代培养的人胚胎胰岛在无任何刺激情况下可自发分泌ＩＬ－６，而且ＩＬ－６的分泌有自己的分泌环路。

限制进食刺激对肠上皮淋巴细胞数量和杀伤活性的影响

通过对限制进食刺激影响消化道肠上皮淋巴细胞及细胞亚群数量和杀伤活性的研究，发现限制小鼠进食２ｄ后，ＩＥＬ总数明显下降，并随限制进食时间的延长其总数下降更为明显。流式细胞分析仪检测结果显示，在给予刺激２ｄ，αβ－ＩＥＬ百分比明显下降，而γδ－ＩＥＬ百分比却有所上升；限制进食５ｄ后，二种细胞亚群百分比均较对照组降低。ＩＥＬ杀伤活性在限制进食２ｄ时略有升高，以后下降，限制进食５ｄ实验组ＩＥＬ杀伤活性明显低于对照组。

卡介苗诱导人肺腺上皮细胞hBD-1mRNA的增强表达

使用热灭活的卡介苗刺激培养的人肺腺上皮细胞(SPC－A－1)，利用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法和Northern杂交分析，证实了卡介苗能诱导SPC－A－1细胞β－防御素－1基因(hBD－1)的增强表达。卡介苗菌量和刺激时间与SPC－A－1细胞hBD－1基因表达量的关系曲线显示，hBD－1 mRNA 在人肺腺上皮细胞的增强表达在一定范围内表现为具刺激剂量和时间依赖关系。实验为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下了基础。

大鼠β-防御素rBD-2的分子克隆及其在皮肤组织的诱导表达

从大鼠皮肤提取总 RNA,以 P1 5′→ 3′TTCAGTCATGAGGATCCATTAC和 P2 5′→ 3′GGTTCTTGGTCTTTTTATCTAC引物 ,采用 RT- PCR技术扩增得到一 c DNA片段 ,经核苷酸序列测定 ,并根据其推导的氨基酸序列与人 β-防御素 - 2和大鼠 β-防御素 - 1进行同源性比较 ,结果显示 ,该 c DNA片段编码的氨基酸序列具高度同源性 (其成熟肽与 h BD- 2的同一性为 5 0 % ,相似性为 32 % ) ,均含 6个典型的半胱氨酸 ,这表明所克隆的 c DNA为大鼠 β-防御素 - 2亚类 ,因此命名为 r BD- 2。大鼠 β-防御素 - 2基因在大肠杆菌感染性损伤皮肤组织中的表达明显增强 ,与人 h BD- 2的表达相似 ,能够被诱导表达。以上结果提示 ,β-防御素 - 2可能是皮肤组织对感染性损伤的防御反应所产生的重要免疫介质。

阻断类胰岛素生长因子-1-受体系统对肌腱细胞生长的影响

为了进一步探索调控肌腱细胞生长的方法，在肌腱细胞体外培养条件下，采用多种手段阻断类胰岛素生长因子１（ＩＧＦ１）受体系统的不同环节，观察其对肌腱细胞生长的负调节作用。结果发现，ＩＧＦ１受体的抗体（ＩＧＦ１Ｒα）和合成的ＩＧＦ１受体的ｍＲＮＡ的反义寡核苷酸链，对肌腱细胞的增殖有负调节作用。认为，在人工肌腱的构建或防止肌腱粘连的实践中，可以考虑使用上述两种物质。

原发性肝细胞癌不同部位肿瘤浸润性淋巴细胞得率及成活率

目的探讨原发性肝细胞癌（ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＰＨＣＣ）肿瘤组织不同部位肿瘤浸润性淋巴细胞（ｔｕｍｏｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＴＩＬ）的得率和成活率，以便制备ＴＩＬ用于过继免疫治疗时正确切取标本。方法本实验对１２例ＰＨＣＣ肿瘤组织不同部位ＴＩＬ的得率和成活率进行了比较。结果肿瘤周围组织和肿瘤边缘组织ＴＩＬ得率和成活率最高，肿瘤实质组织次之，肿瘤中心坏死组织最低，正常肝脏组织、腹水、胆管癌栓内几乎无ＴＩＬ。结论制备ＰＨＣＣ组织ＴＩＬ时，切取肿瘤周围组织和肿瘤边缘组织效果较好。

肿瘤浸润淋巴细胞及重组白细胞介素2治疗原发性肝细胞癌

目的探讨联合应用肿瘤浸润性淋巴细胞（ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＴＩＬ）和重组白细胞介素２（ｒＩＬ２）治疗对原发性肝细胞癌（ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＰＨＣＣ）术后患者细胞免疫功能的影响和其临床疗效。方法对１６例ＰＨＣＣ术后患者进行了ＴＩＬ和ｒＩＬ２治疗，１２例从肝动脉插管输入，４例从门静脉插管输入。结果ＴＩＬ治疗后１６例患者外周血白细胞介素２（ＩＬ２），Ｔ细胞亚群及比率均有不同程度上升；肿瘤坏死因子（ＴＮＦ），白细胞介素６（ＩＬ６）多有不同程度下降。随访６～２４个月，１４例肝癌根治性切除术患者，肿瘤无复发迹象，１例肝癌根治切除术患者ＴＮＦ上升了８ＩＵ，该患者治疗８个月后死于肝功能衰竭；１例肝癌姑息性切除，残癌无水酒精注射病人，ＴＩＬ治疗１８个月后肿瘤直径扩大２ｃｍ。结论ＴＩＬ治疗对提高ＰＨＣＣ术后患者抗肿瘤细胞免疫功能，防止肿瘤复发，抑制残瘤生长，延长患者生存期具有一定作用。

脐血输注对儿童急淋白血病患者白细胞、IL-2、SIL-2R和IL-6的作用

脐血输注对儿童急淋白血病患者白细胞、ＩＬ－２、ＳＩＬ－２Ｒ和ＩＬ－６的作用＊汪成孝１符仁义２王霞１王晓阳２贾苍松２章崇杰１赵宗蓉１张平１魏大鹏１＊四川省应用基础研究基金资助项目（９７－９－１５）；１（６１００４１）华西医科大学基础医学院免疫学研究室；...

结核杆菌Ag85A及ESAT-6双价抗原融合表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

目的 为结核病新型疫苗研究提供靶基因和靶抗原。方法 采用PCR扩增的方法获得结核杆菌两种免疫保护性抗原Ag85A及ESAT - 6的基因 ,将其定向克隆入真核及原核穿梭表达型载体 pBK -CMV构建含嵌合目的基因的重组质粒 ,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达 ,并通过SDS -PAGE和Western -blotting对表达蛋白进行初步分析。结果 1)从结核杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Ag85A及ESAT - 6基因。 2 )成功构建了结核杆菌Ag85A及ESAT - 6双价抗原融合表达质粒 pBK - 85A -E6。 3)重组质粒 pBK - 85A -E6经IPTG诱导后能在大肠杆菌中稳定表达 38kDa的融合蛋白。 结论 成功构建了结核杆菌Ag85A及ESAT - 6双价抗原融合表达载体 ,并在大肠杆菌中实现了稳定表达 ,为进一步研究其在结核病基因工程疫苗研制中的应用奠定了基础。

结核杆菌Ag85A/GM-CSF嵌合表达质粒的构建及表达

目的 探索对结核病DNA疫苗进行基因修饰的新方法。方法 以结核杆菌H3 7Rv 株基因组DNA为模板 ,通过PCR扩增获得结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因的成熟肽编码区 ,以经PHA诱导后的小鼠脾组织总RNA为模板 ,通过RT PCR获得小鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子的cDNA ,将二者定向克隆入质粒pBK CMV中构建含嵌合目的基因的重组质粒 ,转染培养的COS7细胞后检测嵌合目的基因的表达。结果 成功构建了小鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子cDNA与结核杆菌Ag85A抗原基因的真核嵌合表达质粒 ,重组质粒能在COS7细胞中进行稳定表达。结论 本研究首次将细胞因子基因与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合构建嵌合DNA疫苗 。

海洛因依赖者脱毒后白细胞介素-6及肿瘤坏死因子-α水平的变化

目的 观察海洛因依赖者脱毒后白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α的变化。方法 采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法检测１８ 例未给予任何治疗药物且停用阿片类药物４８ ～７２ 小时、１８ 例脱毒３３ ～５８ 天、１５ 例脱毒１１７ ～１２０ 天的海洛因依赖者的白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α水平，并同时对稽延性戒断症状或急性戒断症状进行评定。结果 与正常对照组相比，海洛因依赖者脱毒后的白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α显著高于正常对照组。白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α随着脱毒时间的延长逐步向正常恢复。结论 白细胞介素６ 和肿瘤坏死因子α可考虑作为海洛因依赖者脱毒后机体恢复的指标。

葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β_1的影响

目的探讨葡萄糖和胰岛素浓度的变化对Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β1的影响。方法体外常规培养Colon26肿瘤细胞,根据所用培养液外加葡萄糖和胰岛素浓度的不同,将实验所用细胞分为12组,培养48小时后收集上清液,ELISA法检测TGF-β1的浓度。结果(1)D组上清液TGF-β1的浓度明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);而B、C组上清液TGF-β1的浓度与A组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)E、F、G组上清液TGF-β1的浓度与A组相比,对Colon26肿瘤细胞上清液TGF-β1的分泌差异无统计学意义(P>0.05)。(3)L、M、N组上清液TGF-β1的浓度均明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.01);而H、K组上清液TGF-β1的浓度与A组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论(1)高浓度的葡萄糖能够增加Colon26肿瘤细胞培养上清TGF-β1的分泌。(2)不同浓度的胰岛素不影响Colon26肿瘤细胞TGF-β1的分泌。

大鼠β-防御素rBD-1cDNA克隆

为开展β－防御素基因表达调控分子机制及其转基因防治粘膜感染的研究，作者克隆了大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。从大鼠肾脏组织提取ＲＮＡ，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ｃＤＮＡ，并重组到ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ 载体，经限制性内切酶谱分析和ＤＮＡ序列测定，证实所克隆的ｃＤＮＡ片段为大鼠β－防御素ｒＢＤ－１ ｃＤＮＡ。