实验核医学研究性实验教学的实践

实验教学是实验核医学教学的重要组成部分,对于培养学生实验能力和科学思维非常重要。传统实验教学重视验证性实验操作,囿于一种统一、因循、易行的简单模式,对于学生的分散性思维和创新能力的培养不足。研究性实验教学主张综合性、设计性和以学生为本位的模式,变被动模仿为主动创新,对于培养学生自主解决问题的能力和意识大有裨益。苏州大学实验核医学实验教学依托"放射医学"国家重点学科,积极探索并开展研究性实验教学,形成了"规划准备-组织实施-成果评价"的三段论模式,并取得了良好的教学效果。

细胞核靶向富勒醇固体脂质纳米粒对小鼠亚致死剂量辐射损伤的预防作用

为研究细胞核靶向富勒醇固体脂质纳米粒(C60(OH)24-SLN-E)对亚致死剂量60Coγ射线照射致小鼠辐射损伤的防护作用,采用SPF级雄性ICR小鼠,连续7天腹腔注射细胞核靶向富勒醇硬脂质纳米粒,于第7天送往辐照中心接受60Coγ射线全身均匀照射,照射剂量为6 Gy,照射剂量率为0.42 Gy/min,观察照后小鼠一般情况、体重变化,测定照后14天小鼠外周血液学参数的变化。结果表明,细胞核靶向富勒醇固体脂质纳米粒(C60(OH)24-SLN-E)能有效减轻亚致死剂量60Coγ射线所引起的小鼠体重、外周血白细胞的降低,还可以促进照射后小鼠骨髓红系造血的恢复,与照射对照组相比差异有统计学意义(p<0.05)。说明细胞核靶向富勒醇固体脂质纳米粒(C60(OH)24-SLN-E)对受亚致死剂量60Coγ射线照射的小鼠具有一定的保护作用。

紫杉醇放射增敏作用的分子机制

背景与目的:紫杉醇作为一种放射增敏剂,能稳定微管系统,把细胞阻断在G2/M期从而改变肿瘤细胞的放射反应性。但其分子机制目前还未完全阐明,本文旨在研究紫杉醇的放射增敏作用及其分子机制。方法:克隆形成实验分析不同浓度紫杉醇联合不同剂量照射对KB细胞增殖抑制率的影响,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞放射增敏比并评价增敏效果;流式细胞仪检测KB细胞经紫杉醇及射线共同作用后细胞周期分布变化;采用基因芯片技术筛选与紫杉醇放射增敏作用相关的差异表达基因;荧光定量PCR验证芯片提示细胞分裂相关基因PRC1、cyclinB2的变化。结果:紫杉醇与射线协同作用能明显抑制KB细胞增殖,20nmol/L药物协同射线作用时SERD0及SERDq分别为2.40±1.87、12.23±2.81。药物加照射处理后G1期细胞由48.32±2.40%下降为15.73±7.00%(P<0.01),G2/M期细胞由13.66±2.16%上升到52.51±5.02%(P<0.01)。基因芯片结果显示的差异变化基因中共有176条与紫杉醇放射增敏作用相关,10条在调控细胞分裂过程中起作用,其中上调表达2条,下调表达8条。荧光定量PCR证实与细胞分裂相关的PRC1和CyclinB2均下调表达,与芯片结果一致。结论:紫杉醇对KB细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能是使细胞有丝分裂相关基因PRC1和CyclinB2表达特异性下调,导致双极纺锤体形成受阻,细胞无法完成正常的分裂,从而使细胞增殖受到抑制并最终死亡。

重组人酸性成纤维细胞生长因子皮肤用药的药代动力学

目的 研究rhaFGF在健康及破损皮肤用药的药代动力学特征。方法 在兔健康及破损皮肤上均匀涂抹1 2 5I rhaFGF 180U·cm- 2 后 ,在不同的时间测血浆及组织中的放射性计数 ,结合纸层析的方法测定组织和血浆中的1 2 5I rhaFGF的含量。结果 破损皮肤用药后 ,血中rhaFGF原型物浓度呈快速上升状态 ,0 5h达最大值 ( 73 0 3pg·mL- 1 ) ,其后迅速下降 ,3h后接近 0。1 2 5I rhaFGF给药后 96h ,放射性主要浓集于皮肤 ,其次是肾 ,大脑最少。结论 rhaFGF不能通过健康皮肤进入体内 ,可通过破损皮肤进入血循环 ,但吸收量少 ,原形物半衰期短 ,无蓄积作用 ;吸收后的rhaFGF对皮肤有较大亲和力 ,可分布于远处皮肤 。

^(125)I-[Tyr^3]-octreotide内化及杀伤NCI-H446细胞的研究

目的 探讨小细胞肺癌NCI H4 4 6细胞株内化 [Tyr3] 奥曲肽 ([Tyr3] octreotide,TOC)的能力及1 2 5I TOC杀伤NCI H4 4 6细胞的效应。方法 以1 2 5I TOC为放射配基 ,生长抑素受体 (SSTR)阳性细胞NCI H4 4 6于 37℃与1 2 5I TOC共同保温不同时间后 ,分别检测细胞的总结合、内化及结合到核上的1 2 5I TOC ;采用噻唑蓝 (MTT)法检测不同剂量1 2 5I TOC、游离1 2 5I及TOC在不同时间对细胞存活率的影响。结果 NCI H4 4 6细胞内化1 2 5I TOC和细胞核结合1 2 5I TOC呈时间依赖性 ,至 2 4h最高 ,结合到核上1 2 5I TOC的量为 0 5h的 7倍 ;1 2 5I TOC对SSTR阳性的NCI H4 4 6细胞的杀伤作用呈剂量 效应、时间 效应关系 ,以 74kBq1 2 5I TOC作用 96h的杀伤效应最大 ,细胞存活率降至 (4 4 8± 7 2 ) %。结论 1 2 5I TOC可在SSTR介导下内化进入细胞并可杀伤细胞 ,呈时间 效应和剂量 效应关系。

紫杉醇脂质纳米粒子对KB、SKOV3细胞的抑制作用

目的:研究并分析新型紫杉醇脂质纳米粒子(paclitaxel nanoparlicle,TAX-NLC)对KB、SKOV3细胞的抑制作用,为研制新型肿瘤靶向治疗药物提供实验依据。方法:激光共聚焦显微镜动态观察TAX-NLC进入细胞的过程,半定量测定TAX-NLC在细胞内的浓度;MTT法测定TAX-NLC对KB、SKOV3细胞增殖的抑制率;锥虫蓝拒染法计数TAX-NLC作用后的活细胞数,绘制细胞生长曲线。结果:激光共聚焦显微镜动态观察发现细胞内荧光强度逐渐增加,约2 h时达到饱和,胞内外荧光强度差达20～40倍;MTT结果表明,TAX-NLC、紫杉醇(paclitaxel,TAX)对细胞的生长均有抑制作用,并且存在时间和剂量的依赖关系,用药后72 h后抑制率最高达92%;细胞生长曲线显示,TAX-NLC、TAX对SKOV3、KB细胞有明显的抑制作用,前者的作用强于后者。结论:TAX-NLC可能是通过主动转运将紫杉醇载带入细胞内,并在细胞内浓聚,对KB、SKOV3细胞的生长具有较强的抑制作用;其可能是一个有前途的新型肿瘤靶向治疗药物。

肿瘤坏死因子和C反应蛋白预测急性心肌梗死泵功能的意义

本文观察了82例急性心肌梗死（AMI）患者泵功能与肿瘤坏死因子（TNF）和C反应蛋白（CRP）的关系。结果提示，TNF的高低与AMI泵功能分级无相关性，巨在AMI发病36小时内迅速消失；CRP与AMI泵功能不全呈显著负相关，当CRP＞52500μg／L时，左室射血分数＜0．35。

用^(188)Re直接标记octreotide

目的 探讨具有较高标记率和良好稳定性的1 88Re直接标记octreotide的方法。方法 采用预锡化法标记octreotide。①分别在标记后 1、2、3、4、5、6h测定标记率 ;②乙酸缓冲液pH值从3 8～ 5 .8;③淋洗液体积从 5 0～ 2 5 0 μL ;④多因素分析法同时改变octreotide和氯化亚锡的用量 ;⑤标记完成 0 .5h后分别加入人血清或生理盐水 5 0 μL ,室温下放置 48h以测定标记物体外稳定性。 结果1 88Re直接标记octreotide最佳标记条件 :0 .1mL葡萄糖酸钠 ( 0 .3mol L) ,0 .0 4mL浓盐酸溶解的SnCl2 ·2H2 O ( 2 0g L) ,0 .0 4mL 0 .2mol L乙酸缓冲液 (pH值 5 .0 ) ,0 .0 5mLoctreotide( 2g L) ,1 88ReO-4 淋洗液0 .1mL。1 88Re octreotide可达到最大标记率 ( 92 .6± 1.9) % ,室温下放置 2 4h标记率为 ( 86.6± 1 8) % ,在标记物中加入人血清 5 0 μL后室温下放置 2 4h标记率为 ( 84.2± 2 .7) %。标记反应中胶体含量均小于 8%。结论 预锡化直接标记法简便快速 ,能够得到较高的标记率 ,稳定性好 ,无需进一步纯化。

两种新型的MRI造影剂

用动物活体核磁共振Ｔ２分布像和Ｔ１加权像分别观测了超顺磁性氧化铁造影剂和电中性大分子锰配合物造影剂的实验结果。大白鼠肝部的活体测量结果显示，上述两种造影剂能分别显著地改变生物活体组织的Ｔ２和Ｔ１值．该实验结果对于磁共振造影剂的研制和人体的临床试验具有参考价值．

胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ的酶免疫分析

本文建立了胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ(PGⅠ、PGⅠ)的酶免疫分析(EIA)方法。将抗PGⅠ单抗PGA4或抗PGⅡ单抗PGC8包被在板条微孔内,制成固相抗体,用过碘酸钠方法将抗PGⅠ单抗PGA7或抗PGⅡ单抗PGC10与辣根过氧化物酶相联结,成为标记抗体,二者与不同量的PGⅠ、Ⅱ标准品在磷酸缓冲液中保温反应后,根据测量数据画出标准曲线。对于PGⅠ、PGⅡBmax/B0分别为72.0和61.5,非特异结合分别小于1.3%和小于1.6%,灵敏度均为0.5ng/mL,批内CV分别为5.5%和6.8%,批间CV分别为12.0%和13.5%,回收率分别为98.5%和97.9%。测定40例胃癌组及40名正常组血清PGⅠ和PGⅡ,结果显示,胃癌血清PGⅠ低于正常组(P<0.001),PGⅡ高于正常组(P<0.01),PGⅠ/PGⅡ比值低于正常组(P<0.001)。新建PGⅠ、ⅡEIA与现行PGⅠ、ⅡIRMA具有良好的相关性。

^(125)I标记紫杉醇的方法

采用改良的氯胺T法,先用稳定的NaI与紫杉醇(Paclitaxel)作用,再以放射性Na125I标记紫杉醇,建立125I标记紫杉醇的方法。采用纸层析及HPLC测定标记产物的标记率、纯化后的放化纯度,采用纸层析法测定标记产物在不同温度及不同的储存溶剂中的体外稳定性,红外光谱鉴定产物。结果显示,采用改良氯胺T法标记率约63.1%±5.7%,放化纯度约96.3%±1.3%;标记物储存于4℃生理盐水或乙醇储存体系中241、20 h,放化纯度分别>95%和约90%;在血浆中稳定性也较好,在4、37℃放置24 h,放化纯度分别为92.3%±0.4%、89.5%±0.6%。以上结果表明,改良氯胺T法标记紫杉醇具有方法简便、标记率高、标记产物稳定性较好的特点,能够满足放射性示踪实验的要求。

^(131)I-2F7抗体在荷小细胞肺癌裸鼠体内分布及其对肿瘤的生长抑制作用

目的观察^(131)I-2F7抗体对荷小细胞肺癌裸鼠模型的肿瘤生长抑制作用,并分析其在裸鼠体内的分布、靶向性和药代动力学。方法用氯胺T法制备^(131)I-2F7抗体,制备荷H128小细胞肺癌BALB/c裸鼠模型,15只荷瘤裸鼠尾静脉注射^(131)I-2F7抗体7．4 MBq,分别在不同时间测量肿瘤组织及各器官的放射性,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)。将20只荷瘤裸鼠随机分成4组:①生理盐水对照组,②单纯2F7抗体治疗组,③单纯^(131)I治疗组和④^(131)I-2F7抗体治疗组。尾静脉注射相应试剂后观察24 d,比较肿瘤的体积、质量,计算抑瘤率。结果给药36 h肿瘤组织的放射性最强,为(6．45±0．33)%ID/g,此时肿瘤/血液放射性比值为2．63,肿瘤/肝放射性比值为4．13。给药24 d后,肿瘤体积和质量分别为①组:(3．431±0．667)cm^3,(6．441±1．234)g;②组:(2．964±0．263)cm^3,(5．876±0．620)g;③组:(2．674±0．897)cm^3,(5．689±1．605)g;④组:(0．746±0．153)cm^3,(1．602±0．194)g。^(131)I-2F7抗体治疗组与其他各组间差异有显著性(P＜O．05)。结论^(131)I-2F7抗体能有效抑制裸鼠小细胞肺癌的生长,对小细胞肺癌治疗有潜在的应用前景。

硒与肿瘤 Ⅲ、植瘤小鼠给抑瘤剂量硒后胞浆中^(75)Se的分布与含硒蛋白变化

植H615肝癌实体瘤的615纯种小鼠,于植瘤后第15天开始每隔5天腹腔注射2ugSe/g体重的亚硒酸钠及示踪剂量^(75)Se,给硒6次后处死,通过葡聚糖凝胶层析观察^(75)Se在红细胞、肝及瘤细胞胞浆中的分布。结果发现:胞浆中不仅GPX上结合有硒,也存在着其它的含硒蛋白质;营养水平的硒和抑瘤水平的硒在红细胞、肝及瘤胞浆中的分布情况不同;同一水平的硒在植瘤和未植瘤鼠上述胞浆内的分布也不同。并伴有GPX和其它含硒蛋白质改变。

鼻咽癌患者血清β_2-微球蛋白含量的观察

本文对53例未经治疗鼻咽癌患者,血清β_2-MG含量测定,平均值为3.83±3.7μg/ml((?)+SD),另45例经过临床治疗症状改善者,血清β_2-MG平均为1.50±0.81μg/ml((?)±SD),两组之间有明显差异(P<0.01)。鼻咽癌及Hela细胞在体外培养过程中,亦见随着细胞的增殖可以不断合成β_2-MG,故可以推测鼻咽癌病人血清中β_2-MG的升高,可能来源于癌细胞的合成和释放,但非特异性。

NCI-H446细胞的^(125)Ⅰ-[Tyr^3]octreotide受体分析

目的 :探讨小细胞肺癌与 [Tyr3 ]octreotide (TOC)的亲和力。方法 :用氯胺T方法标记的12 5I-TOC作为配基 ,检测小细胞肺癌细胞株NCl-H4 4 6与其结合的受体位点数及亲和常数。结果 :氯胺T法标记的12 5I-TOC经SephadexG - 10纯化后放化纯大于 95 % ;受体分析显示NCI-H4 4 6表达的生长抑素受体多 (Bmax =1 17× 10 5受体位点 /细胞 ) ,与12 5I-TOC亲和力强 (Kd =0 5 8nM)。结论 :TOC的标记物可用于小细胞肺癌肿瘤的受体显像及放射治疗。

13例儿童消化道重复畸形的影像学分析

目的:探讨儿童消化道重复畸形的影像学表现特征,提高其诊断水平。材料和方法:回顾性分析经手术病例证实的13例消化道重复畸形的X线和CT(13例)、超声(11例)和SPECT(3例)的表现。结果:13例中,发生在食道、十二指肠和直肠各1例、空肠2例、回肠3例和回盲部5例。其中囊肿型11例,管型2例。1例并发肠套叠、1例并发腹部良性间叶瘤、2例分别为囊肿穿孔和回肠远端闭锁及腹水,3例并发炎症并与周围组织粘连。结论:儿童消化道重复畸形的临床和影像学表现检查多种多样,正确选择影像学检查并结合临床综合分析,可提高其术前诊断水平。

比索洛尔对心肌梗死患者淋巴细胞β受体影响的初步研究

本文用随机方法观察比索洛尔（Ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ）药物对３０例心肌梗死患者的外周血淋巴细胞β受体密度（用放射性配基──受体结合分析方法测定）的影响。结果揭示：服药３个月后患者外周血淋巴细胞β受体密度的高低可作为是否继续用药的依据。即当β受体密度上调时可能服用该药有效；当β受体密度无明显变化时则提示该药疗效差。